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重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性 被引量：2
1
作者 李睿 王革 +1 位作者 钱秋娟 王秉翔 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期1-5,共5页
目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生... 目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序;诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性。结果各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为76%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异;各代次菌株的总蛋白电泳图谱r、LF蛋白表达量r、LF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异。结论重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌pet-28(a)/lf/bl21 传代稳定性
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重组大肠杆菌细胞不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯合成(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 被引量：12
2
作者 敬科举 徐志南 +1 位作者 林建平 岑沛霖 《催化学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期993-998,共6页
从赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolorZJU0105)中克隆出NADPH依赖型醛基还原酶基因,构建了重组大肠杆菌E.coliBL21(pET28-ALR0105),该工程菌可以高效地表达醛基还原酶.将重组细胞用于催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原,合成出具有... 从赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolorZJU0105)中克隆出NADPH依赖型醛基还原酶基因,构建了重组大肠杆菌E.coliBL21(pET28-ALR0105),该工程菌可以高效地表达醛基还原酶.将重组细胞用于催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原,合成出具有光学活性的(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯.实验发现,在加入适量辅酶及辅酶再生酶的条件下,利用重组细胞催化还原反应可以获得比使用赭色掷孢酵母更高的转化率、产率和ee值,得到了几乎是光学纯的(R)-(+)-型产物,从而解决了酵母细胞催化此类反应ee值较低的问题.考察了辅酶及共底物的添加、底物和产物的浓度、pH值、温度以及菌体密度等因素对还原反应的影响.结果表明,不对称还原反应必须在辅酶NADPH和辅酶再生酶系及共底物葡萄糖的参与下进行;底物和高浓度的产物对还原反应有一定的抑制作用;当pH>6.0时,反应的转化率及产率都显著降低;高密度重组细胞可以减小底物的抑制作用. 展开更多
关键词 重组细胞 大肠杆菌 E.COLI bl21(pET28-ALR0105)菌株 醛基还原酶 生物催化 4-氯乙酰乙酸乙酯 不对称还原 (R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯
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灭活剂对BL21-(PET28a-HA9801)灭活下游工艺影响的研究
3
作者 郑新勇 王士龙 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2022年第4期181-183,共3页
目前国内生产的有效预防猪链球菌疾病的有效亚单位疫苗,是采用大肠杆菌重组蛋白作为抗原,在大肠杆菌发酵后的灭活工艺环节,多采用灭活剂甲醛进行重组大肠杆菌的灭活,灭活效果良好,但是对于下游蛋白纯化工艺的影响没有相关报道研究,为了... 目前国内生产的有效预防猪链球菌疾病的有效亚单位疫苗,是采用大肠杆菌重组蛋白作为抗原,在大肠杆菌发酵后的灭活工艺环节,多采用灭活剂甲醛进行重组大肠杆菌的灭活,灭活效果良好,但是对于下游蛋白纯化工艺的影响没有相关报道研究,为了研究灭活剂甲醛对于猪链球菌重组大肠杆菌BL21-(PET28a-HA9801)表达蛋白纯化收率影响。本研究利用猪链球菌重组大肠杆菌BL21-(PET28a-HA9801)进行菌培养,利用试验组0.2%甲醛灭活和对照组无甲醛灭活,分别进行菌体破碎,蛋白纯化,比较试验组和对照组,在蛋白纯化过程及蛋白纯化后蛋白得率进行对比分析,结果表明,试验甲醛添加组对与菌体破碎效果及亲和层析纯化、蛋白得率都有显著影响,因此得出结论甲醛对于猪链球菌重组大肠杆菌BL21(PET28a-HA9801)灭活效果良好,但是对于下游纯化蛋白收率影响较大,不适宜作为猪链球菌重组大肠杆菌BL21(PET28a-HA9801)灭活的最佳灭活剂。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌bl21-(PET28a-HA9801) 亚单位疫苗 甲醛 蛋白收率
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