多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率 被引量：26

1

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期490-493,共4页

目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体p... 目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG，构建重组质粒pBCG—EmⅡ／3；电穿孔法转化BCG，构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ／3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ／3抗原编码基因；双酶切证实EmⅡ／3抗原编码基因成功插入pBCG中；PCR证实rBCG—EmⅡ／3疫苗构建成功；免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ／3疫苗的表达产物在相对分子质量（Mr）约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带，且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗，为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 构建 表达效率

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多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究 被引量：5

2

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期408-410,共3页

目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（... 目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。疫苗免疫8周时用Em原头节进行攻击，感染后18周杀鼠取脾，分离脾细胞，流式细胞仪检测脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果 疫苗皮下注射组和鼻腔接种组的脾CD4^＋T细胞亚群比值分别为0．345±0．018、0．314±0．014，与PBS对照组（0．216±0．027）比较明显增高（q值分别为3．93、3．76，P〈0．01）；CD8^＋T细胞亚群比值分别为0．091±0．005、0．083±0．007，与PBS对照组（0．085±0．018）比较无明显变化（q值分别为0．92、0．89，P〉0．05）；CD4^＋／CD8^＋亚群比值分别为3．81±0．30、3．80±0．44，与PBS对照组（2．75±1．08）比较明显增高（q值分别为3.25、3．06，P〈0．01）。皮下注射组的CD4^＋和CD8^＋T细胞亚群数目显著高于鼻腔内接种组（q值分别为3．52、2．63，P〈0．01或〈0．05）。结论 CD4^＋T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 重组bcg—emⅱ/3疫苗 T淋巴细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗促进小鼠脾细胞因子的分泌 被引量：3

3

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第9期966-969,共4页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测脾细胞培养上清液中的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平，同时设有PBS对照。结果疫苗接种组中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～6、2～6、2—10和8～10周升高，分别在免疫后4、4、8和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗在免疫早期（2～8周）即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导的保护力观察 被引量：10

4

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期156-158,共3页

目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG-EmⅡ／3）疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。接种免疫8周，... 目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG-EmⅡ／3）疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。接种免疫8周，用Em原头节进行攻击感染，感染后18周剖杀小鼠，称取检获泡球蚴质量，计算减蚴率，并用ELISA法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果与PBS对照组比较，疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低（q=2．65、3．68，P〈0．05或〈0．01），疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较，检获泡球蚴质量降低（q=2．78，P〈0．05），疫苗接种组的减蚴率为63．23％～74．70％；与疫苗鼻腔内接种前比较．接种后和Em原头节攻击后小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平均明显升高（P〈0．05或〈o．01），IsG1降低（P〈0．01），IgG3未见明显改变（P〉0．05）。结论重组BCG-EmⅡ／3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径．IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 重组bcg-emⅱ/3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠的免疫保护力观察 被引量：7

5

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1276-1279,共4页

目的探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀... 目的探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平;分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果疫苗接种组的减蚴率为45·29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低;疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE以及CD4+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠脾细胞凋亡的研究 被引量：6

6

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期636-638,共3页

目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和PBS对照组。免疫8周时用Em原头节攻击感染,感染... 目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和PBS对照组。免疫8周时用Em原头节攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率。结果与PBS对照组相比,疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低(q=2.65、3.68,P<0.05或P<0.01),疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较,检获泡球蚴质量明显降低(q=2.78,P<0.05),疫苗接种组的减蚴率为63.23%～74.70%;疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组(P<0.01);皮下注射组的脾细胞凋亡发生率明显低于鼻腔内接种组(P<0.01)。结论泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞发生凋亡。多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗接种可抑制感染鼠脾细胞凋亡。 展开更多

关键词 小泡棘球蚴病 重组bcg-emⅱ/3疫苗 脾 细胞凋亡 多房棘球绦虫 疫苗

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子的变化 被引量：6

7

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期911-913,共3页

目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染。感染后18周杀鼠取脾,... 目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染。感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,并收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;皮下注射组的TNF-α水平高于鼻腔内接种组。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可诱导小鼠产生Th1型细胞应答,抵抗Em原头节的攻击感染。疫苗皮下注射途径优于鼻腔内接种。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—em II/3疫苗 重组bcg.eml4-3—3疫苗 细胞因子

原文传递

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡 被引量：7

8

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第4期292-294,共3页

目的:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8wk后,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感... 目的:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8wk后,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染18wk杀鼠取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组.结论:泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡,而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡. 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 脾/细胞学 细胞凋亡

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察 被引量：4

9

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第7期676-678,共3页

目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD... 目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD_4^+和CD_8^+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD_4^+和CD_8^+T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周升高,分别在免疫后6和10周达最高水平。结论:CD_4^+T细胞亚群数目在多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫早期(2～6周)显著增加, 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察 被引量：4

10

作者 李文桂 朱佑明 王鸿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期641-643,共3页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～10周和2～18周升高,分别在免疫后4周和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可诱导小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的增殖。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 脾细胞亚群

原文传递

多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察 被引量：3

11

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第3期197-199,共3页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠，免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠，眼球取血，常规ELISA测定血清IgG及其亚类和Ig... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠，免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠，眼球取血，常规ELISA测定血清IgG及其亚类和IgE水平，同时设有PBS对照。结果疫苗免疫组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2-18周升高，分别在免疫后10、4和4周达最高水平，ELISA A值分别为0.097±0.030、0.024±0.003和0.022±0.003;血清IgG1和IgE水平均在免疫后2-18周显著降低，分别在免疫后4周和18周达最低水平，A值分别为0.022±0.005和0.181±0.011;血清IgG3水平在免疫后10-12周增加，在免疫后12周达最高水平，A值为0.212±0.008。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 IGG及其亚类 IGE

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察 被引量：2

12

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第7期502-505,共4页

目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法将混合疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB／c鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠，取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收... 目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法将混合疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB／c鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠，取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，测定IL-2、IFN-7、TNF-α和IL-4水平。试验设有PBS对照。结果疫苗接种组小鼠脾细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～10周、4～8周、6～10周和4～6周升高，分别在免疫后6、6、8和4周达最高水平，含量分别为10．0pg／ml、（75．0±6．6）pg／ml、（245．0±83．0）pg／ml和（187．5±16．5）pg／ml。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmII／3和BCG-Em14—3—3疫苗在免疫早期（2～8周）即可诱导小鼠产生TH1和TH2混合型免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察 被引量：2

13

作者 蒋光琼 李文桂 +1 位作者 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第7期780-783,共4页

目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦... 目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 重组bcg—em14—3—3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响 被引量：2

14

作者 杨梅 李文桂 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第8期796-798,共3页

目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法:用重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分... 目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法:用重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18h,然后用Annexin V-FITC染色法检测脾细胞凋亡。结果:小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P<0.05或P<0.01);每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P<0.05或P<0.01);鼻腔粘膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组(P<0.01)。结论:多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4+T细胞亚群的数量,加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 脾细胞 凋亡

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾脏T细胞亚群的变化 被引量：4

15

作者 唐君 李文桂 +1 位作者 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期575-577,580,共4页

目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感... 目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高;皮下注射组的CD4+和CD4+/CD8+亚群比值显著高于鼻腔内接种组。结论:CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起一定作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 bcg-em14-3-3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定 被引量：19

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作者 杨梅 李文桂 朱佑明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1026-1029,共4页

目的构建和鉴定多房棘球绦虫(Em)重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(geneSOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆到大... 目的构建和鉴定多房棘球绦虫(Em)重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(geneSOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3;用电穿孔法将该质粒导入Bb,构建多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。结果PCR成功扩增出2554bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗构建成功。结论成功构建了多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗,为该疫苗的开发和利用打下了坚实的实验基础。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组Bb-emⅱ/3-em14-3-3疫苗 构建 鉴定

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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3疫苗的构建及其表达效率 被引量：4

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作者 杨梅 李文桂 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期652-656,共5页

目的:构建多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-EmⅡ/3疫苗,并研究EmⅡ/3分子在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法:通过PCR扩增EmⅡ/3抗原编码基因;将该基因定向克隆于含有谷胱... 目的:构建多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-EmⅡ/3疫苗,并研究EmⅡ/3分子在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法:通过PCR扩增EmⅡ/3抗原编码基因;将该基因定向克隆于含有谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione s-transferase,GST)基因的大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-EmⅡ/3;用电穿孔法将该质粒导入Bb,构建多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3疫苗。经PCR和酶切鉴定后以IPTG诱导表达EmⅡ/3/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Westernblot对表达产物进行鉴定。结果:PCR成功扩增出1759bp的EmⅡ/3基因;双酶切证实EmⅡ/3基因插入pGEX-1λT中;PCR和双酶切证实重组Bb-EmⅡ/3疫苗构建成功;SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了EmⅡ/3/GST融合蛋白。结论:成功构建了多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3疫苗,重组质粒pGEX-EmⅡ/3在大肠杆菌中获得了高效表达,Westernblot结果提示表达出的EmⅡ/3重组蛋白具有特异的抗原活性。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组Bb—emⅱ/3疫苗 构建 表达

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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响 被引量：6

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作者 杨梅 李文桂 朱佑明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1032-1035,共4页

目的检测多房棘球绦虫重组双歧杆菌（Bb）-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法用重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔粘膜接种以及口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫... 目的检测多房棘球绦虫重组双歧杆菌（Bb）-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法用重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔粘膜接种以及口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,检获泡球蚴组织,称取重量,计算减蚴率;分离脾细胞,用ConA刺激培养16-18h,然后用流式细胞仪检测脾细胞凋亡。结果疫苗免疫组小鼠检获泡球蚴质量均明显低于PBS对照组;小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组（P〈0.05或P〈0.01）,每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组（P〈0.05或P〈0.01）,皮下注射组脾细胞凋亡发生率最低。结论多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4＋T细胞亚群的数量,诱导宿主产生一定的保护力,对抗Em原头节攻击。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组Bb-emⅱ/3-em14-3-3疫苗 脾细胞 凋亡

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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导小鼠细胞因子变化的研究 被引量：12

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作者 杨梅 李文桂 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期781-784,共4页

目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响。方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔... 目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响。方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养,分别以多房棘球绦虫抗原(EmAg)、刀豆素A(ConA)刺激诱生白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ);以脂多糖(LPS)刺激诱生肿瘤坏死因子α(TNF-α)。常规ELISA测定脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果:与对照组相比,疫苗免疫组IFN-γ、IL-12、TNF-α水平增加,IL-10水平降低,EmAg刺激组和ConA或LPS刺激组细胞因子水平明显高于相应的原液组。结论:多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可诱导攻击感染小鼠产生Th1型细胞免疫应答,增强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组Bb-emⅱ/3-em14-3-3疫苗 原头蚴 细胞因子

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗不同接种途径诱导小鼠细胞因子的研究 被引量：2

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期130-132,共3页

目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或Con... 目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染;疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—em14—3—3 疫苗 细胞因子

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