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猪瘟病毒分离株E_2基因的克隆与酵母表达系统转移载体的构建 被引量:1
1
作者 满朝来 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第5期3-5,共3页
用猪肾细胞 (PK- 15 )繁殖猪瘟病毒 (CSFV)分离株 HL - L Y,根据基因库已发表的 CSFV E2 基因序列 ,设计并合成一对引物 ,以 CSFV总 RNA为模板 ,通过 RT- PCR技术扩增出约 1.1kb的片段 ,即 E2 基因。将 RT- PCR产物先克隆到 p MD18- T... 用猪肾细胞 (PK- 15 )繁殖猪瘟病毒 (CSFV)分离株 HL - L Y,根据基因库已发表的 CSFV E2 基因序列 ,设计并合成一对引物 ,以 CSFV总 RNA为模板 ,通过 RT- PCR技术扩增出约 1.1kb的片段 ,即 E2 基因。将 RT- PCR产物先克隆到 p MD18- T载体上 ,构建了重组质粒 T- E2 ,再通过双酶切亚克隆到表达载体 p PIC9的多克隆位点 (MCS)上 ,经酶切、PCR鉴定和测序分析 ,表明均已成功获得了 CSFV E2 基因的重组体 p PIC9- E2 。将该测序结果与国内几个毒株 SHIMEN,C,C- V- L Z,GS- L T,GS- L X分别进行序列同源性比较 ,核苷酸同源性分别为 96 .5 1% ,95 .5 3% ,89.12 % ,78.6 6 % ,77.2 3% ;氨基酸同源性分别为 97.32 % ,95 .71% ,89.5 4 % ,83.16 % ,83.4 2 %。表明该毒株与国内标准毒株 SHIMEN株和 展开更多
关键词 猪瘟病毒 分离株 E2基因 基因克隆 酵母表达系统转移载体 同源性
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甲基营养型酵母表达载体系统研究进展 被引量:4
2
作者 欧阳菁 龙綮新 +1 位作者 杨林 王珣章 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2001年第5期502-506,共5页
Methylotrophic yeast expression system is one of the eukaryotic expression systems which was widely applied and devoloped fast in rencent years. Expression of the methanol inducible genes, expression vector, fermentat... Methylotrophic yeast expression system is one of the eukaryotic expression systems which was widely applied and devoloped fast in rencent years. Expression of the methanol inducible genes, expression vector, fermentation, purification and character of secretion proteins, factors affecting heterologous gene expression, comparision of methylotrophic yeast and other yeasts are reviewed in this paper. Ref 展开更多
关键词 甲基营养型酵母 表达载体系统 研究进展
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巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 被引量:65
3
作者 欧阳立明 张惠展 +1 位作者 张嗣良 刘志敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页
巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型。
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 载体 受体
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毕赤酵母蛋白表达系统研究进展 被引量:23
4
作者 杨梅 温真 +1 位作者 林丽玉 杨彩云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期46-51,共6页
选择合适的蛋白表达系统是外源基因能否成功表达的关键。毕赤酵母(Pichia pastoris)蛋白表达系统是近些年来发展起来的一种真核表达系统,与其他表达系统相比,该系统所具有的诸多优势使其研究价值和应用价值越来越广泛,已经成功表达了多... 选择合适的蛋白表达系统是外源基因能否成功表达的关键。毕赤酵母(Pichia pastoris)蛋白表达系统是近些年来发展起来的一种真核表达系统,与其他表达系统相比,该系统所具有的诸多优势使其研究价值和应用价值越来越广泛,已经成功表达了多种蛋白质。简要综述其特点、表达宿主菌、表达载体以及其元件、外源蛋白的表达及其影响因素等方面的基础研究和最新进展。 展开更多
关键词 毕赤酵母 表达系统 外源蛋白 载体 研究进展
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以UPS构建的酿酒酵母表达载体及GFP的表达 被引量:3
5
作者 王弘 郑文岭 +2 位作者 杨连生 于淑娟 马文丽 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期30-32,39,共4页
利用通用载体质粒融合系统UPS构建出了以GFP(绿色荧光蛋白 )为报告基因的酵母表达载体 ,经PCR、电泳、测序等手段证明了构建的准确性 。
关键词 UPS 酿酒酵母 通用载体质粒融合系统 酵母表达载体 GFP基因 绿色荧光蛋白 基因表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:10
6
作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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以绿色荧光蛋白为报告基因的酿酒酵母表达载体的构建 被引量:3
7
作者 王弘 郑文岭 +4 位作者 杨连生 于淑娟 赖晃文 杨传红 马文丽 《广东医学》 CAS CSCD 2002年第12期1239-1240,共2页
目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的酿酒酵母表达载体。方法利用通用载体质粒融合系统(UPS),首先将GFP片断连入donor载体,随后在Cre酶作用下与acceptor载体融合,获得了带有GFP片断的酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)表达载体... 目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的酿酒酵母表达载体。方法利用通用载体质粒融合系统(UPS),首先将GFP片断连入donor载体,随后在Cre酶作用下与acceptor载体融合,获得了带有GFP片断的酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)表达载体。结果成功构建了以GFP为报告基因的酿酒酵母载体,并在酵母中得到表达。结论GFP是一种理想的报告基因。同时,利用UPS能够高效、简便地进行酵母表达载体的构建。 展开更多
关键词 酿酒酵母 绿色荧光蛋白 酵母表达载体 通用载体质粒融合系统 GFP
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大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展 被引量:33
8
作者 祁浩 刘新利 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期4-6,52,共4页
由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶... 由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 外源基因 宿主菌株
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大肠杆菌和酵母表达系统的研究进展 被引量:18
9
作者 张云鹏 温彤 姜伟 《生物技术进展》 2014年第6期389-393,共5页
20世纪70年代以来,分子生物学及基因组学迅猛发展,其在生物及医学领域发挥着越来越重要的作用。在发酵工业中,分子生物学技术广泛应用于菌种的遗传改造和基因工程菌株的构建,以期提高发酵产物的产量并丰富发酵产物的类型。其中,利用原... 20世纪70年代以来,分子生物学及基因组学迅猛发展,其在生物及医学领域发挥着越来越重要的作用。在发酵工业中,分子生物学技术广泛应用于菌种的遗传改造和基因工程菌株的构建,以期提高发酵产物的产量并丰富发酵产物的类型。其中,利用原核及真核表达系统进行外源基因的扩增、表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和酶制剂等是近十年来发酵工业的新兴领域。本文从表达载体和宿主菌改造两方面综述近些年来大肠杆菌及酵母表达系统的新进展与新技术。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 宿主菌改造
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以UPS构建的重组酿酒酵母表达载体及其稳定性研究 被引量:1
10
作者 王弘 郑文岭 +1 位作者 杨太成 冼江 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期4-7,共4页
采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性。实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性。同时,... 采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性。实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性。同时,通过实验验证了,UPS在进行表达载体构建时快速、简便、高效。 展开更多
关键词 酿酒酵母 表达载体 GFP基因 UPS 重组酿酒酵母 表达载体构建 酵母表达载体 稳定性研究 通用载体质粒融合系统 绿色荧光蛋白
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新型酵母表达系统的研究 被引量:7
11
作者 张平武 李育阳 《生物技术通讯》 CAS 1999年第4期306-309,共4页
酵母表达系统是在酿酒酵母质粒的发现和酵母转化技术的成熟基础上建立起来的真核生物表达系统。许多有应用价值的外源基因成功地在其中表达,但也存在一些局限性。为了开发新的酵母表达系统,人们在酿酒酵母以外的酵母中寻找合适的宿主... 酵母表达系统是在酿酒酵母质粒的发现和酵母转化技术的成熟基础上建立起来的真核生物表达系统。许多有应用价值的外源基因成功地在其中表达,但也存在一些局限性。为了开发新的酵母表达系统,人们在酿酒酵母以外的酵母中寻找合适的宿主以建立新的载体-宿主系统。本文综述了建立新的酵母表达系统涉及的有关问题和近几年来的研究进展。 展开更多
关键词 酵母 表达系统 宿主菌 载体
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:16
12
作者 于平 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期50-54,共5页
巴斯德毕赤酵母表达系统现在已经发展成为一种高效的外源蛋白基因优秀表达系统,该系统具有高表达、高稳定、高分泌、容易放大和成本低等优点,目前已有多种外源蛋白基因在该系统中实现高效表达,对巴斯德毕赤酵母表达系统的进一步研究将... 巴斯德毕赤酵母表达系统现在已经发展成为一种高效的外源蛋白基因优秀表达系统,该系统具有高表达、高稳定、高分泌、容易放大和成本低等优点,目前已有多种外源蛋白基因在该系统中实现高效表达,对巴斯德毕赤酵母表达系统的进一步研究将会促进其大规模的工业化应用。 展开更多
关键词 乙醇氧化酶基因启动子 载体类型 载体元件 整合拷贝数 高效表达 酵母表达系统 系统研究 巴斯德 蛋白基因 工业化应用
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巴斯德毕赤酵母(P pastoris)表达系统 被引量:1
13
作者 邹运明 李一经 邹丽红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第11期70-71,共2页
近年来,基因工程菌被广泛用于商业化生产外源蛋白。原核生物作为基因工程表达系统简单而易培养,有其一定的优点,但也存在着一定的缺陷,如不能对表达蛋白进行糖基化等翻译后修饰,特别是对核基因的表达,可能导致产物失去生活活性。... 近年来,基因工程菌被广泛用于商业化生产外源蛋白。原核生物作为基因工程表达系统简单而易培养,有其一定的优点,但也存在着一定的缺陷,如不能对表达蛋白进行糖基化等翻译后修饰,特别是对核基因的表达,可能导致产物失去生活活性。自1981年Hitzeman等首次在酿酒酵母中表达了人重组干扰素基因后,相继又有多种外源基因表达成功。与大肠杆菌不同的是,酵母可对异源蛋白进行修饰,采用有信号肽的质粒时,蛋白能被正确折叠和加工,然后分泌到培养基中; 展开更多
关键词 马斯德毕赤酵母表达系统 基因工程 宿主菌 载体类型 外源蛋白修饰
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利用柞蚕核型多角体病毒表达系统表达谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶 被引量:1
14
作者 朱彤 赵振军 +4 位作者 叶博 刘宇博 范琦 张嘉宁 李文利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期478-484,共7页
谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关。本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸... 谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关。本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸。将该基因连接到柞蚕杆状病毒转移载体pApM748BE后与ApNPV-Δph/egfp+共转染Tn-High Five细胞获得重组病毒。将重组病毒注射到柞蚕蛹体内,收集发病蛹血淋巴,用镍离子螯合柱纯化得到纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测表明,ApGFAT蛋白在柞蚕蛹体内得到成功表达,酶活力为0.978μmol/(min·mg)。 展开更多
关键词 柞蚕 谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移 柞蚕核型多角体病毒表达载体系统
原文传递
甲醇酵母基因表达系统研究
15
作者 王志方 艾秀莲 +4 位作者 李晨华 王玮 张伟 冯怀蓉 王成 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第4期222-224,共3页
甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的... 甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的内容。 展开更多
关键词 甲醇酵母 基因表达系统 发酵工艺 受体菌 表达载体
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真核表达载体与逆转录病毒介导离体成肌细胞中人神经营养素-3基因转移效果比较
16
作者 刘红 郭庆 +2 位作者 穆援越 甘思德 范明 《生物技术通讯》 CAS 1996年第2期91-92,共2页
神经营养素3(Neurotrophm 3,NT-3)可防止多种神经元的退化变性。是有临床前景的多肽药物。但由于它不能穿过血脑屏障,利用可高效表达NT-的工程细胞作脑移植是将来实现NT-3治疗中枢神经系统损伤的重要途径经之一。为了解何种方法介导NT-... 神经营养素3(Neurotrophm 3,NT-3)可防止多种神经元的退化变性。是有临床前景的多肽药物。但由于它不能穿过血脑屏障,利用可高效表达NT-的工程细胞作脑移植是将来实现NT-3治疗中枢神经系统损伤的重要途径经之一。为了解何种方法介导NT-3基因转移效果更好,我们比较了真核表达载体pCMV4与逆转录病毒I XSN介导离体成肌细胞中人NT-3(hNT-3)基因转移后hNT-3 mRNA的表达水平和(?)清液中hNT-3的生物活性。 展开更多
关键词 真核表达载体 成肌细胞 基因转移 神经营养素-3 逆转录病毒介导 中枢神经系统损伤 神经营养素3 基础医学研究 医学科学院 神经营养活性
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表达石竹黄酮糖基转移酶的酿酒酵母用于全细胞生物催化
17
作者 Werner SR 殷承慧 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期13-13,共1页
采用表达石竹类丁香树科(康乃馨)黄酮糖基转移酶(GT)的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为全细胞生物催化剂,以柚皮素为底物,比较两种酵母表达系统——固有表达系统和半乳糖诱导表达系统的催化效率。体外转化实验中两系统... 采用表达石竹类丁香树科(康乃馨)黄酮糖基转移酶(GT)的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为全细胞生物催化剂,以柚皮素为底物,比较两种酵母表达系统——固有表达系统和半乳糖诱导表达系统的催化效率。体外转化实验中两系统均能产生柚皮素-7-O-葡糖苷,但后者葡糖苷转移特异性更高。而在体内试验中,前者产率更高。产物糖苷类化合物均能直接从培养基收获, 展开更多
关键词 全细胞生物催化 糖基转移 酿酒酵母 黄酮 酵母表达系统 石竹 生物催化剂 葡糖苷
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杆状病毒表达载体系统研究进展
18
作者 李青兵 《广东蚕业》 1998年第4期60-64,共5页
昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外... 昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外源基因表达载体的设想最初是由Miller 1981年提出。 展开更多
关键词 杆状病毒表达载体系统 启动子序列 外源基因 昆虫杆状病毒 多角体蛋白 转移载体 研究进展 重组病毒 核型多角体病毒 病毒粒子
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利用毕赤酵母表达外源蛋白的研究 被引量:12
19
作者 刘忠渊 张富春 +1 位作者 毛新芳 王芸 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期56-58,共3页
综述了毕赤酵母表达系统的优越性、表达受体菌和表达载体、酵母转化、分泌信号、翻译后加工和修饰等特点 ,以及广泛的医用、商业用途 ,在理论研究特别是蛋白质结构与功能方面的潜在应用价值。
关键词 毕赤酵母 真核表达系统 外源蛋白 表达载体 酵母转化 分泌信号
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猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析 被引量:6
20
作者 欧阳菁 杨林 +3 位作者 龙綮新 王珣章 邢珂 魏平华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期520-525,共6页
利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表... 利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原 抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N 展开更多
关键词 猪生产激素 巴斯德毕赤酵母 表达载体系统 基因表达 高效分泌表达 N-糖基化分析
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