HPLC无孔径载体柱用于快速分离蛋白质和多肽 被引量：6

1

作者 张丽华 屠红 +1 位作者 吴高德 夏其昌 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第2期45-47,共3页

介绍了一种新型的高效液相色谱柱（无孔径载体柱）的结构特点及其在蛋白质、多肽及遗传工程产品分析中的应用。在相同的洗脱条件下，与常规柱相比，无孔径载体柱高效、快速，特别是它能分离分子量较大和疏水性较强的蛋白质。此外，就无... 介绍了一种新型的高效液相色谱柱（无孔径载体柱）的结构特点及其在蛋白质、多肽及遗传工程产品分析中的应用。在相同的洗脱条件下，与常规柱相比，无孔径载体柱高效、快速，特别是它能分离分子量较大和疏水性较强的蛋白质。此外，就无孔径载体柱在使用过程中对仪器的要求作了阐述，还讨论了温度对柱效的影响以及灵敏度与梯度时间的关系等。 展开更多

关键词 无孔径载体柱 遗传工程 蛋白 多肽 分离 HPLC

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促红细胞生成素载体的构建、分离纯化及其活性检测

2

作者 潘佳欣 高秀峰 +3 位作者 赵佳浩 罗亚雄 吴晓婷 李永生 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第28期3913-3915,共3页

目的为了进一步考察促红细胞生成素(EPO)的组织保护作用,构建了高效表达人源性EPO(rhEPO)的原核表达载体,并通过小鼠体内实验考察了其促红细胞生成活性。方法构建原核表达载体pET30b(+)-rhEPO;转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达重... 目的为了进一步考察促红细胞生成素(EPO)的组织保护作用,构建了高效表达人源性EPO(rhEPO)的原核表达载体,并通过小鼠体内实验考察了其促红细胞生成活性。方法构建原核表达载体pET30b(+)-rhEPO;转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达重组转化子菌株;Ni-NAT亲和层析纯化融合蛋白;利用网织红细胞指数考察融合蛋白在小鼠体内的促红细胞活性。结果成功构建pET30b(+)-rhEPO重组子;实现了在原核生物中的表达;纯化后的融合蛋白达到了电泳级纯;其相对分子质量与理论值相符,原核表达的融合蛋白能够显著提高小鼠体内网织红细胞数,可溶性融合蛋白和包涵体蛋白比活性分别是应用化学科1 059.63、727.94U/mg。结论构建和表达重组载体pET30b(+)-rhEPO,表达的目的蛋白经分离纯化后具有体内生物学活性,为进一步的功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 红细胞生成素 遗传载体 分离和提纯 活性检测

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Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定 被引量：2

3

作者 刘小林 段秀梅 +4 位作者 方艳秋 谭岩 史宏博 车媛媛 刘力华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期381-384,共4页

目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基... 目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25000处可见特异性着色带。结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。 展开更多

关键词 配体 原核表达 巢式聚合酶链反应 遗传载体/分离与提纯

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日本血吸虫基因组DNA的提纯与鉴定 被引量：9

4

作者 汪学龙 沈际佳 +2 位作者 蒋美荣 蒋作君 杨兆莘 《安徽医科大学学报》 CAS 1996年第6期473-475,共3页

本研究采用酚─氯仿法提纯了日本血吸虫基因组ＤＮＡ，并对基因组ＤＮＡ进行了定量分析及微电泳鉴定。结果表明，１００ｍｇ日本血吸虫成虫（湿重）可提纯出约８０μｇ的ＤＮＡ，其基因组ＤＮＡ的大小＞３１Ｋｂ。该法提取的血吸虫基因... 本研究采用酚─氯仿法提纯了日本血吸虫基因组ＤＮＡ，并对基因组ＤＮＡ进行了定量分析及微电泳鉴定。结果表明，１００ｍｇ日本血吸虫成虫（湿重）可提纯出约８０μｇ的ＤＮＡ，其基因组ＤＮＡ的大小＞３１Ｋｂ。该法提取的血吸虫基因组ＤＮＡ较纯，适合于以后进行ＤＮＡ限制性核酸内切酶谱分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。 展开更多

关键词 血吸虫 日本血吸虫 遗传学 DNA 分离 提纯

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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗 被引量：1

5

作者 王志国 袁远 《兽药市场指南》 2005年第7期14-14,共1页

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基... H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中，构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA)，经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代，证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性，从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。 展开更多

关键词 重组鸡痘病毒 H5亚型禽流感 活载体疫苗 重组DNA技术 H5N1亚型 免疫原性 禽流感病毒 遗传稳定性 二联疫苗 基因工程 疫苗毒株 同源重组 NA基因 连续传代 基因组 疫苗株 分离株 研制 HA

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便于产物纯化的融合表达载体的构建 被引量：1

6

作者 蔡仕英 王园园 姚志建 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期40-42,共3页

本文构建了便于目的产物纯化的融合表达载体pBG－2，即在pBV220质粒的PRPL启动子下游插入链球菌荡白G的IgGFc结合区基因片段（编码60个氨基酸），该插入片段下游仍保留多克隆位点并引入剪切融合蛋白的特异位点．SDS－PAGE显示，在大肠... 本文构建了便于目的产物纯化的融合表达载体pBG－2，即在pBV220质粒的PRPL启动子下游插入链球菌荡白G的IgGFc结合区基因片段（编码60个氨基酸），该插入片段下游仍保留多克隆位点并引入剪切融合蛋白的特异位点．SDS－PAGE显示，在大肠杆菌中融合基因片段能表达到占菌体总蛋白的30％的水平。Western—blot结果表明，表达产物能很好地与IgG结合． 展开更多

关键词 融合表达载体 提纯 遗传工程

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产β-内酰胺酶痢疾杆菌检测及其基因分析 被引量：5

7

作者 胡立芬 李旭 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期87-90,共4页

目的研究临床分离志贺菌产β-内酰胺酶的发生率及其基因型分布情况。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增CTX-M组、OXA组、blaTEM-1、blaSHV-1、AmpC基因。PCR产物纯化测序法明确β-内酰胺酶基因型。结果91株痢疾杆菌产β-内酰胺酶的检出率... 目的研究临床分离志贺菌产β-内酰胺酶的发生率及其基因型分布情况。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增CTX-M组、OXA组、blaTEM-1、blaSHV-1、AmpC基因。PCR产物纯化测序法明确β-内酰胺酶基因型。结果91株痢疾杆菌产β-内酰胺酶的检出率为58株(63.74%),产β-内酰胺酶菌中blaTEM-1、blaCTX-M-1、blaCTX-M-13、blaOXA-1和blaAmpc扩增阳性率分别为62.07%(36/58)、17.24%(10/58)、24.14%(14/58)、36.21%(21/58)和10.34%(6/58),产AmpC中全为EBC型;携带2种耐药基因的菌株占20.88%,携带3种耐药基因的为5.49%,未测出CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-25、OXA-2、OXA-10、SHV-1型。结论本地区志贺菌β-内酰胺酶的检出率较高,以TEM-1型和OXA-1型基因为主。 展开更多

关键词 β内酰胺酶类/遗传学 头孢菌素酶/遗传学 痢疾/分离和提纯

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艾滋病合并分枝杆菌感染患者分枝杆菌菌种鉴定 被引量：10

8

作者 宋炜 刘莉 卢洪洲 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期243-248,共6页

目的：对艾滋病合并分枝杆菌感染患者菌株标本进行菌种鉴定，评价MPB64抗原胶体金法快速检测试剂盒鉴别分枝杆菌的价值。方法：对艾滋病患者临床标本中培养出的140株分枝杆菌菌株用16SrDNA测序的方法进行菌种鉴定，分析艾滋病患者中常... 目的：对艾滋病合并分枝杆菌感染患者菌株标本进行菌种鉴定，评价MPB64抗原胶体金法快速检测试剂盒鉴别分枝杆菌的价值。方法：对艾滋病患者临床标本中培养出的140株分枝杆菌菌株用16SrDNA测序的方法进行菌种鉴定，分析艾滋病患者中常见非结核性分枝杆菌（NTM）菌种，同时对这些标本用MPB64抗原免疫胶体金法进行菌株鉴定，分析后者的敏感性和特异性。结果：以16SrDNA测序结果为金标准，MPB64抗原胶体金法快速检测区分结核分枝杆菌（MTB）与NTM的敏感性和特异性分别为96．00％和96．84％。共有114份标本（114／140，81．43％）获得明确鉴定结果，其中50份（43．86％）为MTB，63份标本（55．26％）鉴定为NTM。最常见的NTM菌种为戈登分枝杆菌、鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌。结论：MPB64抗原胶体金法检测分枝杆菌菌种具有较好的特异性，且快速、经济、简便，适合用于临床对MTB及NTM的初步鉴别。艾滋病合并结核患者中NTM的比例较高，需进行菌种鉴定以指导临床治疗。 展开更多

关键词 获得性免疫缺陷综合征 分枝杆菌 结核/分离和提纯 分枝杆菌属/分类 寡核苷酸序列分析 细菌蛋白质类/遗传学 胶体金 试剂盒 诊断

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基于可变数目串联重复序列的痰液结核分枝杆菌检测方法建立及初步应用 被引量：2

9

作者 苏敏 陈晋 +4 位作者 白冰 黄云秀 魏兰 刘旻雁 陈婷梅 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期61-67,共7页

目的：结核分枝杆菌散在分布重复单位及可变数目串联重复序列（ MIRU-VNTR）是一项应用于结核分枝杆菌分子分型的技术，本研究基于该技术旨在建立一种直接应用临床痰液标本检测结核分枝杆菌的实验室方法。方法：根据扩增条件及临床检测... 目的：结核分枝杆菌散在分布重复单位及可变数目串联重复序列（ MIRU-VNTR）是一项应用于结核分枝杆菌分子分型的技术，本研究基于该技术旨在建立一种直接应用临床痰液标本检测结核分枝杆菌的实验室方法。方法：根据扩增条件及临床检测的实际需要，优化选择八个 MIRU-VNTR 位点（ MTUB21、MTUB04、QUB18、QUB26、QUB11b、MIRU31、MIRU10和MIRU26）作为检测靶标，收集130例肺结核患者和200例非肺结核患者（其他肺部疾病）的痰液样本，分别以传统的罗氏培养法和临床诊断的方法为标准，用MIRU-VNTR分析和荧光定量聚合酶链反应（ FQ-PCR ）对上述样本进行检测。结果：以罗氏培养法为标准时， MIRU-VNTR 的灵敏度为93.1％，特异度为97.7％；FQ-PCR 检测的灵敏度为94.0％，特异度为96.7％，MIRU-VNTR分析与FQ-PCR检测结果准确度差异无统计学意义（χ2＝0.352， P＝0.569）。以临床诊断为标准时， MIRU-VNTR分析的灵敏度为86.9％，特异度为100％；FQ-PCR 检测的灵敏度为87.7％，特异度为99.0％，两种方法检测结果准确度差异无统计学意义（χ2＝0.030， P＝0.862），且MIRU-VNTR分析中未发现假阳性结果。在MIRU-VNTR检测为阳性的结果中，98.2％（111／113）的样本分子编码互不相同，只有1.8％（2／113）分子编码一致（皆为54685538）。结论：应用临床痰液标本建立的基于MIRU-VNTR的结核分枝杆菌快速检测方法有着较好的应用价值。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核/分离和提纯 结核 肺/诊断 痰液/微生物学 分枝杆菌 结核/遗传学 基因型 串联重复序列

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三种不同DNA提取法对血链球菌随意引物PCR鉴定影响的研究 被引量：1

10

作者 张卫东 陈晖 余钟声 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2002年第6期464-466,共3页

目的 :研究不同 DNA提取法对随意引物聚合酶链反应 (AP- PCR)鉴定血链球菌的影响。方法 :采用 3种DNA提取法 ,利用 2 5碱基引物 5′AAG AGA GGA GCT AGC TCT TCT TGG A3′对不同菌种的血链球菌 DNA进行 AP- PCR。结果 :不同菌种的血链球... 目的 :研究不同 DNA提取法对随意引物聚合酶链反应 (AP- PCR)鉴定血链球菌的影响。方法 :采用 3种DNA提取法 ,利用 2 5碱基引物 5′AAG AGA GGA GCT AGC TCT TCT TGG A3′对不同菌种的血链球菌 DNA进行 AP- PCR。结果 :不同菌种的血链球菌 DNA经 AP- PCR扩增后产生不同的 DNA片段 ;用不同方法提取同种血链球菌 DNA可以得到相同的 DNA片段。结论 :不同 展开更多

关键词 血 链球菌 遗传学 聚合酶链反应 DNA 口腔 微生物学 分离 提纯 AP-PCR

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肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的诊断价值 被引量：5

11

作者 刘文林 赵静 崔琼 《医学临床研究》 CAS 2022年第6期937-939,共3页

【目的】探讨肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检测对菌阴肺结核的诊断价值。【方法】选取2015年9月至2020年1月在延安大学附属医院诊治的68例疑似菌阴肺结核患者为研究对象,胸腔镜辅助小切口对患者行肺切除术,根据病理结果... 【目的】探讨肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检测对菌阴肺结核的诊断价值。【方法】选取2015年9月至2020年1月在延安大学附属医院诊治的68例疑似菌阴肺结核患者为研究对象,胸腔镜辅助小切口对患者行肺切除术,根据病理结果将患者分为菌阴肺结核(n=42)和肺部其他疾病(n=26)。对所有患者肺病灶组织均行肺组织结核菌培养、TB-DNA检测,分析两种方法及二者联合对菌阴肺结核的诊断价值。【结果】肺组织结核菌培养检出菌阴肺结核与病理诊断一致性较高(Kappa=0.670),TB-DNA检测检出菌阴肺结核与病理诊断中度一致(Kappa=0.529),肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测检出菌阴肺结核与病理诊断一致性极好(Kappa=0.816)。肺组织结核菌培养、TB-DNA检测及二者联合诊断菌阴肺结核的曲线下面积(AUC)分别为0.890(95%CI:0.837~0.943)、0.841(95%CI:0.779~0.902)、0.945(95%CI:0.906~0.983);肺组织结核菌培养联合TB-DNA诊断菌阴肺结核的敏感度、准确度高于TB-DNA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】肺组织结核菌培养、TB-DNA检测均是诊断菌阴肺结核的有效方法,且二者联合的检出率、敏感度和特异性显著高于二者单独检测。 展开更多

关键词 结核 肺/诊断 结核分枝杆菌/遗传学 结核分枝杆菌/分离和提纯

原文传递

重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量：1

12

作者 马楠 张英起 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第14期1279-1281,共3页

目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重... 目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行TricineSDSPAGE电泳分析和WesternBlot检测分析.结果构建了重组融合表达质粒pQE30Tum5,表达的蛋白经TricineSDSPAGE电泳分析,在约Mr10×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的40%,纯化后的蛋白灰度扫描检测,纯度为95%.结论:成功地构建了人Tum5基因的原核表达载体,并纯化了该基因的原核表达产物. 展开更多

关键词 TUMSTATIN Tum-5 重组融合蛋白质类/分离和提纯 pQE载体

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1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

13

作者 周龙 王立林 +3 位作者 朱明磊 王家宁 黄永章 严世荣 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期539-542,共4页

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测... 目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。 展开更多

关键词 蛋白质类 分离方法 提纯方法 双酶 载体

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CD15抗原在胃癌组织中的表达

14

作者 谷化平 尚培中 +1 位作者 孙印臣 倪灿荣 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2001年第3期264-265,共2页

目的　探讨CD15抗原在胃癌组织中的表达及分布特点 ,及其与肿瘤发生发展、转移的关系。方法　应用微波 -LSAB免疫组化法 ,对 95例胃癌组织及癌旁粘膜组织进行CD15抗原检测 ,并进一步用胶体金免疫电镜技术对CD15抗原的分布特征进行观察... 目的　探讨CD15抗原在胃癌组织中的表达及分布特点 ,及其与肿瘤发生发展、转移的关系。方法　应用微波 -LSAB免疫组化法 ,对 95例胃癌组织及癌旁粘膜组织进行CD15抗原检测 ,并进一步用胶体金免疫电镜技术对CD15抗原的分布特征进行观察。结果　 95例胃癌中 ,82例呈CD15阳性表达 ,阳性率 86 3% ;癌旁粘膜亦呈CD15弱阳性表达。CD15表达阳性率在伴有淋巴结转移的胃癌中为 92 6 % ,显著高于无转移者的 70 4% (P <0 .0 0 5 )。免疫电镜显示 ,CD15抗原主要分布于胃癌细胞质的界膜、内质网、高尔基体及近细胞核膜处和癌旁粘膜上皮细胞质的界膜处。结论　胃癌的发生发展及侵袭、转移与CD15的表达相关 。 展开更多

关键词 遗传学 CD15抗原 分离 提纯 病理学 胃癌

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从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽

15

作者 周翔 詹金彪 +1 位作者 毛献荣 王克夷 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第5期412-416,共5页

目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合... 目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验。结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合;LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制。结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同。 展开更多

关键词 噬菌体 肽库 肽类/分离提纯 模拟肽 外源凝集素类/遗传学 植物 噬菌体展示随机肽库 豌豆凝集素 亲和筛选 结合肽

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利用自剪切融合蛋白在大肠杆菌中表达并纯化兔防御素

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作者 李霞 沈昕 +4 位作者 王义琴 张利明 赵世民 李文彬 孙勇如 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期67-70,共4页

将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存... 将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存在的防御素,但此蛋白没有对大肠杆菌的抑菌活性.同时,对该表达纯化系统的特点和用原核生物大肠杆菌表达真核生物防御素的问题进行了分析和讨论. 展开更多

关键词 融合蛋白 兔防御素 剪切 原核表达载体 大肠杆菌表达 防御素基因 NP-1 重组质粒 IPTG 目的蛋白 分离提纯 亲和层析 电泳检测 抑菌活性 真核生物 原核生物 纯化系统 性细胞 体形

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水稻OsCERK2转基因植株的获得及初步分析

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作者 汪德锋 陈艳 +5 位作者 肖文芳 符秀梅 肖晓蓉 黎秀琼 庞金环 陈银华 《热带生物学报》 2013年第2期146-152,159,共8页

以水稻粳稻品种日本晴为研究材料,利用拟南芥CERK1的蛋白质序列检索,在水稻基因组候选了与拟南芥CERK1同源的水稻基因OsCERK2,通过RT-PCR分离了该基因的全长cDNA。生物信息学分析显示,OsCERK2是一种含有信号肽的质膜蛋白,胞外结构域含有... 以水稻粳稻品种日本晴为研究材料,利用拟南芥CERK1的蛋白质序列检索,在水稻基因组候选了与拟南芥CERK1同源的水稻基因OsCERK2,通过RT-PCR分离了该基因的全长cDNA。生物信息学分析显示,OsCERK2是一种含有信号肽的质膜蛋白,胞外结构域含有LsyM基序,激酶结构域含有酪氨酸蛋白激酶结构域。构建了由35S启动子驱动该基因的过表达遗传转化载体和由玉米的泛素基因的启动子驱动的RNA干涉(RNAi)的遗传转化载体,利用农杆菌介导的遗传转化技术,将OsCERK2基因导入水稻,得到T0代转基因植株。对T0代植株进行了PCR检测和半定量RT-PCR检测,获得了OsCERK2有效表达的转基因植株。 展开更多

关键词 水稻(Oryza sativa) OsCERK2 基因分离 载体构建 遗传转化 RT-PCR

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人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定 被引量：3

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作者 季鹏 顾春荣 +3 位作者 卞智萍 陈相健 张寄南 杨笛 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第27期5387-5390,共4页

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科... 目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。②实验过程:取20g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白。③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性。结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14400的人心脏型脂肪酸结合蛋白。②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束。③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14000,纯度约为90%;Western印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致。实验从20g湿重心室肌中共纯化得到15.4mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77mg/g。结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化。 展开更多

关键词 载体蛋白质类 人 分离和提纯 组织构建

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Co负载量对Co/TiO2催化CO2甲烷化性能影响 被引量：6

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作者 周郁文 苏通明 +2 位作者 蒋月秀 秦祖赠 纪红兵 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期72-80,共9页

采用沉淀-沉积法制备出w（Co）=10%、15%、20%和25%的Co/TiO2催化剂,并用于催化CO2甲烷化反应。通过XRD、TEM、N2吸附-脱附、H2程序升温还原（H2-TPR）和CO2程序升温脱附（CO2-TPD）对催化剂进行了表征与测试。结果表明,Co的负载影响了... 采用沉淀-沉积法制备出w（Co）=10%、15%、20%和25%的Co/TiO2催化剂,并用于催化CO2甲烷化反应。通过XRD、TEM、N2吸附-脱附、H2程序升温还原（H2-TPR）和CO2程序升温脱附（CO2-TPD）对催化剂进行了表征与测试。结果表明,Co的负载影响了催化剂中Co3O4晶粒尺寸、比表面积、孔径以及催化剂的还原性能,且Co物种与TiO2载体发生了强相互作用。其中,w（Co）=20%的Co/TiO2催化剂中Co颗粒平均尺寸约为8nm,比表面积及孔径分别为40.9 m2/g和6.96 nm,且Co分散度达10.1%,从而更有利于CO2甲烷化反应。此外,w（Co）=20%的Co/TiO2催化剂表面具有最大的中强碱位量（28μmol/g）,从而可活化更多的CO2。活性测试结果表明,当反应温度为400℃、压力0.5 MPa、原料气空速3 600 m L/（g·h）、V（H2）/V（CO2）=4时,w（Co）=20%的Co/TiO2催化剂的活性最好,其CO2转化率和CH4选择性可分别达到69.9%和98.3%,且在20 h内保持稳定。 展开更多

关键词 CO2加氢 甲烷化 Co基催化剂 Co负载量 金属-载体强相互作用 表面碱量 催化与分离提纯技术

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幽门螺杆菌尿素酶C基因的克隆及测序 被引量：4

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作者 徐俊荣 张沥 +3 位作者 闰小君 崔大样 江红 韩锋产 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第3期308-311,共4页

目的用PCR方法扩增幽门螺杆菌(Hp)尿素酶C基因,以构建Hp UreC基因的重组克隆,为进一步表达Hp UreC基因的重组蛋白质并研究其功能奠定基础。方法以Hp临床菌株总DNA为模板,根据已发表的HpUreC基因序列设计引物(位于588bp～605bp和1737bp～... 目的用PCR方法扩增幽门螺杆菌(Hp)尿素酶C基因,以构建Hp UreC基因的重组克隆,为进一步表达Hp UreC基因的重组蛋白质并研究其功能奠定基础。方法以Hp临床菌株总DNA为模板,根据已发表的HpUreC基因序列设计引物(位于588bp～605bp和1737bp～1754bp),采用PCR方法扩增出一个1173bp的Hp尿素酶C基因片段,用BamHⅠ及EcoRⅠ双酶切后将其克隆入测序质粒pGEM-3Zf(-)中,以全自动测序仪双向测定目的片段序列,借助于DNA TOOL 5.1拼接成完整序列,与已知的Hp UreC基因序列做比较。结果所得核酸序列与报道的Hp国际标准菌株M60398的UreC基因同源性为95％,根据测序结果推断其编码的氨基酸序列,并行BLAST分析,发现它与标准菌株M60398的氨基酸序列同源性为97％。结论成功构建了Hp UreC基因的重组克隆,为进一步研究表达Hp UreC基因的重组蛋白质并研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 尿素酶 遗传学 幽门螺杆菌 酶学 分离 提纯 聚合酶链反应 胃肠道疾病

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