表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建

1

作者 田静格 徐鸣荷 +16 位作者 王向东 张意航 李岩 刘俊杰 李星雨 韩城昊 张伯顺 卜德新 于春梅 丛雁方 杨盼盼 乔麒龙 王增 李建丽 李永涛 王白玉 赵军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期659-665,共7页

为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa S... 为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性喉气管炎病毒 重组嵌合型新城疫病毒 gD蛋白 二联活疫苗

下载PDF 职称材料

表达H9N2亚型禽流感病毒流行株HA基因的重组嵌合型新城疫病毒的构建与鉴定 被引量：1

2

作者 黄庆 乔麒龙 +4 位作者 王白玉 杨盼盼 王宝玲 苗玉和 赵军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期928-936,共9页

为研制同时防控基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染的新型高效多联疫苗,本研究将上游带有NDV HN基因非编码区(NCR)的H9N2亚型AIV流行株的血凝素基因(HA)插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV rLaSota-7F/H... 为研制同时防控基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染的新型高效多联疫苗,本研究将上游带有NDV HN基因非编码区(NCR)的H9N2亚型AIV流行株的血凝素基因(HA)插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV rLaSota-7F/HN全长基因组cDNA的质粒pNDFL-7F/HN中,构建含有H9N2亚型AIV流行株HA基因的重组NDV全长感染性克隆pNDFL-7F/HN-HA。将pNDFL-7F/HN-HA和辅助质粒共转染至BHK-21拯救出重组病毒rLaSota7-HA。对重组NDV进行了RT-PCR、Western Blot和IFA鉴定,以及生物学特性研究。结果表明,重组NDV rLaSota7-HA可以在鸡胚中稳定传代,且保留了LaSota株在鸡胚中高滴度复制、低致病性等生物学特性。rLaSota7-HA的鸡胚平均致死时间(MDT)为132 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0。鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值达10^(⁃8.78)/100μL,本研究构建的表达H9N2亚型AIV中国流行株HA基因的重组NDV rLaSota7-HA将为研制同时防控基因Ⅶ型NDV和H9N2亚型AIV感染的高效多联疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 HA蛋白 重组嵌合型新城疫病毒 基因Ⅶ型NDV

原文传递

表达鸡传染性法氏囊病病毒变异株VP2基因的重组嵌合型新城疫病毒的构建与鉴定

3

作者 乔麒龙 黄庆 +6 位作者 王白玉 杨盼盼 赵月政 王宝玲 崔丽瑾 苗玉和 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期867-872,共6页

为了研发防控IBDV变异株和基因Ⅶ型NDV感染的高效廉价多联疫苗,将IBDV中国流行变异株的VP2基因共有序列插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV LaSota-ⅦF/HN全长基因组cDNA的质粒pNDFL-ⅦF/HN中,构建含有IBDV变异毒株VP2基因... 为了研发防控IBDV变异株和基因Ⅶ型NDV感染的高效廉价多联疫苗,将IBDV中国流行变异株的VP2基因共有序列插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV LaSota-ⅦF/HN全长基因组cDNA的质粒pNDFL-ⅦF/HN中,构建含有IBDV变异毒株VP2基因的重组NDV全长感染性克隆pNDFL-ⅦF/HN-VP2。将pNDFL-ⅦF/HN-VP2和辅助质粒共转染BHK-21细胞拯救重组NDV rChiLaSota-VP2。利用PCR和Western blot对重组NDV进行鉴定,并对重组病毒的生物学特性进行研究。结果显示,重组NDV rChiLaSota-VP2拯救成功并可以正确表达IBDV VP2蛋白。第25代重组NDV在鸡胚中的生物学特性研究表明,rChiLaSota-VP2保留了LaSota株在鸡胚中高滴度复制、低致病性和遗传稳定性等生物学特性。重组NDV rChiLaSota-VP2的鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.16)/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0。本研究构建的表达IBDV变异株VP2基因的重组NDV rChiLaSota-VP2将为研发同时防控我国流行的基因Ⅶ型NDV及IBDV变异株感染的高效廉价多联疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病毒 VP2蛋白 重组嵌合型新城疫病毒 基因Ⅶ型NDV

原文传递

重组新城疫病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的研究 被引量：2

4

作者 王子龙 葛金英 +3 位作者 王云鹤 于桂梅 孙继国 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期979-981,共3页

为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的... 为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的重组病毒(r La-PCV2/CapΔ41),并对外源蛋白的表达效果进行了检测。通过间接免疫荧光试验证明,两种重组病毒感染的BHK-21细胞中,PCV2 Cap蛋白以及删除NLS的CapΔ41蛋白均获得正确表达;其中,完整的Cap蛋白定位于核内,而删除NLS的CapΔ41蛋白则定位于胞浆中,本研究结果为研究新型PCV2疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 重组新城疫病毒 CAP蛋白 核定位信号

下载PDF 职称材料

新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒的构建与鉴定 被引量：2

5

作者 李红丽 闫巍文 +4 位作者 王红宝 郭雪丽 张晋强 王志宇 王毅 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第17期122-125,共4页

为了构建新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒（cVLP）,试验以目前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒为研究对象,通过昆虫杆状病毒表达系统构建了3种重组杆状病毒,分别为rBV-M、rBV-HN及r BV-FHA,并以适当比例感染悬浮... 为了构建新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒（cVLP）,试验以目前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒为研究对象,通过昆虫杆状病毒表达系统构建了3种重组杆状病毒,分别为rBV-M、rBV-HN及r BV-FHA,并以适当比例感染悬浮昆虫Sf9细胞,经蔗糖密度梯度纯化后获得嵌合型病毒样颗粒,同时采用新城疫和H9亚型禽流感标准阳性血清对嵌合型病毒样颗粒进行血凝和血凝抑制试验。结果表明：嵌合型病毒样颗粒以新城疫病毒M蛋白作为颗粒骨架,插入了新城疫病毒HN蛋白和经F蛋白胞内域融合的禽流感病毒HA蛋白,在电镜下观察纯化的嵌合型病毒样颗粒具有完整的囊膜结构及纤突,该颗粒具有结合两种阳性血清的能力。说明试验成功构建了包含有新城疫病毒M蛋白、HN蛋白和H9亚型禽流感病毒HA蛋白的嵌合型病毒样颗粒,并且保留了良好的生物学活性。 展开更多

关键词 基因Ⅶ型新城疫病毒 H9N2亚型禽流感 嵌合型病毒样颗粒 构建 鉴定

原文传递

新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒免疫效果分析 被引量：1

6

作者 李红丽 闫巍文 +4 位作者 王红宝 郭雪丽 张伟业 刘源 王志宇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期133-136,共4页

为了测定新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒(ND-H9N2 VLPs)作为疫苗候选株的免疫效果,试验将ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂制成ND-H9N2 VLPs疫苗,测定ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量及一次超剂量接种的安全性。选取7日龄非免疫雏鸡30只... 为了测定新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒(ND-H9N2 VLPs)作为疫苗候选株的免疫效果,试验将ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂制成ND-H9N2 VLPs疫苗,测定ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量及一次超剂量接种的安全性。选取7日龄非免疫雏鸡30只,随机分为3组,每组10只。第1组为ND-H9N2 VLPs联合佐剂免疫组,以350μL/只的剂量进行皮下注射免疫;第2组为商品疫苗组[鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+F株)]依照商品说明书进行免疫;第3组为阴性对照组,以相同方式注射同等剂量的生理盐水;初免两周后,以同等剂量和免疫方式进行加强免疫,加强免疫3周后,所有鸡用新城疫强毒TY-1株和H9N2亚型禽流感病毒SX-1株进行滴鼻、点眼攻毒,每周定时进行鸡翅下静脉采血,分离血清,用血凝抑制试验测定每只鸡的抗体效价,攻毒后连续14 d每天定时观察各组鸡群的临床症状,统计死亡数,计算免疫保护率。结果表明:ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量为30μg蛋白/只,用此疫苗以5倍剂量进行免疫,免疫鸡未出现新城疫、禽流感临床症状,表明此疫苗安全性良好。ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂免疫组与商品疫苗组比,两组鸡在临床症状和存活率上表现一致,在抵抗当前流行毒株的感染时,都能够提供100%保护作用;两组鸡免疫后新城疫和H9亚型禽流感抗体效价都是在第5周达到峰值,之后缓慢下降,但是ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂疫苗免疫组鸡的血清抗体效价与商品疫苗比要相对高些。说明本试验研制的ND-H9N2 VLPs作为疫苗候选株具有很大的防控优势。 展开更多

关键词 新城疫病毒 H9N2亚型禽流感病毒 嵌合型病毒样颗粒 安全性 免疫效果 血清抗体

原文传递

重组鸡白细胞介素18对不同基因型新城疫病毒HN基因表达蛋白免疫活性的影响

7

作者 张立娜 华彦 +1 位作者 柴洪亮 贾竞波 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期85-86,共2页

白细胞介素18（IL-18）是被广泛研究的细胞因子佐剂之一。研究选择了IL-18作为纯化蛋白多肽的佐剂，观察其对多肽疫苗的免疫应答作用，从而为研制新型的多肽疫苗奠定一定的理论基础。

关键词 鸡白细胞介素18 蛋白多肽 新城疫病毒 免疫活性 基因表达 基因型 重组 IL-18

下载PDF 职称材料

人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达

8

作者 解丽华 金宁一 +4 位作者 邵国喜 米志强 连海 薛丽娟 李萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期352-354,共3页

目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合... 目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合基因的p VAX1IL - 18HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染He L a细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。结果:酶切鉴定证实正确地构建了p VAX1IL - 18HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL - 18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。结论:IL - 18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。 展开更多

关键词 新城疫病毒 重组 遗传 白细胞介素18 嵌合表达质粒 基因表达

下载PDF 职称材料

嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建 被引量：1

9

作者 杜瑞琴 白云 +1 位作者 黎万玲 姜曼 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期48-51,共4页

目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5... 目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5’末端自身的StuI位点连接 ,构建嵌合跨膜型CD5 5DNA片段 ,序列测定后将此嵌合CD5 5片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒 ,酶切鉴定插入片段的方向。结果　DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5DNA阅读框完整、连接部位序列正确 ;HindⅢ酶切鉴定得到了正向插入的CD5 5TM pLXSN重组表达质粒。结论　我们成功构建了嵌合跨膜型CD5 5DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD5 5TM pLXSN ,为进一步在真核细胞中表达嵌合分子 ,比较研究GPI锚固型CD5 5分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。 展开更多

关键词 嵌合跨膜型分子 重组逆转录病毒表达载体 CD55基因 质粒

下载PDF 职称材料

CpG ODN B对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效应 被引量：3

10

作者 王长丽 黄祯雄 +4 位作者 王胜秋 吕进 宾晓芸 杨睿睿 唐华英 《生物技术通讯》 CAS 2020年第4期409-415,共7页

目的:探究CpG ODN作为疫苗佐剂对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫效果。方法:将CpG ODN B/P这2种类型的免疫佐剂分别与鸡新城疫重组杆状病毒载体疫苗BV-BXY-F混合后,以鼻腔免疫方式进行鸡体免疫,并进行攻毒保护实验,通过对鸡体的临床症... 目的:探究CpG ODN作为疫苗佐剂对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫效果。方法:将CpG ODN B/P这2种类型的免疫佐剂分别与鸡新城疫重组杆状病毒载体疫苗BV-BXY-F混合后,以鼻腔免疫方式进行鸡体免疫,并进行攻毒保护实验,通过对鸡体的临床症状观察,以及检测免疫保护率、中和抗体水平、淋巴细胞增殖活性、细胞因子含量,分析各CpG ODN对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。结果:BV-BXY-F+CpG ODN B免疫组鸡在免疫后42 d中和抗体效价最高,免疫保护率100%,中和抗体效价,sIgA、IgG、IgA、IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞含量较BV-BXY-F+CpG ODN P组分别提高了32.08%、8.44%、13.56%、23.71%、50.20%、132.97%、39.76%、38.43%、25.99%,且差异显著(P<0.05),与单独免疫组BV-BXY-F相比分别提高了13.71%、89.39%、10.41%、21.26%、159.17%、52.71%、237.84%、80.51%、75.57%。结论:CpG ODN B对增强鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效果最好。 展开更多

关键词 CpG ODN B型 P型 鸡新城疫重组杆状病毒疫苗 免疫佐剂

下载PDF 职称材料

融合域点突变的埃博拉病毒GP蛋白重组新城疫病毒的构建与免疫评价

11

作者 张海琳 王金良 +4 位作者 王翀 温志远 刘任强 步志高 葛金英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期171-177,共7页

扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋... 扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋白的重组病毒rLa-EBOVGP改变了NDV的侵入方式。为了研制出安全性更高的埃博拉候选疫苗株,本研究将EBOV GP蛋白的融合域I532突变为R后插入NDV LaSota疫苗株(rLa)基因组中,通过反向遗传学操作拯救表达EBOV GP(I532R)蛋白的重组NDV,并将经PCR鉴定正确的重组病毒在鸡胚中连续传代检测了其的体外遗传稳定性。RT-PCR鉴定结果显示,EBOV突变的GP(I532R)蛋白基因正确插入了NDV基因组中,表明获得了重组病毒rLa-EBOVGP(I532R);在鸡胚中连续传20代后,经RT-PCR扩增EBOV GP(I532R)基因后经测序鉴定,结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够保持良好的遗传稳定性。利用蔗糖梯度超速离心法纯化rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)病毒,分别进行western blot检测。结果显示,EBOV GP和GP(I532R)蛋白均能够正确表达;将rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)分别感染BHK-21细胞后,利用激光共聚焦试验分析EBOV GP(I532R)的表达和定位,结果显示GP(I532R)能够表达且位于BHK-21细胞的细胞膜上;对纯化病毒利用免疫电镜观察病毒颗粒,结果可见rLa-EBOVGP(I532R)与亲本病毒rLa结构特征相似,且GP(I532R)蛋白能够嵌合在重组病毒粒子表面;生长动力学试验结果表明,rLa-EBOVGP(I532R)与亲本株rLa在鸡胚中的生长特性基本一致,且能够稳定增殖;分别将重组病毒rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)经肌肉注射和滴鼻两种途径免疫小鼠,经稀释血清固定病毒的方法分别检测各组小鼠针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够诱导小鼠产生较高的针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。以上结果表明rLa-EBOVGP(I532R)具有作为防控EBOV感染的储备性候选疫苗株的潜力。本研究为进一步研究GP(I532R)的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 扎伊尔型埃博拉病毒 囊膜蛋白突变 重组新城疫病毒

下载PDF 职称材料

新城疫、血清4型和8型禽腺病毒病二联三价嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

12

作者 郭春红 李金斗 +4 位作者 丁佳欣 冯嘉轩 陈凯楠 姜峰 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2087-2093,2115,共8页

基于昆虫杆状病毒表达系统和新城疫病毒样颗粒载体平台,采用间接免疫荧光、Western blot和透射电镜等方式,构建一种表面展示NDV HN蛋白、FAdV4 Fiber-2蛋白、FAdV-8a Fiber蛋白和FAdV-8b Fiber蛋白的二联三价嵌合型病毒样颗粒(ND-FAdV-4... 基于昆虫杆状病毒表达系统和新城疫病毒样颗粒载体平台,采用间接免疫荧光、Western blot和透射电镜等方式,构建一种表面展示NDV HN蛋白、FAdV4 Fiber-2蛋白、FAdV-8a Fiber蛋白和FAdV-8b Fiber蛋白的二联三价嵌合型病毒样颗粒(ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs)。结果显示,成功构建了表达FAdV-8a Fiber和FAdV-8b Fiber蛋白的重组杆状病毒rBV-c8aFiber和rBV-c8bFiber。此外,ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs各组分蛋白均正确表达,是一种约100 nm、具备囊膜和纤突的纳米颗粒,为新城疫、禽腺病毒病的防控提供了一种安全的病毒样颗粒新型疫苗候选株。 展开更多

关键词 新城疫 血清4型和8型禽腺病毒病 昆虫杆状病毒表达系统 嵌合病毒样颗粒

原文传递

1型人副流感病毒嵌合重组候选疫苗

13

《生物制品快讯》 2003年第1期9-10,共2页

关键词 1型人副流感病毒 嵌合重组候选疫苗 弱毒 效力

下载PDF 职称材料

重组嵌合1型人副流感病毒疫苗候选株rHPIV3-1cp45在非洲绿猴中的免疫原性和保护性

14

作者 范行良 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2003年第3期138-138,共1页

关键词 重组嵌合1型 人副流感病毒疫苗 候选株 rHPIV3-1cp45 非洲绿猴 免疫原性 保护性

下载PDF 职称材料

戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫应答的初步研究 被引量：4

15

作者 洪艳 陈勇 +3 位作者 杨连华 王怡婷 经络 胡华军 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第9期1037-1039,共3页

目的:对含有HEV主要抗原表位的嵌合蛋白进行表达与纯化,并对其免疫原性进行研究.方法:将含有一段HEV ORF2基因片段(394～660 aa)和HEVORF3全基因的表达质粒pHEV23在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,其表达产物经Ni2+-NT... 目的:对含有HEV主要抗原表位的嵌合蛋白进行表达与纯化,并对其免疫原性进行研究.方法:将含有一段HEV ORF2基因片段(394～660 aa)和HEVORF3全基因的表达质粒pHEV23在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,其表达产物经Ni2+-NTA树脂亲和纯化,透析复性.纯化蛋白免疫小鼠,用ELISA检测小鼠血清IgG抗体,T细胞增殖反应检测细胞免疫应答.以Western-blot检测纯化蛋白对患者阳性血清的免疫反应性.结果:纯化蛋白的分子量为 55 KDa,纯度达 90% 以上;实验组特异性抗体水平明显高于对照组;T细胞增殖反应实验组与对照组比较有极显著性差异.纯化蛋白能与患者阳性血清呈特异反应. 结论:嵌合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础. 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 嵌合 重组蛋白

下载PDF 职称材料

HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建

16

作者 张东威 金宁一 +6 位作者 王宏伟 张应玖 王莉馨 罗坤 李萍 于洪臣 殷震 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期114-116,共3页

目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基... 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。 展开更多

关键词 人I型免疫缺陷病毒 嵌合基因 载体 基因重组 杆状病毒

下载PDF 职称材料

禽流感-新城疫重组二联苗分两阶段注射的意义 被引量：3

17

作者 甄润深 关建新 +1 位作者 袁海峰 李玉群 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期139-141,共3页

关键词 A型禽流感病毒 二联苗 新城疫 高致病性禽流感病毒 低致病性禽流感病毒 H7亚型 注射 重组

下载PDF 职称材料

肉用鸡、鹌鹑禽流感-新城疫重组二联活疫苗免疫试验 被引量：2

18

作者 洪建伟 顾小根 +7 位作者 陈伟杰 陆国林 俞国乔 徐辉 倪柏锋 赵灵燕 曹生福 陈英宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期679-680,682,共3页

关键词 高致病性禽流感 二联活疫苗 新城疫 免疫试验 重组 肉用鸡 鹌鹑 A型流感病毒

下载PDF 职称材料

表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选 被引量：1

19

作者 辛舒 田明尧 +7 位作者 曹佳媛 薛斐 杜寿文 谭鹏 肖朋朋 陈兴 郭海宁 金宁一 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期235-240,共6页

为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150... 为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150中,获得重组质粒pTS2GFPV150-F。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞进行同源重组,挑取表达增强型绿色荧光蛋白的噬斑,经多轮筛选获得重组病毒rFPV-F,应用PCR、RT-PCR、Western-blot等方法对重组鸡痘病毒进行鉴定。结果显示,成功获得NDV F基因及重组F基因的鸡痘病毒rFPV-F,并证实F基因已被整合到鸡痘病毒基因组中,且在感染细胞内被成功表达。本研究成功获得了1株表达NDV F基因的重组鸡痘病毒,为下一步开展动物体内免疫研究奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 基因Ⅶ型 F蛋白 鸡痘病毒穿梭载体 同源重组

原文传递

表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组耐热新城疫病毒的构建及免疫原性 被引量：3

20

作者 李丽 赵康 +5 位作者 张媛 王红琳 罗青平 邵华斌 潘兹书 温国元 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期865-871,共7页

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。为研发新型PCV2疫苗,采用反向遗传操作技术,以耐热低毒的新城疫病毒TS09-C株为载体,将PCV2主要免疫原蛋白Cap以单独编码框的方... 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。为研发新型PCV2疫苗,采用反向遗传操作技术,以耐热低毒的新城疫病毒TS09-C株为载体,将PCV2主要免疫原蛋白Cap以单独编码框的方式插入至TS09-C株的基因P和M之间,为增强Cap蛋白在载体内的高效表达及细胞外分泌,将Cap基因的核定位信号序列替换为组织纤溶酶原激活物信号肽序列(tPAs)。通过病毒拯救获得了重组新城疫病毒rTS-tPAs-Cap/N。Western blot和间接免疫荧光试验证实,重组病毒可在BHK-21细胞中高效表达Cap蛋白。生物学特性试验表明重组病毒保持了亲本TS09-C株的耐热、低毒和高细胞增殖特性,重组病毒免疫小鼠后可诱导机体产生较高的PCV2抗体水平。本研究为研发耐热、安全、免疫性好的PCV2疫苗奠定了良好的工作基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 重组新城疫病毒 耐热弱毒株

原文传递