四种金属离子亲和层析纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的效果比较 被引量：1

1

作者 沈荣 蒋琳 +3 位作者 应莲芳 辛芳 杨军 沈心亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期229-231,共3页

目的 选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件。方法 在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果 包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异。结论 镍离子柱... 目的 选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件。方法 在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果 包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异。结论 镍离子柱纯化效果最佳。 展开更多

关键词 金属离子亲和层析 纯化 重组戊型肝炎病毒 包涵体 效果比较 固相金属亲和层析

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蛋白质在固定金属离子亲和色谱中吸附与洗脱研究进展 被引量：3

2

作者 杜涛 赵胜利 +2 位作者 文九巴 李董轩 朱金娥 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第7期4-7,共4页

介绍了固定金属离子亲和色谱(IMAC)吸附蛋白质的基本原理、蛋白质吸附与解吸的影响因素以及洗脱过程中需要注意的问题,并简述了IMAC今后研究的方向。

关键词 固定金属离子亲和色谱 蛋白质 吸附 洗脱

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壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化 被引量：1

3

作者 包海生 高秀峰 +1 位作者 郑雪妮 李永生 《酿酒科技》 北大核心 2012年第2期27-29,共3页

以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。... 以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。 展开更多

关键词 壳聚糖 固定化金属离子亲和层析 基因工程 乙醛脱氢酶 组氨酸标签 纯化

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固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子的制备及其用于磷酸化蛋白免疫印迹标记 被引量：1

4

作者 毛雨晓 郑蒙蒙 +2 位作者 刘桂真 安保礼 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期384-390,共7页

发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳... 发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳米粒子,粒子平均粒径为60 nm。然后通过共聚反应在FITC@SiO_(2)纳米粒子表面生成一层聚合物用于保护纳米粒子,并引入N,N-(双羧甲基)-L-赖氨酸功能基团用于螯合金属离子,从而实现固定化金属离子亲和作用。以α-酪蛋白作为实验模型,用高效液相色谱-质谱研究了螯合不同金属离子的发光纳米粒子对磷酸化蛋白的识别作用。结果表明,螯合了Ti^(4+)金属离子的发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对α-酪蛋白酶解液中的磷酸化肽段的富集作用最强。利用这种发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对磷酸化肽段的特异性识别性能,可用于Western Blot实验中标记磷酸化蛋白的条带。结果显示,α-酪蛋白的电泳条带可以被亲和发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子标记,而作为对照的牛血清白蛋白则没有被标记。 展开更多

关键词 免疫印迹 固定化金属离子亲和 发光二氧化硅纳米粒子 磷酸化蛋白标记

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固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化

5

作者 李耀军 罗元明 +3 位作者 武淑珍 高友鹤 刘彦信 郑德先 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期1-4,共4页

在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-ME-IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴... 在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-ME-IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定,就必须对富集方法进行选择和优化。利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究。结果表明,ME-IMAC方法容易发生样品丢失,质谱结果的分析也比较复杂,而Non-ME-IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想。另外,优化了Non-ME-IMAC方法的实验条件,指出最佳的结合溶液是8%ACN/0.3%TFA,最佳的洗脱溶液是0.1mol/L EDTA(pH值8.0),从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法。 展开更多

关键词 磷酸化多肽 甲酯化反应 固化的金属离子亲和层析 质谱

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基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集 被引量：3

6

作者 申惠莲 卡哈尔.阿里木 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期334-338,共5页

采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click... 采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。 展开更多

关键词 天冬氨酸 固相萃取 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化肽 富集

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固定化金属离子亲和磁性纳米粒的制备及其蛋白吸附特性研究 被引量：2

7

作者 伍善广 陆苑 +2 位作者 田玉红 冯学珍 刘赛赛 《食品工业》 CAS 北大核心 2015年第6期49-53,共5页

采用纳米沉淀法制备琼脂糖磁性纳米粒,并对其进行活化、偶联连接臂、螯合Ni2+离子,制备固定化金属离子磁性纳米粒(NS-ECH-IDA-Ni2+)。以NS-ECH-IDA-Ni2+为吸附剂,通过静态吸附试验研究NS-ECH-IDANi2+对牛血清蛋白(BSA)的吸附性能,并进... 采用纳米沉淀法制备琼脂糖磁性纳米粒,并对其进行活化、偶联连接臂、螯合Ni2+离子,制备固定化金属离子磁性纳米粒(NS-ECH-IDA-Ni2+)。以NS-ECH-IDA-Ni2+为吸附剂,通过静态吸附试验研究NS-ECH-IDANi2+对牛血清蛋白(BSA)的吸附性能,并进行了吸附动力学和吸附等温线研究。结果表明:所得纳米粒球形圆整,平均粒径为850 nm,四氧化三铁含量为42.85%,环氧基修饰密度为72μmol/g,其Ni2+含量为58μmol/g。在试验条件下,吸附过程可用准二级动力学方程描述(R2=0.997 9~0.999 8)。p H是影响吸附作用的重要因素,当在p H约为9.0时,BSA的吸附量达到最大值。吸附等温曲线符合Langmuir等温吸附模型(R2=0.965 8)。 展开更多

关键词 磁性纳米粒 金属离子亲和 牛血清蛋白 吸附

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固定化金属离子亲和色谱研究进展 被引量：4

8

作者 韩彬 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第22期92-100,共9页

固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具... 固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具有亲和选择性高、生物兼容性好、可逆再生等优势,迄今已发展了40余年,广泛应用于靶分子的特异性富集、分离与纯化,本文综述了近3年固定化金属离子亲和色谱纳米材料、微球色谱基质、棉纤维、分子印迹材料、整体材料、共价有机骨架等方面的研究进展。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 富集 纯化 材料

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新型固定化铁离子亲和色谱整体柱的制备及评价 被引量：1

9

作者 张丽媛 王晖 +3 位作者 梁振 单亦初 张丽华 张玉奎 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第5期659-662,共4页

以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、... 以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、回收率高、重现性好。此外,利用该整体柱实现了牛奶蛋白质酶解产物中磷酸化肽段的选择性富集。本实验研制的Fe-IMAC整体柱有望用于磷酸化蛋白质组研究。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化肽 选择性富集 整体柱 铁

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掺Ni^(2+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)金属离子聚合物对BSA的吸附性能研究

10

作者 窦尧 杨晓明 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1435-1439,共5页

本文以丙烯酰胺作为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂、偶氮二异丁腈作为引发剂作为反应体系,分别向该体系中加入一定量的醋酸镍、醋酸铜和氯化锌以获得对蛋白质具有亲和力的活性位点,采用方便易行的热引发本体聚合方法制备了... 本文以丙烯酰胺作为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂、偶氮二异丁腈作为引发剂作为反应体系,分别向该体系中加入一定量的醋酸镍、醋酸铜和氯化锌以获得对蛋白质具有亲和力的活性位点,采用方便易行的热引发本体聚合方法制备了对蛋白质具有特异性吸附的三种掺金属离子聚合物,并通过透射电子显微镜和马尔文激光粒度仪对其进行了表征。随后用牛血清白蛋白(BSA)为蛋白质模型,考察了这三种掺金属离子聚合物对蛋白质的吸附性能。结果表明,这三种掺金属离子聚合物对蛋白质的吸附是由聚合物中的金属离子含量决定的,属于特异性的亲和吸附,且掺铜离子聚合物的吸附性能最强。 展开更多

关键词 掺金属离子聚合物 牛血清白蛋白 金属离子亲和色谱

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铜离子与SALI3-2蛋白的相互作用 被引量：2

11

作者 唐玉林 高占 +3 位作者 徐宏 贺建芝 董一含 郑易之 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期128-134,共7页

用1/2 MS固体培养基培养拟南芥幼苗,研究了CuCl2对转Sali3-2基因植株生长的影响,发现转基因植株Sali3-2的表达可提高其耐受Cu2+胁迫的能力.进一步克隆Sali3-2基因,表达并纯化了缺失信号肽的SALI3-2蛋白.利用固定金属离子亲和色谱(IMAC)... 用1/2 MS固体培养基培养拟南芥幼苗,研究了CuCl2对转Sali3-2基因植株生长的影响,发现转基因植株Sali3-2的表达可提高其耐受Cu2+胁迫的能力.进一步克隆Sali3-2基因,表达并纯化了缺失信号肽的SALI3-2蛋白.利用固定金属离子亲和色谱(IMAC)分析发现,Cu2+能够与SALI3-2蛋白结合.通过荧光光谱及圆二色光谱(CD)进一步研究了Cu2+与SALI3-2蛋白间的键合机理.结果表明,Cu2+可引起SALI3-2蛋白内源性荧光猝灭,其猝灭机制为静态猝灭;Cu2+与SALI3-2蛋白的结合常数为8.89×106,结合位点数为1.6.CD分析显示,Cu2+与SALI3-2蛋白的结合未使SALI3-2蛋白二级结构发生明显改变.由此推测,在高浓度铜离子胁迫下,SALI3-2蛋白通过结合一定数量的Cu2+使蛋白的构象发生改变,这可能是SALI3-2蛋白的表达使植物耐受Cu2+胁迫能力提高的分子机制之一. 展开更多

关键词 铜离子 SALI3-2蛋白 金属离子亲和层析 荧光光谱 圆二色光谱

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一种双水相亲和分配配基的制备过程优化——亚氨基二乙酸-聚乙二醇 被引量：3

12

作者 文禹撷 林东强 +1 位作者 陆瑾 姚善泾 《化学反应工程与工艺》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期129-134,共6页

　考察了不同亚氨基二乙酸(IDA)取代度的亚氨基二乙酸-聚乙二醇(IDA-PEG)的制备,并进行了条件优化(BF3浓度,NaOH浓度,反应时间,IDA结合条件等)。通过控制环氧氯丙烷与聚乙二醇的摩尔配比,得到了不同Cu( )含量的固定化金属亲和配基:Cu( )... 　考察了不同亚氨基二乙酸(IDA)取代度的亚氨基二乙酸-聚乙二醇(IDA-PEG)的制备,并进行了条件优化(BF3浓度,NaOH浓度,反应时间,IDA结合条件等)。通过控制环氧氯丙烷与聚乙二醇的摩尔配比,得到了不同Cu( )含量的固定化金属亲和配基:Cu( )-IDA-PEG(A)(0.24molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(B)(0.51molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(C)(0.75molCu2+/molPEG),并初步探讨了固定化金属亲和配基的添加对PEG4000-(NH4)2SO4-H2O双水相系统相图的影响。 展开更多

关键词 双水相亲和分配配基 制备过程 优化 亚氨基二乙酸 聚乙二醇 固定化金属离子亲和层析 分离 蛋白质

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氧化锆微球担体-8-羟基喹啉鳌合固定相的合成及其在痕量金属分析中的应用 被引量：1

13

作者 宋秘钊 张慧君 +2 位作者 王征 Frank S.CLee 王小如 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期979-986,共8页

以氧化锆微球为担体,通过mannich反应得到在氧化锆微球上键合8-羟基喹啉的痕量金属富集分离固定相,并对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的氧化锆微球键合8-羟基喹啉金属鳌合固定相用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和... 以氧化锆微球为担体,通过mannich反应得到在氧化锆微球上键合8-羟基喹啉的痕量金属富集分离固定相,并对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的氧化锆微球键合8-羟基喹啉金属鳌合固定相用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析流程中的固定相,对大洋海水中的痕量铅和镉进行了在线分析,得到了较满意的结果。 展开更多

关键词 金属离子亲和色谱 氧化锆微球担体 8-羟基喹啉 电感耦合等离子体质谱 流动注射

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基于亲和色谱的肺癌细胞磷酸化蛋白质组研究及其应用 被引量：4

14

作者 张宝会 王晨桐 +1 位作者 郭淼 肖华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期77-86,共10页

磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(T... 磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(Ti^4+-IMAC)为载体,进行磷酸化肽段富集。比较了10μm Ti^4+-IMAC通过振荡法和固相萃取法(SPE)富集磷酸肽的效果,发现振荡法可以富集到更多的磷酸肽;对比了两种尺寸(10μm和30μm)Ti^4+-IMAC在磷酸化肽段富集中的差异,发现小尺寸材料富集效果更佳。进一步采用优化的策略比较了不同转移能力肺癌细胞的磷酸化蛋白质组,免标记定量蛋白质组学结果表明,优化的Ti^4+-IMAC方法可以从正常的肺成纤维细胞MRC5、低转移肺癌细胞95C和高转移肺癌细胞95D中分别鉴定到510、863和1108种磷酸化蛋白质,其中317种为3组所共有。该研究共鉴定到1268种磷酸化蛋白质上的7560个磷酸化位点,其中1130个为差异磷酸化位点,文献报道显示部分异常表达的激酶与癌症转移密切相关。通过生信对比分析发现,异常表达的磷酸化蛋白质主要与细胞侵袭、迁移和死亡等细胞迁移方面的功能有关。通过优化磷酸化肽富集策略,初步阐明了磷酸化蛋白质网络的异常与肺癌转移之间的相关性,该方法有望用于肺癌进展相关的磷酸化位点、磷酸化蛋白质及其信号通路研究。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化 蛋白质组 癌症转移 肺癌细胞

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亲和色谱分离技术 被引量：5

15

作者 王勇 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2012年第2期15-21,共7页

亲和色谱是色谱分离技术的重要手段,具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点。综述简单阐述了亲和色谱的起源与发展,详细讨论了不同亲和色谱在不同领域的应用,并对该技术的应用前景进行了初步展望。

关键词 亲和色谱 分离纯化 免疫亲和色谱 金属离子亲和色谱

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铜离子固定金属亲和色谱在生物大分子中的应用 被引量：3

16

作者 王燕 李蓉 +1 位作者 陈国亮 王小刚 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期838-845,共8页

铜离子固定金属亲和色谱作为一种有效的分析方法,已普遍应用于生物大分子的分离与纯化。本文从理论和应用两个方面就新型基质、螯合配体、色谱动力学、联用技术以及蛋白质分离纯化、复性等方面进行了评述。

关键词 铜离子固定金属亲和色谱 生物大分子 螯合配体 色谱动力学

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8-羟基喹啉-硅胶介质的合成及其在海水中痕量铅检测的应用 被引量：12

17

作者 王征 荆淼 +1 位作者 黎先春 王小如 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期459-463,共5页

详细研究了以大孔硅胶为基质,一步合成8羟-基喹啉(8-HQ)型金属螯合色谱填料的方法,采用正交试验对合成方法进行了优化。与传统合成方法所得的填料进行了比较,从理化指标等方面来看,新的合成方法为佳。将该法用作微柱流动注射(FIA)在线... 详细研究了以大孔硅胶为基质,一步合成8羟-基喹啉(8-HQ)型金属螯合色谱填料的方法,采用正交试验对合成方法进行了优化。与传统合成方法所得的填料进行了比较,从理化指标等方面来看,新的合成方法为佳。将该法用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析流程中的固定相,对大洋海水中的痕量铅进行了在线分析,得到了较满意的结果。 展开更多

关键词 金属离子亲和色谱 硅胶基质 8-羟基喹啉 电感耦合等离子体质谱 流动注射

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复合物Ca^+-RNA碱基的结构与稳定性 被引量：5

18

作者 张兴初 胡义华 +3 位作者 方允 陈丽 武华 王小涓 《Chinese Journal of Chemical Physics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期537-540,共4页

用密度泛函理论(DFT)中的杂化密度泛函B3LYP方法,在6311+G(2df,2p)基组水平上,确定了RNA碱基与Ca+的气相金属离子亲和能和复合物的优化结构.通过考虑Ca+作用于RNA碱基互变异构体的不同位置,获得了所有稳定的复合物.对于胞核嘧啶,最稳定... 用密度泛函理论(DFT)中的杂化密度泛函B3LYP方法,在6311+G(2df,2p)基组水平上,确定了RNA碱基与Ca+的气相金属离子亲和能和复合物的优化结构.通过考虑Ca+作用于RNA碱基互变异构体的不同位置,获得了所有稳定的复合物.对于胞核嘧啶,最稳定的复合物起源于最稳定的分子互变异构体;对于胸腺嘧啶,最稳定的分子互变异构体形成的复合物的键能最小,而最不稳定的互变异构体形成的复合物键能最强;尿嘧啶的情形与胸腺嘧啶相似.在互变异构体复合物中,键能是依赖于金属离子成键的位置,而总能量取决于全部的原子和它们之间的相对位置,这可能是造成几种互变异构体复合物键能和总能量变化趋势并不一致的原因. 展开更多

关键词 DFT RNA 嘧啶 金属离子亲和能 稳定性

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蛋白折叠液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子 被引量：9

19

作者 王超展 王骊丽 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期514-517,共4页

用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线... 用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF。该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 蛋白折叠 纯化 重组人粒细胞集落刺激因子 大肠杆菌

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钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用 被引量：2

20

作者 杨渐 俞昌喜 +1 位作者 许盈 廖联明 《药物生物技术》 CAS 2013年第3期220-224,共5页

为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层... 为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层析分离纯化制备较大量的hIGF-1融合蛋白。结果显示,钴亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时表现出更好的可操作性与纯化效果,线性放大条件后分离纯化效果稳定,制备hIGF-1融合蛋白产物纯度约为95%,蛋白获得率约为10.78%。研究初步建立了切实可行的钴金属螯合亲和层析分离纯化制备hIGF-1融合蛋白的工艺。 展开更多

关键词 人胰岛素样生长因子-1 金属螯和亲和层析 固相化金属离子亲和层析 六聚组氨酸 纯化 镍离子 钴离子

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