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Sinorhizobium morelens S-5中N-氨甲酰基水解酶基因的克隆、表达和纯化 被引量:1
1
作者 吴胜 王建军 +1 位作者 杨柳 孙万儒 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期565-570,共6页
N-氨甲酰基水解酶是一种非常具有工业应用价值的水解酶,可用于制备光学纯氨基酸。通过LA PCR从Sinorhizobium morelensS-5菌中克隆到1.3kb的DNA片段,测序表明该片段上含有一个完整的N-氨甲酰基水解酶的基因(hyuC)序列。将hyuC基因克隆... N-氨甲酰基水解酶是一种非常具有工业应用价值的水解酶,可用于制备光学纯氨基酸。通过LA PCR从Sinorhizobium morelensS-5菌中克隆到1.3kb的DNA片段,测序表明该片段上含有一个完整的N-氨甲酰基水解酶的基因(hyuC)序列。将hyuC基因克隆到表达载体pET30a上,重组质粒pET30a-HyuC在大肠杆菌中获得了高水平表达。重组的N-氨甲酰基水解酶经过热处理和三步柱色谱分离而纯化。纯化倍数为16.1倍,收率21.2%。该酶为同源四聚体,亚基分子量是38kDa。最适温度是60℃,最适pH为7.0。该酶有较高的热稳定性和氧化稳定性。Fe2+和Ca2+对酶的活性有一定的促进作用,而金属螯合剂和巯基试剂对酶活无明显影响。 展开更多
关键词 SINORHIZOBIUM morelens N-氨甲酰基水解酶基因 蛋白纯化 表达
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N-氨甲酰基水解酶基因工程菌的发酵工艺优化
2
作者 张小飞 王璐璐 张现林 《河北化工》 CAS 2010年第1期11-14,共4页
通过对基因工程菌发酵条件的研究,得知氯仿在0.02%的用量下可以通透细胞膜,使水解酶完全释放出来。最佳的发酵优化条件:接种龄为16~20h,接种量为2%,初始pH值为7.0,培养温度为30℃,葡萄糖为0.01%,甘油为0.30%,玉米浆为3%,NaCl为0.2%,KH2... 通过对基因工程菌发酵条件的研究,得知氯仿在0.02%的用量下可以通透细胞膜,使水解酶完全释放出来。最佳的发酵优化条件:接种龄为16~20h,接种量为2%,初始pH值为7.0,培养温度为30℃,葡萄糖为0.01%,甘油为0.30%,玉米浆为3%,NaCl为0.2%,KH2PO4为0.05%,MgSO4为0.05%,MnCl2为0.02%,CoCl2为0.01%。结果使DCase活力由原来的1.12u/mL提高到2.1u/mL,提高了87.5%。 展开更多
关键词 N-氨甲酰基水解酶 D-对羟基苯甘氨酸 发酵 优化
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马铃薯酯酰基水解酶的特性研究 被引量:1
3
作者 吴乔羽 徐姗楠 +5 位作者 翁晴 杨丹璐 龚盛祥 张维 吴金鸿 王正武 《食品与机械》 北大核心 2019年第11期41-46,共6页
从马铃薯生产废水中提取分离马铃薯蛋白Patatin组分,并以对硝基苯乙酸酯为底物,研究了Patatin作为酯酰基水解酶的酶学性质。结果表明,马铃薯酯酰基水解酶在37℃时活性最高,在40~50℃的条件下具有热稳定性,70℃处理120min后酶失活;马铃... 从马铃薯生产废水中提取分离马铃薯蛋白Patatin组分,并以对硝基苯乙酸酯为底物,研究了Patatin作为酯酰基水解酶的酶学性质。结果表明,马铃薯酯酰基水解酶在37℃时活性最高,在40~50℃的条件下具有热稳定性,70℃处理120min后酶失活;马铃薯酯酰基水解酶发挥酶活的最适pH为8.2;Fe^2+、Fe^3+、Mg^2+对马铃薯酯酰基水解酶具有活性激活作用,K^+、Ca^2+对马铃薯酯酰基水解酶活性具有抑制作用。此外,低浓度的Al^3+和Zn^2+对酯酰基水解酶的水解能力具有促进作用,高浓度的Zn^2+抑制了酯酰基水解酶的活性。 展开更多
关键词 马铃薯 酰基水解酶 温度 PH 金属离子
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酰基羧酸水解酶在疾病中的作用及机制研究进展
4
作者 吴振恺 邓博 +1 位作者 潘瑜 丁峰 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期101-107,共7页
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性菌细胞壁外壁的重要组成部分,能够引起机体强烈的免疫炎症反应。酰基羧酸水解酶(acyloxyacyl hydrolase,AOAH)是一种高度保守的宿主脂肪酶,在中性粒细胞、巨噬细胞和近端肾小管上皮细胞等多种... 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性菌细胞壁外壁的重要组成部分,能够引起机体强烈的免疫炎症反应。酰基羧酸水解酶(acyloxyacyl hydrolase,AOAH)是一种高度保守的宿主脂肪酶,在中性粒细胞、巨噬细胞和近端肾小管上皮细胞等多种细胞中表达。AOAH能够选择性地去除革兰阴性菌LPS脂质A的二级酰基链从而灭活LPS,减轻感染所致的炎症与组织损伤,促进机体脱离免疫耐受状态,恢复正常的免疫应答能力,在感染性疾病中发挥重要作用。此外,多项体内或体外实验证明,AOAH还具有磷脂酶、溶血磷脂酶、二酰甘油脂肪酶等多种酶活性。越来越多的研究表明,除感染性疾病外,AOAH还在过敏性哮喘、银屑病、慢性盆腔疼痛等自身免疫性疾病或慢性炎症性疾病等非感染性疾病中扮演重要角色。不仅如此,上海交通大学医学院附属第九人民医院肾脏内科丁峰课题组研究发现,AOAH可以抑制近端肾小管上皮细胞CD74通路,减轻肾脏纤维化。基于AOAH在疾病中展现出越来越多的作用,该文对AOAH的来源、结构及其在疾病中的作用和可能的机制进行综述,以期为未来研究AOAH在疾病中的功能提供参考,并为阐明疾病的发病机制及寻找治疗靶点提供新的思路。 展开更多
关键词 脂多糖 酰基羧酸水解酶 炎症 纤维化
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N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的快速纯化及性质 被引量:7
5
作者 袁静明 石亚伟 +2 位作者 杨秀清 连惠勇 齐延红 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期88-92,共5页
通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析及阴离子交换层析等三步 ,有效地从一菌株NO .2 2 6 2中纯化了N 氨甲酰基 D 氨基酸酰胺水解酶。结果表明 ,酶活性回收约 2 0 %,纯化了 8 4倍。天然PAGE与SDS PAGE分析表明 ,该酶分子为同源四聚体 ,单体分... 通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析及阴离子交换层析等三步 ,有效地从一菌株NO .2 2 6 2中纯化了N 氨甲酰基 D 氨基酸酰胺水解酶。结果表明 ,酶活性回收约 2 0 %,纯化了 8 4倍。天然PAGE与SDS PAGE分析表明 ,该酶分子为同源四聚体 ,单体分子量约为 3 5kD。酶催化反应的最适pH为 7 7~ 8 0 ,最适温度为 45℃。以N 氨甲酰 DL 丙氨酸为底物时 ,Km =1 3×1 0 - 3 mol L ,Vmax=0 .3 3mol min。二价金属离子Ni2 + 有激活作用 ,Zn2 + 有明显的抑制作用 ,而Co2 + 对酶活无影响。该酶N 末端 8个氨基酸残基依次为TRQKILAF。 展开更多
关键词 菌株NO.2262 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 纯化 性质 D-氨基酸
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N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶生产菌的选育 被引量:2
6
作者 莫章桦 刘友全 张小飞 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期734-736,共3页
以产N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的恶臭假单胞菌MZ0315为出发菌株,应用紫外和硫酸二乙酯的复合诱变,经底物类似物5-氟尿嘧啶的筛选,获得高产、稳定的优良菌株MF0506。经过发酵培养基优化,诱变株的产酶活力由出发菌株的0.443u/ml提高... 以产N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的恶臭假单胞菌MZ0315为出发菌株,应用紫外和硫酸二乙酯的复合诱变,经底物类似物5-氟尿嘧啶的筛选,获得高产、稳定的优良菌株MF0506。经过发酵培养基优化,诱变株的产酶活力由出发菌株的0.443u/ml提高至0.680u/ml。 展开更多
关键词 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 诱变 抗性筛选
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N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶基因的克隆与表达 被引量:4
7
作者 赵莉霞 钮利喜 +1 位作者 范俊虎 袁静明 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第1期32-36,共5页
按本室纯化的N 氨甲酰基 D 氨基酸酰胺水解酶 (DCase)的N 末端氨基酸序列设计了正向引物 ,并在已报道的不同来源菌株DCase的氨基酸序列同源性分析的基础上 ,设计了反向引物。用菌株No . 2 2 62总DNA为模板 ,经PCR扩增获得长度为约0 9... 按本室纯化的N 氨甲酰基 D 氨基酸酰胺水解酶 (DCase)的N 末端氨基酸序列设计了正向引物 ,并在已报道的不同来源菌株DCase的氨基酸序列同源性分析的基础上 ,设计了反向引物。用菌株No . 2 2 62总DNA为模板 ,经PCR扩增获得长度为约0 9kpb的片段 ,DNA序列分析表明基因全长为 912bp。将该片段插入 pET 3a ,构建成重组子 pET DCase ,并在E coliDH5α中获得表达 ,经SDS PAGE检测 ,表达产物分子量与天然纯DCase相同 ,约为 35kD。 展开更多
关键词 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 菌株No.2262 PCR扩增 DNA序列 基因表达 基因克隆 β-内酰胺内抗生素
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N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的固定化工艺 被引量:1
8
作者 张小飞 朱银惠 王璐璐 《生物加工过程》 CAS CSCD 2009年第4期46-49,共4页
以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化,最佳工艺条件为:1g树脂载体大约对应133U酶液,蛋白质量浓度0.35mg/mL,固定时间15h,温度28℃,pH7.5,固定化酶活达到58.5U。蛋白固定率可达97.4%,酶活回收率达到49.3%... 以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化,最佳工艺条件为:1g树脂载体大约对应133U酶液,蛋白质量浓度0.35mg/mL,固定时间15h,温度28℃,pH7.5,固定化酶活达到58.5U。蛋白固定率可达97.4%,酶活回收率达到49.3%,得到的固定化酶使用半衰期达到26批。 展开更多
关键词 D-对羟基苯甘氨酸 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 固定化
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N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶研究进展 被引量:2
9
作者 赵莉霞 范俊虎 袁静明 《国外医药(抗生素分册)》 CAS 2002年第6期255-257,共3页
用生物转化法生产D 氨基酸已经成为国内外半合成抗生素行业的支柱之一。此外 ,D 氨基酸及其衍生物还是甜味剂、拟除虫菊脂、多肽激素等诸多产品的重要中间体。介绍D 氨基酸生物转化中N 氨甲酰基 D 氨基酸酰胺水解酶的一些生化性质。
关键词 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 生化性质 结构特征 催化机制 半合成抗生素 综述
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重组大肠杆菌共表达D-海因酶和N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 被引量:5
10
作者 胡晓佳 李强 丛进阳 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期948-953,共6页
通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/HisA质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E.coliTop10F′得到重组菌TaraCRH.实验证明,E.coliTaraCRH对外源蛋白的... 通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/HisA质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E.coliTop10F′得到重组菌TaraCRH.实验证明,E.coliTaraCRH对外源蛋白的表达控制严紧,而加入阿拉伯糖诱导后可以成功表达两酶基因.诱导条件优化结果表明,诱导温度采用29℃,培养基中阿拉伯糖浓度0.05g/L可达到最高酶活.进一步尝试采用玉米浆培养基代替LB培养基,在经过优化的玉米浆培养基中培养TaraCRH菌株,经阿拉伯糖诱导,海因酶和水解酶酶活分别达到3.52和4.21U/mL. 展开更多
关键词 D-海因酶 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 多顺反子 大肠杆菌 共表达
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DCase水解酶固定化的性质
11
作者 张小飞 王璐璐 《河北工业科技》 CAS 2009年第6期505-508,518,共5页
以TJS环氧基树脂作为载体,对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化研究。最佳工艺条件如下:1 g树脂载体大约对应133 U酶液,蛋白质量浓度为0.35 mg/mL,固定时间为15h,温度为28℃,pH值为7.5,固定化酶活力达到58.5 U·g^(-1),固定... 以TJS环氧基树脂作为载体,对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化研究。最佳工艺条件如下:1 g树脂载体大约对应133 U酶液,蛋白质量浓度为0.35 mg/mL,固定时间为15h,温度为28℃,pH值为7.5,固定化酶活力达到58.5 U·g^(-1),固定率可达97.4%,酶活回收率达到49.3%,固定化酶活半衰期长达14 d。 展开更多
关键词 D-对羟基苯甘氨酸 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 固定化
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独活挥发油对N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的抑制作用及抗炎作用研究 被引量:19
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作者 孙文畅 杨隆河 +3 位作者 邱彦 任杰 黄锐 傅瑾 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第22期3161-3166,共6页
目的:研究独活挥发油对内源性大麻素水解酶N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine-hydrolyzing acidamidase,NAAA)水解活性的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型的抗炎作用。方法:采用水蒸气蒸馏法提取... 目的:研究独活挥发油对内源性大麻素水解酶N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine-hydrolyzing acidamidase,NAAA)水解活性的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型的抗炎作用。方法:采用水蒸气蒸馏法提取独活挥发油,GC-MS检测化学成分;采用LC-MS检测NAAA水解活性;采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型;采用LC-MS检测细胞内棕榈酸乙醇胺(N-palmitoylethanolamine,PEA)水平;采用实时定量PCR检测肿瘤坏子因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量;采用Griess法检测一氧化氮(NO)含量。结果:独活挥发油可抑制NAAA水解活性,升高LPS诱导的RAW264.7细胞内PEA水平;独活挥发油可下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α,iNOS,IL-6 mRNA表达;独活挥发油可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO释放。结论:独活挥发油能够抑制NAAA水解活性,升高细胞内PEA水平,降低炎症因子表达,具有一定的抗炎作用。 展开更多
关键词 独活挥发油 炎症 N-脂肪酰基乙醇胺水解酶 棕榈酸乙醇胺 小鼠巨噬细胞
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酰基羧酸水解酶基因多态性与中国人群慢性鼻-鼻窦炎的相关性研究 被引量:1
13
作者 赵延明 张媛 +2 位作者 崔晓辉 阮宇 张罗 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期668-674,共7页
目的 进行慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)风险基因在中国汉族CRS人群中的验证性研究.方法 选取2008年2月至2009年7月首都医科大学附属北京同仁医院CRS伴鼻息肉患者306例,CRS不伴鼻息肉患者332例及健康对照组315例作为研... 目的 进行慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)风险基因在中国汉族CRS人群中的验证性研究.方法 选取2008年2月至2009年7月首都医科大学附属北京同仁医院CRS伴鼻息肉患者306例,CRS不伴鼻息肉患者332例及健康对照组315例作为研究对象.选择加拿大学者研究发现的与CRS显著相关的10个基因位点进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型验证.等位基因频率和基因型频率采用频率计数法计算,应用x2检验或确切概率法进行分析,最后得出的统计学结果进行Bonferroni多重矫正.以SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 酰基羧酸水解酶(acyloxyacyl hydroxylase,AOAH)基因的SNP位点rs4504543与CRS具有相关性(OR=0.559 0,P=1.95 ×10^-5).在CRS亚型的分析中发现,rs4504543位点与CRS不伴鼻息肉具有相关性(OR=0.284 8,P=3.47 ×10^-12).结论 AOAH基因多态性在中国汉族人群中与CRS发病具有相关性,AOAH多态性改变可降低中国汉族人群CRS的发病风险. 展开更多
关键词 鼻窦炎 多态性 单核苷酸 酰基羧酸水解酶
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谷物及其加工品脂肪酶解的生化机制 被引量:4
14
作者 李兴军 《粮食科技与经济》 2012年第6期55-58,共4页
谷物粮食的脂肪降解方式是水解和氧化反应。总结了谷物三酰甘油(TG)脂肪酶、脂肪酰基水解酶(LAH)在谷物籽粒中的活性分布、生理作用,以及脂肪酶解的生化机制。并指出氧脂途径的分析对谷物及其加工品品质劣变机理的了解有指导意义。
关键词 谷物 脂肪 三酰甘油脂肪酶 脂肪酰基水解酶 糖脂 磷脂
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乙酰化酶动力学拆分N-乙酰色氨酸 被引量:9
15
作者 廖本仁 洪镛裕 +1 位作者 陈治平 刘波 《合成化学》 CAS CSCD 2001年第1期48-50,共3页
在应用 Donald方法的基础上 ,通过选择性水解合成了 DL-N-乙酰色氨酸 ,在酰基水解酶的作用下 ,可将DL-N-乙酰色氨酸拆分成 L-和 D-色氨酸 ,两种对映体的光学纯度都在 98%以上。
关键词 N-乙酰色氨酸 酰基水解酶 D-色氨酸 L-色氨酸 酶促拆分
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橡胶树HbCPA基因的克隆、表达及生物信息学分析
16
作者 杨洪 胡燕玲 +3 位作者 岳镒繁 邓治 代龙军 李德军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期39-47,共9页
N-氨甲酰基腐胺酰胺水解酶(N-carbamoylputreseine amidohydrolase,CPA)是高等植物通过精氨酸途径合成腐胺的终反应酶。利用RACE技术从橡胶树中克隆了一个CPA基因,命名为HbCPA。HbCPA序列全长1342 bp,开放阅读框为906 bp,编码301个氨基... N-氨甲酰基腐胺酰胺水解酶(N-carbamoylputreseine amidohydrolase,CPA)是高等植物通过精氨酸途径合成腐胺的终反应酶。利用RACE技术从橡胶树中克隆了一个CPA基因,命名为HbCPA。HbCPA序列全长1342 bp,开放阅读框为906 bp,编码301个氨基酸。HbCPA理论分子量约为33.5 kD,理论等电点为6.01。进化分析表明,HbCPA与木薯MeCPA、蓖麻RcCPA和麻风树JcCPA聚为一枝。qRT-PCR结果显示,HbCPA在橡胶树各组织中均有表达,表达量从高到低依次为树皮、叶片、雌花、雄花、茎尖;HbCPA在叶片不同发育时期表达存在变化,淡绿期最高,古铜期和衰老期表达量相当且最低;同健康树树皮相比,HbCPA在死皮树树皮中表达量明显上调;HbCPA表达受乙烯利、茉莉酸甲酯、低温、干旱、高盐、过氧化氢等调控,表明HbCPA可能参与橡胶树产排胶调控及非生物逆境胁迫响应。 展开更多
关键词 橡胶树 N-氨甲酰基腐胺酰胺水解酶 非生物胁迫 生物信息学 表达分析
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D-海因酶和水解酶在中华根瘤菌中的增强表达
17
作者 崔明鑫 孙家佳 李强 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期681-686,共6页
以质粒pBBR1MCS-5为载体,将D-Case和D-Hase基因以多顺反子形式置于其lac启动子控制下,转入中华根瘤菌,经30℃发酵培养24 h,在不添加诱导剂的情况下,总酶活比野生菌提高了2倍.为减少葡萄糖效应,将lac启动子替换成lacUV5,对核糖体结合位... 以质粒pBBR1MCS-5为载体,将D-Case和D-Hase基因以多顺反子形式置于其lac启动子控制下,转入中华根瘤菌,经30℃发酵培养24 h,在不添加诱导剂的情况下,总酶活比野生菌提高了2倍.为减少葡萄糖效应,将lac启动子替换成lacUV5,对核糖体结合位点进行优化,工程菌的酶活比野生菌提高了4倍,达0.5 U/mL. 展开更多
关键词 D-海因酶 N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 D-对羟基苯甘氨酸 中华根瘤菌
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Immobilization of Aspergillus Oryzae Mycelium Pellets and Its Application in the Resolution of D, L-Alanine
18
作者 王燕 朱怀工 +3 位作者 张凤宝 王淑兰 蔡旺锋 张旭斌 《Transactions of Tianjin University》 EI CAS 2006年第4期242-247,共6页
Aspergillus oryzae 3042 mycelium pellets were immobilized by crosslinking method with reagents of gelatin and formaldehyde. An orthogonal design table was used to determine the optimal immobilization conditions. The L... Aspergillus oryzae 3042 mycelium pellets were immobilized by crosslinking method with reagents of gelatin and formaldehyde. An orthogonal design table was used to determine the optimal immobilization conditions. The L-aminoacylase activity of immobilized mycelium pellets under optimal conditions was assayed. The results show that the L-aminoacylase activity was 1350 U·g^-1 and the activity retention rate was 83%. The properties of the immobilized preparation were studied. Compared with free pellets, the appropriate pH of reaction system changed from 7.0 to 8.0, temperature changed from 52℃ to 63℃, and the ranges of the optimum reaction conditions were all improved. The effect of Co^2+ on immobilized mycelium pellets was investigated and the favorable concentration was determined. When the immobilized preparation was used for the resolution of D, L-alanine in a packed bed reactor with 10 mm in diameter, 200 mm in height, the operational stability was increased, and the half-life period was 53 d. Thermal stability analysis shows that the immobilized pellets were more stable than the free pellets. 展开更多
关键词 L-aminoacylase Aspergillus oryzae IMMOBILIZATION CROSSLINKING ALANINE pHi temperature
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脑多肽口服液通过改善脂质代谢异常发挥对缺血性脑卒中的治疗作用
19
作者 于腾杰 张婷婷 +6 位作者 刘也 程冬 艾浩宇 贾楠 谢林 王广基 梁艳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期3117-3129,共13页
脑多肽口服液(cerebroprotein hydrolysate oral liquid,COL)是一种由氨基酸和多肽组成的神经保护制剂,对多种中枢系统疾病具有保护作用。然而,口服COL对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的治疗作用和潜在机制仍需探索。本研究旨在探讨... 脑多肽口服液(cerebroprotein hydrolysate oral liquid,COL)是一种由氨基酸和多肽组成的神经保护制剂,对多种中枢系统疾病具有保护作用。然而,口服COL对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的治疗作用和潜在机制仍需探索。本研究旨在探讨COL对IS体内外模型的治疗效果及其潜在的作用机制。通过大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)手术建立IS大鼠模型,采用氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、行为学评分、伊文思蓝渗漏实验、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫荧光染色等考察COL对IS大鼠脑梗死面积、神经功能、血脑屏障(blood brain barrier,BBB)和神经炎症的影响;通过糖氧剥夺/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)在hCMEC/D3细胞上建立IS的体外模型,采用cell counting kit-8法、活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、划痕实验及Transwell实验等考察COL对细胞活力、氧化应激和迁移能力的影响;采用脂质组学技术、实时定量PCR和Western blot实验等考察COL对IS大鼠脑内脂质代谢的调控及作用机制。所有动物实验均经中国药科大学实验动物伦理委员会批准(批准号:2022-02-23)。研究结果显示,口服COL可以显著减少IS大鼠的脑梗死面积,改善神经功能缺陷,降低炎症因子水平并减轻BBB的破坏。OGD/R造模导致hCMEC/D3细胞的活力显著下降、细胞内ROS水平升高且细胞的迁移能力减弱,而给予COL可有效改善OGD/R对hCMEC/D3细胞造成的损伤。此外,脑缺血的发生导致大鼠脑内出现显著的脂质代谢紊乱,其中甘油三酯(triglyceride,TAG)和神经酰胺(ceramide,Cer)类脂质在IS大鼠脑内显著蓄积。COL可以显著逆转IS大鼠脑内的脂质代谢紊乱,并可通过上调酸性神经酰胺酶即N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(N-acylsphingosine amidohydrolase 1,ASAH1)的水平,降低细胞毒性脂质Cer的含量。综上,COL被证明是一种有效且具有良好前景的IS治疗候选药物,可通过调节脂质代谢异常减轻缺血性脑损伤。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 脑多肽口服液 脂质组学 神经酰胺 N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1
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脓毒症小鼠急性肺损伤时ASAH1与细胞焦亡的关系
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作者 王蓓莹 李大鹏 +3 位作者 张丹丹 秦伟伟 孙立新 韩伟 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期876-880,共5页
目的评价脓毒症小鼠急性肺损伤时N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)与细胞焦亡的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠40只,6~8周龄,体质量18~23 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、急性肺损伤组(ALI组)、HCFU溶剂... 目的评价脓毒症小鼠急性肺损伤时N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)与细胞焦亡的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠40只,6~8周龄,体质量18~23 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、急性肺损伤组(ALI组)、HCFU溶剂+急性肺损伤组(HA组)和ASAH1抑制剂HCFU+急性肺损伤组(AA组)。Sham组仅开腹腔,ALI组、HA组和AA组行盲肠结扎穿孔术,HA组小鼠术前2 h腹腔注射HCFU溶剂0.2 ml,AA组小鼠术前2 h腹腔注射HCFU 10 mg/kg。24 h时深麻醉下处死小鼠,摘除眼球取血,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织和血清标本。计算肺湿质量/干质量(W/D)比值,采用BCA法检测BALF蛋白浓度,HE染色观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分;ELISA法测定BALF IL-1β、IL-6和TNF-α浓度;Western blot法检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、ASAH1和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达。结果与Sham组相比,ALI组、HA组和AA组肺损伤评分、W/D比值、BALF蛋白、血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高,肺组织NLRP3、GSDMD和caspase-1表达上调,ALI组和HA组ASAH1表达上调(P<0.05);与ALI组和HA组相比,AA组肺损伤评分、W/D比值、BALF蛋白、血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高,肺组织NLRP3、GSDMD及caspase-1表达上调,ASAH1表达下调(P<0.05或0.01)。结论ASAH1参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制,可能与其抑制细胞焦亡有关。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肺损伤 N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1 细胞焦亡
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