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重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制研究 被引量：5
1
作者 彭平平 黄利鸣 +2 位作者 韩钰 尤程程 方正超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1290-1293,共4页
目的探索重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制。方法 RT-PCR、QT-PCR、Western blot检测rTCS高表达后Caski细胞中DNA甲基化转移酶I(DNMT1)的表达变化,甲基化特异性PCR(MSP... 目的探索重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制。方法 RT-PCR、QT-PCR、Western blot检测rTCS高表达后Caski细胞中DNA甲基化转移酶I(DNMT1)的表达变化,甲基化特异性PCR(MSP)法检测p73基因5'端启动子区CpG岛甲基化状态的改变。结果宫颈癌Caski细胞p73为低表达,其启动子呈部分甲基化状态。高表达rTCS的细胞株其DNMT1mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中mRNA水平降低0.56倍(P<0.01),p73基因启动子甲基化程度亦有所降低,p73mRNA水平表达升高。结论高表达rTCS可能通过抑制DNMT1的表达,致使抑癌基因p73启动子去甲基化而重新表达,最终发挥抑癌基因功能抑制宫颈癌Caski细胞增殖。 展开更多
关键词 重组天花粉蛋白 宫颈癌 抑癌基因 DNA甲基化 甲基化转移酶I P73基因
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重组天花粉蛋白的原核表达纯化和免疫原性分析 被引量：1
2
作者 王萍 丁世萍 李继承 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期172-176,共5页
目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性。方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达。用金属螯合层析法纯化重组蛋白。... 目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性。方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达。用金属螯合层析法纯化重组蛋白。薄层扫描及Bradford法检测纯化后重组蛋白的纯度和含量。间接ELISA法检测重组蛋白和天然蛋白产生的多克隆抗体效价。Western blotting检测重组蛋白与抗天然蛋白抗体之间的免疫反应性。结果1.双酶切鉴定结果表明,pET-29b-TCS成功构建;2.30℃,1 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组蛋白的表达量最高(占细菌总蛋白量的36%),主要以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中;3.His-tag特异性结合树脂纯化后,获得了纯度达95%的重组蛋白,纯化后的蛋白含量为1.2 g/L;4.间接ELISA法检测天然蛋白和重组蛋白产生的抗体效价分别为1∶4 960和1∶5 120;5.Western blotting测纯化的重组蛋白与抗天然蛋白的多克隆抗体之间有特异反应性。结论本实验成功构建了高效表达载体pET-29b-TCS,携带的天花粉蛋白基因无N端和C端编码序列。重组蛋白的抗体效价显著低于天然蛋白,表明天然蛋白的糖基化与其免疫原性之间有一定的关系。 展开更多
关键词 pET-29b-TCS重组表达载体 重组天花粉蛋白 天然天花粉蛋白 免疫原性 逆转录聚合酶连反应
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重组天花粉蛋白体外诱导宫颈癌HeLa细胞p27基因去甲基化的研究 被引量：5
3
作者 尤程程 黄利鸣 +2 位作者 韩钰 王艳林 黄益玲 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期245-249,共5页
目的研究重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)对宫颈癌HeLa细胞中p27基因甲基化状态和基因表达的影响。方法应用不同质量浓度的rTCS(20、40、80μg/mL)处理体外培养的宫颈癌HeLa细胞后,MSP法检测用药前后细胞中p27基因的甲... 目的研究重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)对宫颈癌HeLa细胞中p27基因甲基化状态和基因表达的影响。方法应用不同质量浓度的rTCS(20、40、80μg/mL)处理体外培养的宫颈癌HeLa细胞后,MSP法检测用药前后细胞中p27基因的甲基化状态,Real-Ti me PCR法检测用药前后细胞中p27和DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA水平的变化,Western-blotting法检测用药前后细胞中p27蛋白表达的变化。结果HeLa细胞中p27基因为低表达,基因启动子区CpG岛呈部分甲基化状态。40μg/mLrTCS处理导致p27基因启动子区CpG岛去甲基化;在20、40、80μg/mL的rTCS作用48 h后,p27基因mRNA相对表达水平分别升高2.22、4.00、6.03倍,p27蛋白水平表达也逐渐增加;宫颈癌HeLa细胞中DNMT1 mRNA高表达,40μg/mLrTCS处理48 h可至DNMT1 mRNA表达水平降低78%。结论rTCS通过抑制DNMT1,逆转p27基因启动子区CpG岛的甲基化状态,使宫颈癌HeLa细胞中p27基因表达活化。rTCS能逆转宫颈癌HeLa细胞p27基因甲基化状态,调控p27基因和DNMT1的表达。 展开更多
关键词 重组天花粉蛋白 P27基因 宫颈癌 DNA甲基化
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重组天花粉蛋白的真核表达及其对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响 被引量：5
4
作者 彭平平 黄利鸣 +5 位作者 王艳林 尤程程 曹卫红 宋华梅 谭寒星 吴燕珍 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期2539-2542,共4页
目的:观察重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/6His-TCS,稳定转染Caski细胞后,RT-PCR,Western-blot筛选rTCS高表达细胞株。以转染空载质粒pcDNA3.1... 目的:观察重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/6His-TCS,稳定转染Caski细胞后,RT-PCR,Western-blot筛选rTCS高表达细胞株。以转染空载质粒pcDNA3.1(-)细胞株作为对照组,MTT法检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化。结果:成功获得高表达rTCS的Caski细胞株,rTCS高表达能够显著抑制Caski细胞增殖(P<0.01),并能将细胞抑制在G1和G2期(P<0.05)。结论:rTCS在细胞内高表达具有抗人宫颈癌细胞生长的作用,该研究为宫颈癌治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 重组天花粉蛋白 宫颈癌 细胞增殖
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