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逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法检测呼吸道合胞病毒及其亚型感染 被引量：1
1
作者 陈小芳 楼永良 +1 位作者 董琳 吕建新 《温州医学院学报》 CAS 2005年第3期201-206,共6页
目的:建立一种呼吸道合胞病毒(RSV)及其亚型核酸检测方法并初步应用于临床,检测浙南地区RSV及其亚型的流行情况。方法:根据RSVG蛋白基因核苷酸序列设计引物和探针,通过逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法(RT-PCR-ELSH)随机检测了浙南... 目的:建立一种呼吸道合胞病毒(RSV)及其亚型核酸检测方法并初步应用于临床,检测浙南地区RSV及其亚型的流行情况。方法:根据RSVG蛋白基因核苷酸序列设计引物和探针,通过逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法(RT-PCR-ELSH)随机检测了浙南地区连续两年冬春季期间202例急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽部分泌物中RSV及其亚型的病毒核酸;与病毒分离培养、直接免疫荧光法(DFA)、OligoDetect试剂盒比较探讨其临床实用性。结果:202例标本中RSV阳性123例,阳性检出率为60.9%,2002～2003年和2003～2004年冬春季分别为68.2%和52.6%;两个冬春季都以RSVA亚型为主,占78.9%,2002～2003年冬春季A亚型占RSV阳性标本中的76.7%,2003～2004年A亚型占82.0%;RT-PCR-ELSH阳性检出率与其他三种方法的阳性检出率差异无显著性(P>0.05)。结论:RT-PCR-ELSH法用于检测RSV及其亚型,是一种灵敏度高、特异性强,方便、快速的方法,非常适用于临床标本的大批量检测和流行病学调查;RSV是引起浙南地区冬春季婴幼儿急性下呼吸道感染的最主要的病原体,并以A亚型为主。 展开更多
关键词 逆转录-聚合酶链反应 酶联夹心杂交 呼吸道合胞病毒
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逆转录—聚合酶链反应—酶联夹心杂交法定量检测人IL-6mRNA
2
作者 邹立林 吕建新 《检验医学教育》 2002年第1期43-46,共4页
目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录—聚合酶链反应—微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL-6mRNA的方法。方法:从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探... 目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录—聚合酶链反应—微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL-6mRNA的方法。方法:从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交,用链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物系统检测杂交信号。结果:该方法检测IL-6mRNA的灵敏度明显高于逆转录—聚合酶链反应—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于细胞因子mRNA的定量检测。 展开更多
关键词 酶联夹心杂交法 定量检测 IL-6MRNA 逆转录-聚合酶链反应 白细胞介素-6 核糖核酸
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逆转录-聚合酶链反应检测鼠肝炎病毒方法的建立 被引量：4
3
作者 姚玉霞 丛斌 +2 位作者 彭郁葱 尤红煜 刘福英 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1998年第2期13-17,共5页
建立特异、灵敏的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，结合碱性磷酸酶标记的探针杂交检测鼠肝炎病毒（MHV），采用MHV－3，MHV－A59病毒株感染DBT细胞，37℃培养，待细胞出现病变时收集提取病毒RNA。依据MHV基因序列设计一对高度保守... 建立特异、灵敏的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，结合碱性磷酸酶标记的探针杂交检测鼠肝炎病毒（MHV），采用MHV－3，MHV－A59病毒株感染DBT细胞，37℃培养，待细胞出现病变时收集提取病毒RNA。依据MHV基因序列设计一对高度保守区特异性引物，进行RT－PCR扩增，结果可见147bp的鼠肝炎病毒产物特异扩增带。敏感性实验检测到10pg的鼠肝炎病毒RNA，同时用ELISA方法对照。结果提示应用RT—PCR技术结合探针杂交检测鼠肝炎病毒。具有简便、快速、灵敏等优势。本研究在国内尚未见报道。 展开更多
关键词 鼠肝 肝炎病毒 探针杂交 逆转录-聚合酶链反应 RT-PCR 扩增 RNA 特异性引物 病毒株 病变
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较 被引量：1
4
作者 姜红涛 姚秀林 《中外医疗》 2015年第8期192-193,共2页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,好=8.1,P<0.005。结论 通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 细胞培养法 流感病毒
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聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测军团菌的实验研究 被引量：3
5
作者 刘广华 苏敏 +2 位作者 谢风 何成彦 孙志科 《中国卫生工程学》 CAS 2005年第6期356-357,共2页
关键词 聚合酶链反应-酶联免疫吸附法 抗体检测 军团菌 实验研 PCR产物 分子生物学技术 血清特异性 实验室检查 临床体征 细菌培养
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聚合酶链反应-酶联免疫法筛选孢子丝菌特异性探针 被引量：1
6
作者 孙田 刘晓明 张振颖 《实用皮肤病学杂志》 2014年第6期403-405,410,共4页
目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'... 目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'、M85053及AF117945)进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数(EI)值。结果 PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上;在相同的ELISA条件下,探针U26852显色最强,EI值最高。结论针对28Sr RNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。 展开更多
关键词 孢子丝菌 探针 聚合酶链反应-酶联免疫法
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聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价
7
作者 杨正林 傅明德 +3 位作者 杜琼 杨明清 乔国蓉 唐蓉 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期136-139,共4页
目的　对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法　收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分... 目的　对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法　收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果　 10 0份临床证实无结核病的体液标本经抗酸染色和 PCR电泳 ,分别有 1例和 2例假阳性 ,但经培养和 PCR微孔板杂交法未查出阳性 ;其余 10 30份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果 ,以 PCR微孔板杂交阳性检出例数最高 ( 481/ 10 30 ) ,其次为 PCR电泳 ( 40 6 / 10 30 )、培养 ( 36 5 /10 30 )以及抗酸染色 ( 2 5 6 / 10 30 ) ;χ2 检验结果显示 ,PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著性差异 ( P<0 .0 0 83及 P<0 .0 0 17)。结论　 PCR-微孔板杂交方法是特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法 。 展开更多
关键词 聚合酶链反应-微孔板杂交法 结核杆菌 诊断
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半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体
8
作者 凌文利 李欣欢 +1 位作者 张益康 陈荣安 《南华大学学报（医学版）》 2002年第2期147-149,共3页
目的　应用半巢式聚合酶链反应 -微孔板杂交法 (半巢式PCR -MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体 (Ct)。方法　分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增。将下游引物用生物素标记 ,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后 ,扩增产物被包被有... 目的　应用半巢式聚合酶链反应 -微孔板杂交法 (半巢式PCR -MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体 (Ct)。方法　分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增。将下游引物用生物素标记 ,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后 ,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获 ,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交。然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应 ,经过酶底物显色 ,通过测定吸光度来判断结果。结果　主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感 ,比半巢式PCR产物酶切后电泳法高 1 0倍 ,半巢式PCR -MPH法特异性强。该法重复法好 ,批内CV值 <1 0 % ,批间CV值 <1 5 % ;该法在包被浓度为 4mg L、产物 1∶2 0稀释、与微孔板结合 2 0min后加入 1 0pmol mL探针杂交 3 0min ,用 1∶3 0 0 0稀释的酶显色条件下有最佳结果。结论　该法操作简便、敏感性和特异性均高 ,无放射性和EB染料污染 ,适于临床样本的常规检测。 展开更多
关键词 半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法 沙眼衣原体 限制性内切酶 半巢式PCR-MPH 泌尿生殖道感染
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聚合酶链反应-直接测序法在强直性脊柱炎患者HLA-B27检测中的应用 被引量：5
9
作者 王平均 孙灵迪 +2 位作者 梅传忠 武晓茜 邵先安 《中国实验诊断学》 2015年第11期1898-1900,共3页
目的探讨聚合酶链反应-直接测序法(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)检测人类白细胞抗原B27(human leukocyte antigen B27,HLA-B27)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中的价值。方法应用PCR-... 目的探讨聚合酶链反应-直接测序法(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)检测人类白细胞抗原B27(human leukocyte antigen B27,HLA-B27)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中的价值。方法应用PCR-SBT法和临床常用的IMS-ELISA法对120例疑似AS患者外周血进行HLA-B27检测。以SPSS17.0软件的配对χ2检验和受试者工作特征曲线下面积对两种方法检测HLA-B27在AS诊断中的价值进行评价。结果 120例疑似AS患者中,PCR-SBT和IMS-ELISA法HLA-B27检测阳性率分别为45.83%(55/120),37.50%(45/120)。两种方法检测HLA-B27有统计学差异(P=0.031)。PCR-SBT法敏感度和特异度分别为96.36%,96.92%;IMS-ELISA法的敏感度和特异度分别为69.09%,89.23%。两者的AUC分别为0.966和0.792。结论与传统的IMS-ELISA法相比,在AS的临床诊断中PCR-SBT法检测HLA-B27的敏感度和特异度更高,方法更优。 展开更多
关键词 聚合酶链反应-直接测序法 磁珠酶联免疫法 人类白细胞抗原B27 强直性脊柱炎
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微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA 被引量：1
10
作者 池永斌 吕建新 陆永绥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1289-1291,共3页
目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术 ,对人单核细胞分泌的TNF -αmRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端带有氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,... 目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术 ,对人单核细胞分泌的TNF -αmRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端带有氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,而且是“竖直”地包被在微孔内 ,另一个为检测探针 ,3’端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA ,RT -PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中 ,加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后加入亲和素 -辣根过氧化物酶 (avidin -HRP)显色系统催化底物显色 ,4 5 0nm波长下检测吸光度进行定量。结果 :该方法检测TNF -αmRNA的灵敏度 ,明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,而且具有良好的重复性 ,等量PCR产物作 10个复孔 ,吸光度的CV值为 7 2 % ,批间的CV值为 9 1%。在本实验中 ,我们首次尝试着用客观的数据来表示正常人中 1× 10 6个PBMCs中TNF -αmRNA的平均表达量 ,发现该表示方法直观明了 ,结果稳定 ,而且简便可行 ,不需要特殊的仪器及昂贵的试剂。结论 :本方法具有高灵敏度、高特异性、精确、简单易操作 ,结果数据化等优点 。 展开更多
关键词 酶联夹心杂交 聚合酶链反应 肿瘤坏死因子
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逆转录-聚合酶链反应酶联夹心杂交法半定量检测人白细胞介素-6 m RNA 被引量：1
11
作者 邹立林 吕建新 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-51,共2页
关键词 逆转录聚合酶链反应-酶联夹心杂交法 半定量检测 白细胞介素6 MRNA
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微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA
12
作者 许艳芳 吕建新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1950-1952,共3页
目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,对人iNOS -mRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端连接氨基 ,能与微孔板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔中 ,另... 目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,对人iNOS -mRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端连接氨基 ,能与微孔板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔中 ,另一个为检测探针 ,3’端带有生物素标记。用脂多糖 (LPS)刺激人外周血单个核细胞 2 4h后 ,提取巨噬细胞总RNA ,进行RT -PCR扩增 ,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内 ,并加入检测探针进行夹心杂交 ,最后加入亲和素 -辣根过氧化物酶 (AV -HRP)及底物 ,在 4 5 0nm波长检测杂交信号。结果 :该方法检测iNOS -mRNA的灵敏度明显高于RT -PCR -琼脂糖凝胶电泳 ;特异性高 ,RT -PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现 ;精密度良好。结论 :本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化 ,适合于iNOS 展开更多
关键词 酶联夹心杂交 逆转录聚合酶链反应 一氧化氮合酶
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聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析
13
作者 黄德庄 闫惠萍 +4 位作者 王凤水 罗朝霞 贺丽香 王芳 郭雁宾 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2000年第S1期59-61,共3页
HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微... HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微,其检出率往往不能令人满意。本研究采用HCV-PCR-H.ELISA法测定血清中HCV RNA。 展开更多
关键词 ELISA 患者血清 套式聚合酶链反应法 肝炎病毒 PCR产物 杂交 抗HCV阳性 检出率 HCV感染 逆转录
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用聚合酶链反应—微孔板杂交技术检测乙型肝炎病毒DNA 被引量：1
14
作者 龚玉华 刁仁联 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期956-956,共1页
关键词 乙型肝炎病毒 DNA含量 聚合酶链反应-微孔板杂交法 检测
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乙型肝炎病毒基因定量聚合酶链反应的临床应用 被引量：1
15
作者 施蓉 顾文莉 周慧君 《临床和实验医学杂志》 2006年第9期1406-1407,共2页
关键词 聚合酶链反应 杂交法 酶联 HBVDNA 乙型肝炎病毒 戴恩颗粒 HBeAg 血清标本 HBCAB 乙肝患者 HBsAg PCR HBEAB
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聚合酶链反应检测实验动物弓形虫核酸的研究 被引量：3
16
作者 丛斌 姚玉霞 +1 位作者 尤红煜 彭郁葱 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1998年第2期9-12,共4页
建立弓形虫动物模型，常规方法提取肝、脾、肾、肺等组织DNA，应用聚合酶链反应（PCR）扩增，产物经电泳检测显示199bp的弓形虫特异带谱。并以γ－32p标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针，对扩增产物行Southern印迹分析，结果上述4种标... 建立弓形虫动物模型，常规方法提取肝、脾、肾、肺等组织DNA，应用聚合酶链反应（PCR）扩增，产物经电泳检测显示199bp的弓形虫特异带谱。并以γ－32p标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针，对扩增产物行Southern印迹分析，结果上述4种标本均出现阳性杂交带，进一步证实扩增条带是弓形虫特异DNA顺序。同时用酶标法检测显示鼠血清弓形虫抗体IgG；阳性。组织病理学检查结果，肝组织损伤较严重，肝细胞肿大，肝窦消失，脾、肾、肺组织可见轻微的病理改变。另外本文介绍一种简单PCR方法[1]，取鼠尾静脉血2μl直接进行扩增，结果与酚-氯仿法提取的DNA扩增结果一致。 展开更多
关键词 弓形虫抗体 扩增产物 阳性 肝组织损伤 肝窦 酶标法 严重 聚合酶链反应检测 杂交 酚-氯仿法
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评价荧光定量逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验方法在麻疹监测中的价值 被引量：7
17
作者 丁亚兴 田宏 +5 位作者 孙静 雷玥 黄海涛 骆晓艳 万丽霞 高志刚 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2015年第6期616-619,共4页
目的评价荧光定量逆转录-聚合酶链反应（real-time RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法在麻疹病毒感染病例中的诊断价值。方法分析2014年天津市麻疹监测信息报告管理系统报告数据,运用χ~2检验（Chi-square Test）、配对Mc Nemar... 目的评价荧光定量逆转录-聚合酶链反应（real-time RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法在麻疹病毒感染病例中的诊断价值。方法分析2014年天津市麻疹监测信息报告管理系统报告数据,运用χ~2检验（Chi-square Test）、配对Mc Nemar检验和效度分析,比较2种方法的判定价值。结果 171例麻疹疑似病例同时采集了血清和干血片标本,ELISA法检测两种标本IgM抗体阳性率分别为53.22%和49.71%,差异无统计学意义（χ~2=3.60,P=0.06）,两种标本ELISA法检测一致率为94.15%。2 512例麻疹确诊病例中,2 439例采集了血标本,ELISA法检测IgM抗体阳性率为76.38%;871例采集了咽拭子,real-time RT-PCR检测核酸阳性率为86.68%。咽拭子采样间隔在3天内的real-time RT-PCR核酸阳性率达到91.14%,3天后的阳性率只有66.26%（χ~2=72.46,P〈0.01）。血标本采样间隔在3天内的ELISA IgM抗体阳性率为71.47%,3天后达到94.14%（χ~2=118.06,P〈0.01）。检验效度分析,ELISA方法灵敏度为71.60%,特异度为85.29%,约登指数为0.57。real-time RT-PCR方法灵敏度为99.60%,特异度为67.65%,约登指数为0.67。结论 real-time RT-PCR方法更敏感,适合发病早期诊断,ELISA方法更适合发病中后期诊断。 展开更多
关键词 麻疹 酶联免疫吸附试验 逆转录-聚合酶链反应 效度
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲_3型流行性感冒病毒的比较 被引量：14
18
作者 李婵 卢亦愚 +3 位作者 严菊英 冯燕 史雯 茅海燕 《中国计划免疫》 2005年第5期360-363,共4页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒。结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份。实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50,且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 逆转录-聚合酶链反应 细胞培养法 甲3型流行性感冒病毒
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核酸夹心杂交法半定量检测人IL-1α mRNA 被引量：2
19
作者 张黎明 朱珊珊 +1 位作者 李素珍 吕建新 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期227-228,共2页
目的　建立一种半定量检测人外周血单个核细胞 (PBMC)表达IL 1αmRNA的方法。方法　确定RT PCR反应体系及扩增循环的各项参数 ,确定酶联夹心杂交反应所需的试剂、试剂的配制及杂交反应的温度、时间。选择最适数量的PBMC进行RT PCR并用... 目的　建立一种半定量检测人外周血单个核细胞 (PBMC)表达IL 1αmRNA的方法。方法　确定RT PCR反应体系及扩增循环的各项参数 ,确定酶联夹心杂交反应所需的试剂、试剂的配制及杂交反应的温度、时间。选择最适数量的PBMC进行RT PCR并用核酸夹心杂交法检测扩增产物。结果　本方法检测IL 1αmRNA的灵敏度明显高于RT PCR琼脂糖凝胶电泳 ;无非特异性阳性信号出现 ,重复性良好 ,操作简便。结论　本方法是一种较好的定量检测IL 1αmRNA的方法 。 展开更多
关键词 核酸夹心杂交法 IL-1Α MRNA 半定量检测 逆转录-聚合酶接反应
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逆转录-套式PCR检测汉坦病毒感染的实验研究 被引量：1
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作者 朱子犁 刘建军 +2 位作者 阳帆 汪洪富 何建凡 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第3期416-418,共3页
目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的... 目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的鼠类中HV的感染情况。结果:在76份特异性总抗体阳性的鼠肺标本中,用RT-nested-PCR检出61份抗原阳性,而FA仅检出47份阳性。结论:RT-nested-PCR是一种比较准确的检测汉坦病毒感染的方法,其敏感性高于FA。 展开更多
关键词 汉坦病毒 逆转录-套式聚合酶链反应 直接免疫荧光法
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