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核酸适配子的结构特征及其对结合性能的影响
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作者 张洪丽 王婷 张焜和 《传感器与微系统》 CSCD 北大核心 2023年第8期1-5,10,共6页
核酸适配子是从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出的生物分子特异性配体,其与靶分子的结合性能类似于抗体,但具有热稳定性、制备方便、易于进行结构修饰等优点,因而广泛应用于生物医药领域的分子检测。核酸适配子的结构直接影响... 核酸适配子是从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出的生物分子特异性配体,其与靶分子的结合性能类似于抗体,但具有热稳定性、制备方便、易于进行结构修饰等优点,因而广泛应用于生物医药领域的分子检测。核酸适配子的结构直接影响其与靶分子的结合性能,包括一级结构、二级结构、三级结构,以及G—四联体等特殊结构。核酸适配子的高级结构不但受其自身结构特点的影响,也受其周围环境理化因素的影响。深入了解核酸适配子结构特点及其对结合靶标影响,进而进行针对性结构修饰及截短,可获得更优性能的核酸适配子,促进其实际应用,并为分析其作用机制提供依据。基于核酸适配子结构特点而设计的适配子传感器,可获得良好的靶标检测性能。 展开更多
关键词 核酸适配子 结构特点 结构修饰 结构影响因素 分子检测 适配子传感器
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纳米材料的适配子传感器及其在医学检测中的应用
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作者 黎子华 王婷 张焜和 《传感器与微系统》 CSCD 北大核心 2023年第11期1-5,共5页
通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术体外筛选产生的适配子,可以高特异性和高亲和力结合生物靶分子,因具有分子体积小、稳定性好、修饰方便等优点,在生物分子检测中应用前景良好。与此同时,纳米材料因其具有表面效应、体积效应和量... 通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术体外筛选产生的适配子,可以高特异性和高亲和力结合生物靶分子,因具有分子体积小、稳定性好、修饰方便等优点,在生物分子检测中应用前景良好。与此同时,纳米材料因其具有表面效应、体积效应和量子尺寸效应,各种具有独特性能的纳米材料在生物领域广泛应用。因此,适配子与纳米材料的结合和应用为医学检测领域提供前所未有的发展机遇。本文在简要介绍适配子和纳米技术的基础上,重点介绍基于纳米材料的适配子传感器及其在医学检测中的应用。 展开更多
关键词 适配子 纳米材料 适配子传感器 医学检测
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筛选获得的血型抗原结合黏附素(BabA)适配子可阻断幽门螺杆菌(H.pylori)在小鼠胃内的定植
3
作者 袁媛 李卫鹏 +2 位作者 周晓静 孙伟莉 唐晓磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期793-800,共8页
目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-... 目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合BabA的单链脱氧核苷酸(ssDNA)适配子;酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)法检测并评估候选适配子的特征;随后在体外细胞水平和小鼠感染模型中,分别采用流式细胞术和菌落计数验证ssDNA适配子阻断H.pylori黏附的效果,同时利用ELISA检测小鼠胃黏膜细胞匀浆中白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10和IL-4的水平。结果提取H.pylori ATCC 43504基因组并构建了pET32a-BabA质粒,诱导后并纯化重组蛋白相对分子质量(Mr)约为39 000;经肽指纹图谱(PMF)分析其与BabA蛋白一致;以此为靶标运用SELEX筛选获得5个候选适配子,经分析鉴定适配子A10、 A30和A42识别相同位点,A3和A16与上述三个适配子各自识别不同的位点。适配子体外能够显著阻断H.pylori的黏附,且动物模型实验证明适配子经灌胃处理后,对胃黏膜的H.pylori定植有阻断效果,且能够减轻诱导的炎症反应,适配子治疗组胃黏膜匀浆中IL-4、 IL-6、 IL-8和TNF-ɑ水平低于模型组。结论 适配子特异性结合BabA封闭H.pylori与胃黏膜上皮细胞的黏附能够阻断H.pylori在胃黏膜的定植。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 血型抗原结合黏附素(BabA) 指数富集的配体系统进化技术(SELEX) 适配子 定植
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随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立 被引量:17
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作者 詹林盛 邵宁生 +2 位作者 彭剑淳 孙红琰 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期151-155,共5页
指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁... 指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % . 展开更多
关键词 随机单链DNA文库 SELEX技术 筛选 寡核苷酸适配子 丙型肝炎病毒核心蛋白
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适配子识别技术在真菌毒素快速分析中的应用 被引量:17
5
作者 杨锡辉 孔维军 +2 位作者 杨美华 赵明 欧阳臻 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第2期297-306,共10页
适配子是近几年来通过指数富集配基的系统进化技术(SELEX)体外筛选得到的一类与目标分子高特异性结合的寡聚核苷酸片段。适配子作为一个优于抗体的新型识别分子,已在食品快速检验、环境检测、新药研发、临床诊断和治疗以及毒理研究等领... 适配子是近几年来通过指数富集配基的系统进化技术(SELEX)体外筛选得到的一类与目标分子高特异性结合的寡聚核苷酸片段。适配子作为一个优于抗体的新型识别分子,已在食品快速检验、环境检测、新药研发、临床诊断和治疗以及毒理研究等领域展示了良好的应用前景。本文阐述了适配子识别靶物质的结构基础及其特性,归纳了目前已筛选出的真菌毒素适配子序列,总结了适配子在真菌毒素前处理,适配子光学分析技术和电化学分析技术在单种和多种真菌毒素检测中的应用突破,并展望了适配子识别技术在真菌毒素分析领域的发展趋势。 展开更多
关键词 核酸适配子 真菌毒素 评述
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丙型肝炎病毒NS3螺旋酶寡核苷酸适配子的筛选与鉴定 被引量:12
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作者 詹林盛 卓海龙 +2 位作者 王会中 彭剑淳 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期245-250,共6页
为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定... 为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定和Clustal W软件包分析适配子一级结构. 经过8轮循环筛选,随机ssDNA库与HCV NS3h的结合率从0.45%上升到29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分5个家族,其中4个家族具有共同的保守序列. 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子H2与HCV NS3h特异结合的亲和力最高,Kd值为140 nmol/L. 适配子H2 (10 μmol/L)在体外对HCV NS3h的活性具有一定的抑制作用,抑制率达44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗HCV NS3h的寡核苷酸适配子. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3螺旋酶 SELEX 寡核苷酸适配子
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河豚毒素DNA适配子的制备及应用 被引量:9
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作者 邵碧英 陈彬 +3 位作者 陈文炳 杨方 缪婷玉 彭娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第24期205-208,共4页
人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配... 人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配子A3的二级结构主要为茎环结构,与TTX的亲和力为1.254。对适配子和TTX结合的磷酸盐缓冲液p H值、荧光染料结合时间进行优化,结果表明,最适p H值为7.5,最佳结合时间为10 min。建立的快速筛选检测TTX的DNA适配子-荧光染料法对TTX的检出限为10-6 mo1/L。 展开更多
关键词 河豚毒素 适配子 荧光染料 检测
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哈维氏弧菌适配子的SELEX筛选及其亲和特异性研究 被引量:10
8
作者 郑江 郝聚敏 +1 位作者 宋林生 刘瑞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第7期704-711,共8页
哈维氏弧菌是水产养殖中的重要条件致病菌,对其进行快速、准确地检测和鉴定是相关病害防治的基础和关键.适配子具有亲和力高、特异性强、稳定性好等优点,在微生物的检测和鉴定方面呈现出广泛的应用前景.本研究以哈维氏弧菌为靶目标,采用... 哈维氏弧菌是水产养殖中的重要条件致病菌,对其进行快速、准确地检测和鉴定是相关病害防治的基础和关键.适配子具有亲和力高、特异性强、稳定性好等优点,在微生物的检测和鉴定方面呈现出广泛的应用前景.本研究以哈维氏弧菌为靶目标,采用SELEX技术,即指数级富集配体的系统进化技术,筛选其特异性适配子.经15轮筛选后,随机ssDNA文库的亲和力从3.51上升到58.95,提高了15.8倍.筛选出的适配子富集库经克隆、测序后得到52条不同序列,根据同源性将这些序列分成8个家族,其中第1和第2家族的适配子数量最多,超过总数的50%.通过深入分析,筛选出6个对哈维氏弧菌有显著亲和特异性(P<0.01)的高频适配子,其中5个高频适配子(S1、S25、S26、S27、S35)对哈维氏弧菌有较高的亲和力,相应的亲和常数Kd值分别为(32.6±7.1)、(45.3±10.1)、(24.7±5.8)、(34.8±5.6)、(12.9±4.0)nmol/L.本文还对高频适配子的产生机制及其应用价值进行了探讨.本文首次筛选出了对哈维氏弧菌具有较高亲和特异性的适配子,为后续利用适配子进行哈维氏弧菌的检测和鉴定奠定了基础. 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 适配子 亲和力 亲和常数 SELEX
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核酸适配子的研究进展与应用展望 被引量:9
9
作者 王红梅 余若祯 +2 位作者 全占军 车飞 林海鹏 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期558-560,共3页
核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸... 核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景。鉴于其特有的性质,它们将在环境毒理研究及相关领域,如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景。 展开更多
关键词 环境污染 核酸适配子 环境毒理学
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“适配子-PLGA纳米粒”靶向超声/光声相变造影剂的制备 被引量:7
10
作者 张斌 冉海涛 +2 位作者 王志刚 苏蕾 郝兰 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2014年第11期1609-1613,共5页
目的研制一种适配子偶联的包裹纳米金棒和液态氟碳的PLGA纳米粒。方法采用双乳化法制备包裹纳米金棒及全氟己烷(PFH)的PLGA纳米粒(GNP);用碳二亚胺法将适配子与PLGA纳米粒连接获得"适配子-PLGA纳米粒"靶向相变造影剂(AP-GNP)... 目的研制一种适配子偶联的包裹纳米金棒和液态氟碳的PLGA纳米粒。方法采用双乳化法制备包裹纳米金棒及全氟己烷(PFH)的PLGA纳米粒(GNP);用碳二亚胺法将适配子与PLGA纳米粒连接获得"适配子-PLGA纳米粒"靶向相变造影剂(AP-GNP)。光镜、激光共聚焦显微镜及电镜下观察及检测AP-GNP基本性质;激光共聚焦显微镜下及流式细胞术观察及检测适配子与纳米粒连接情况;以激光仪辐照AP-GNP观察其光致相变情况;观察AP-GNP与乳腺癌细胞MCF-7特异性结合情况。结果成功制备适配子修饰的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒,其平均粒径为(472.43±25.82)nm,适配子与纳米粒的连接率为达97.98%;激光辐照AP-GNP后,光致相变效果明显;AP-GNP粘附于MCF-7细胞周围,未修饰适配子GNP未见明显特异性结合。结论成功制备偶联的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒,其光致相变效果明显,靶向性能良好。 展开更多
关键词 造影剂 适配子 相变 纳米技术
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SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立 被引量:10
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作者 李真真 韩跃武 +3 位作者 刘玲玲 韩亚萍 路艳 王春霞 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期42-46,共5页
目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反... 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。 展开更多
关键词 胃癌细胞 SELEX 适配子 随机ssDNA文库
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适配子生物传感器对青霉素的快速检测 被引量:6
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作者 范婷 张娟琨 +3 位作者 李敏 傅晶晶 孙坤 李欧文 《生物加工过程》 CAS CSCD 2011年第3期41-46,共6页
将玻碳电极进行阳极氧化和氨基化修饰,通过碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化作用将青霉素适配子结合在电极表面。该适配子电化学生物传感器分子识别能力强、无放射性标记、检测速率快,青霉素类的最佳检测范围是2.81~... 将玻碳电极进行阳极氧化和氨基化修饰,通过碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化作用将青霉素适配子结合在电极表面。该适配子电化学生物传感器分子识别能力强、无放射性标记、检测速率快,青霉素类的最佳检测范围是2.81~281 nmol/L,最低检测限为2.81 nmol/L,检测时间为5 m in。 展开更多
关键词 适配子 生物传感器 青霉素 电极
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抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定 被引量:5
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作者 郭克泰 严馨蕊 +3 位作者 黄国锦 徐春晓 柴映爽 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期730-733,共4页
应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库 ,以TNF为靶蛋白 ,经过12轮SELEX筛选 ,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子 ,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活... 应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库 ,以TNF为靶蛋白 ,经过12轮SELEX筛选 ,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子 ,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活性 ;用鼠L92 9细胞检测适配子拮抗TNF活性。结果显示 ,所筛选到的寡聚DNA能与TNF_α高亲和力结合 ,并能在细胞培养中拮抗TNF_α的细胞毒活性。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α DNA适配子 筛选 鉴定
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钛表面固定特异性识别内皮祖细胞的多肽适配子 被引量:5
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作者 陈卓玥 李全利 +4 位作者 赵元聪 陈佳龙 游天雪 熊开琴 黄楠 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期100-104,共5页
在钛表面固定可与循环血液中的内皮祖细胞(EPC)特异性结合的多肽适配子,构建内皮祖细胞的特异性识别表面,用于心血管材料的表面改性.首先,采用固相合成法合成可与EPC特异性结合的多肽适配子,其序列为TPSLEQRTVYAK,并在羧基端进行生物素... 在钛表面固定可与循环血液中的内皮祖细胞(EPC)特异性结合的多肽适配子,构建内皮祖细胞的特异性识别表面,用于心血管材料的表面改性.首先,采用固相合成法合成可与EPC特异性结合的多肽适配子,其序列为TPSLEQRTVYAK,并在羧基端进行生物素修饰;然后,采用磷酸处理钛表面,在钛表面获得化学键合的羟基,该羟基化表面与3-氨丙基三乙氧基硅烷反应,在钛表面获得游离的氨基,进一步通过碳二亚胺(EDC)介导,在钛表面接枝上生物素;最后,通过生物素-亲和素识别体系,实现EPC特异性多肽适配子在钛表面的固定.采用场发射扫描电子显微镜(SEM)、漫反射红外光谱(DR-FTIR)和免疫荧光分析等手段对样品进行了表征.本研究为多肽适配子在材料表面的固定提供了一种有效的方法,为进一步的生物医学应用研究提供了基础. 展开更多
关键词 多肽适配子 内皮祖细胞 表面改性
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适配子修饰靶向PLGA纳米基因载体的构建 被引量:5
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作者 焦举 邹琼 +3 位作者 邹旻红 徐燕 李小平 张勇 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期100-105,共6页
化学合成了功能性三嵌段复合物乳酸乙醇酸共聚物-聚乙二醇-适配子(PLGA-PEG-Apt)。使用双乳化挥发法制备包裹DNA片段的PLGA-PEG-Apt新型纳米基因药物载体,表征检测显示:制备的纳米基因载体粒径为(225.2±8.1)nm,Zeta电位约(-35.5... 化学合成了功能性三嵌段复合物乳酸乙醇酸共聚物-聚乙二醇-适配子(PLGA-PEG-Apt)。使用双乳化挥发法制备包裹DNA片段的PLGA-PEG-Apt新型纳米基因药物载体,表征检测显示:制备的纳米基因载体粒径为(225.2±8.1)nm,Zeta电位约(-35.5±-3.3)mV。扫描电子显微镜下纳米颗粒形态呈圆形,表面光滑,粒径分布较均匀。纳米粒子对TFO的包封率为(25.4±3.1)%(n=3),载药量为(1.34±0.16)μg/mg。体外释放实验研究结果显示持续释放过程达23 d,且PLGA-PEG-Apt纳米粒子呈突释之后的持续缓释过程。细胞水平实验结果显示,A10适配子修饰的纳米基因载体能更多进入靶向的前列腺癌细胞株,进而发挥其抗前列腺癌增殖的作用。该研究成功制备了靶向PLGA纳米基因载体,结果满意。 展开更多
关键词 乳酸乙醇酸共聚物 聚乙二醇 适配子 纳米粒子 基因载体
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功能化核酸适配子传感器的研究进展 被引量:8
16
作者 王昆 陶占辉 +1 位作者 徐蕾 刘亚青 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第2期298-304,共7页
适配子生物传感器由于其检测灵敏度高、选择性好并具有良好的稳定性和广泛的适用范围等一系列优点在近年来得到了迅速发展,极大地促进了生物传感器的快速发展。本文主要针对利用3种检测方法即电化学、荧光和比色法发展的适配子传感器的... 适配子生物传感器由于其检测灵敏度高、选择性好并具有良好的稳定性和广泛的适用范围等一系列优点在近年来得到了迅速发展,极大地促进了生物传感器的快速发展。本文主要针对利用3种检测方法即电化学、荧光和比色法发展的适配子传感器的研究进展进行综述,并对适配子传感器的发展进行了展望。 展开更多
关键词 适配子 生物传感器 荧光 电化学 比色 综述
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基于胶体金检测核酸适配子与蛋白相互作用的新方法 被引量:4
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作者 刘中成 赵丽健 +4 位作者 刘利鹏 张艳芬 王南南 陈瑶 王向欢 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第4期638-645,共8页
基于核酸适配子对靶蛋白的高特异性及胶体金比色法的高度灵敏性,建立了一种分析核酸适配子与靶蛋白亲和力以及简便快速检测蛋白质的新方法.核酸适配子保护的胶体金在高盐条件下可保持稳定,靶蛋白与胶体金竞争结合适配子,使胶体金发生聚... 基于核酸适配子对靶蛋白的高特异性及胶体金比色法的高度灵敏性,建立了一种分析核酸适配子与靶蛋白亲和力以及简便快速检测蛋白质的新方法.核酸适配子保护的胶体金在高盐条件下可保持稳定,靶蛋白与胶体金竞争结合适配子,使胶体金发生聚沉,呈现颜色变化,可通过检测A520值分析适配子与靶蛋白的亲和力以及蛋白浓度.通过对适配子浓度、靶蛋白浓度、共孵育时间、竞争反应时间和氯化钠浓度等关键因素进行优化,确定了最佳检测条件. 展开更多
关键词 核酸适配子 靶蛋白 胶体金 亲和力
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应用核酸适配子检测细胞因子的新方法-ELONA法 被引量:7
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作者 严馨蕊 高绪文 +1 位作者 姚立红 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期679-682,共4页
以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyEx... 以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment)方法从随机RNA库中筛选到与hTNF α特异结合的RNA适配子。根据其序列 ,用体外转录方法合成生物素标记的RNA适配子 ,并对其进行了氨基修饰以增加其稳定性。以hTNF α的单克隆抗体为捕获分子 ,生物素标记的hTNF α特异性RNA适配子为检测分子建立了ELONA方法 ,并对这种检测方法的灵敏度、精密度和准确度等进行了分析。同时用ELONA和ELISA方法检测了正常人血清中的hTNF α水平 ,并对检测结果进行比较。结果显示 ,ELONA方法的灵敏度为 10 0pg mL ,具有较好的精密度和准确度。ELONA法的检测结果与ELISA法检测结果基本一致。该方法适用于血清。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子 核酸适配子 细胞因子 酶联寡聚核苷酸吸附试验 生物素标记
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癌胚抗原特异性寡核苷酸适配子的体外筛选及其意义 被引量:7
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作者 王立峰 魏嘉 +3 位作者 殷海涛 钱晓萍 禹立霞 刘宝瑞 《医学研究生学报》 CAS 2007年第9期903-907,共5页
目的:通过体外筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性适配子,为高表达CEA肿瘤的靶向奠定基础。方法:构建长度为81 bp的随机ssDNA文库,体外筛选、富集CEA特异性适配子,通过配体介导的靶蛋白纯化实验检测经筛选的适配子与纯化蛋白结合;提取LS174T... 目的:通过体外筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性适配子,为高表达CEA肿瘤的靶向奠定基础。方法:构建长度为81 bp的随机ssDNA文库,体外筛选、富集CEA特异性适配子,通过配体介导的靶蛋白纯化实验检测经筛选的适配子与纯化蛋白结合;提取LS174T细胞总蛋白,免疫共沉淀检测经筛选的适配子与细胞总蛋白的结合。结果:经体外7轮筛选富集及筛选条件的优化,配体介导的靶标分离实验证实了筛选出的适配子与纯化CEA蛋白的结合;免疫沉淀及Westem blot证实了其识别并特异性结合天然状态的CEA。结论:经过体外7轮筛选,证实了所获得的CEA适配子可特异性地与纯化CEA和天然状态的CEA蛋白结合,为后续高表达的CEA肿瘤的靶向诊断和治疗奠定了初步的实验基础。 展开更多
关键词 适配子 癌胚抗原 靶向治疗
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基于“G-4联体”适配子探针的电化学发光传感器检测Pb^(2+) 被引量:8
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作者 魏小平 杨峰 +1 位作者 丁璠 李建平 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期942-947,共6页
在金电极表面,通过Au-S键接上具有"茎-环"结构的发夹适配子探针(Hairpin aptamer probe,HAP);当加入Pb2+时,促使发夹结构适配子的"茎-环"结构打开,形成G-4联体,暴露出的3'-NH2与CdS量子点(QDs)结合,导致电化学... 在金电极表面,通过Au-S键接上具有"茎-环"结构的发夹适配子探针(Hairpin aptamer probe,HAP);当加入Pb2+时,促使发夹结构适配子的"茎-环"结构打开,形成G-4联体,暴露出的3'-NH2与CdS量子点(QDs)结合,导致电化学发光,据此可构建测定Pb2+的量子点电化学发光"Turn on"型传感器。对电化学发光传感器进行了表征。在2.0×10-10~5.0×10-8mol/L范围内,Pb2+浓度与其响应的ECL信号呈线性关系,检出限为3.74×10-11mol/L。传感器有良好的选择性、稳定性及重现性。 展开更多
关键词 适配子 铅Ⅱ离子传感器 电化学发光 量子点 信号增强型 G-4联体
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