目的探讨过敏性疾病主要变应原之一德国小蠊Bla g 2的定位。方法制作德国小蠊石蜡切片,在本室克隆、表达和纯化出Bla g 2蛋白的基础上,按常规方法免疫小鼠,分离血清用作一抗,荧光染色后在光镜下观察Bla g 2在虫体内的定位。结果用rBla ...目的探讨过敏性疾病主要变应原之一德国小蠊Bla g 2的定位。方法制作德国小蠊石蜡切片,在本室克隆、表达和纯化出Bla g 2蛋白的基础上,按常规方法免疫小鼠,分离血清用作一抗,荧光染色后在光镜下观察Bla g 2在虫体内的定位。结果用rBla g 2免疫小鼠血清孵育的切片中,中肠肠腔上皮细胞和肠内容物显示强阳性,免疫小鼠血清孵育的粪便颗粒也显示阳性结果。而其生殖、排泄系统等脏器均呈阴性反应。结论本研究发现德国小蠊II类变应原Bla g 2存在于中肠肠腔上皮组织、肠内容物和粪便颗粒中,对进一步进行德国小蠊特异性抗原的分离、纯化及疫苗的研究提供了理论参考。展开更多
目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用...目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia Uni Cap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0. 72 U/ml和0. 69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93. 5%和95. 7%。结论成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。展开更多
目的建立尘螨变应原Der f 2编码基因重组pCold TF体系并诱导表达。方法以质粒pMD19-T-Der f 2为模板扩增目的基因Der f 2,克隆至pCold TF DNA载体,转化BL21细菌,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和West-ern blot鉴定表达产物。结果 PCR扩增获...目的建立尘螨变应原Der f 2编码基因重组pCold TF体系并诱导表达。方法以质粒pMD19-T-Der f 2为模板扩增目的基因Der f 2,克隆至pCold TF DNA载体,转化BL21细菌,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和West-ern blot鉴定表达产物。结果 PCR扩增获得Der f 2编码基因,成功构建表达质粒pCold TF-Der f 2。SDS-PAGE检测表明该质粒在大肠埃希菌中正常表达,且基本为可溶性表达,表达产物分子质量单位为69ku,Western blot检测该蛋白能被鼠抗Penta-His抗体识别。结论成功建立尘螨变应原Der f 2编码基因重组pCold TF体系,并实现其可溶性原核表达。展开更多
文摘目的探讨过敏性疾病主要变应原之一德国小蠊Bla g 2的定位。方法制作德国小蠊石蜡切片,在本室克隆、表达和纯化出Bla g 2蛋白的基础上,按常规方法免疫小鼠,分离血清用作一抗,荧光染色后在光镜下观察Bla g 2在虫体内的定位。结果用rBla g 2免疫小鼠血清孵育的切片中,中肠肠腔上皮细胞和肠内容物显示强阳性,免疫小鼠血清孵育的粪便颗粒也显示阳性结果。而其生殖、排泄系统等脏器均呈阴性反应。结论本研究发现德国小蠊II类变应原Bla g 2存在于中肠肠腔上皮组织、肠内容物和粪便颗粒中,对进一步进行德国小蠊特异性抗原的分离、纯化及疫苗的研究提供了理论参考。
文摘目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia Uni Cap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0. 72 U/ml和0. 69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93. 5%和95. 7%。结论成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。
文摘目的建立尘螨变应原Der f 2编码基因重组pCold TF体系并诱导表达。方法以质粒pMD19-T-Der f 2为模板扩增目的基因Der f 2,克隆至pCold TF DNA载体,转化BL21细菌,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和West-ern blot鉴定表达产物。结果 PCR扩增获得Der f 2编码基因,成功构建表达质粒pCold TF-Der f 2。SDS-PAGE检测表明该质粒在大肠埃希菌中正常表达,且基本为可溶性表达,表达产物分子质量单位为69ku,Western blot检测该蛋白能被鼠抗Penta-His抗体识别。结论成功建立尘螨变应原Der f 2编码基因重组pCold TF体系,并实现其可溶性原核表达。
