蛋白质在固定金属离子亲和色谱中吸附与洗脱研究进展 被引量：3

1

作者 杜涛 赵胜利 +2 位作者 文九巴 李董轩 朱金娥 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第7期4-7,共4页

介绍了固定金属离子亲和色谱(IMAC)吸附蛋白质的基本原理、蛋白质吸附与解吸的影响因素以及洗脱过程中需要注意的问题,并简述了IMAC今后研究的方向。

关键词 固定金属离子亲和色谱 蛋白质 吸附 洗脱

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基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集 被引量：3

2

作者 申惠莲 卡哈尔.阿里木 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期334-338,共5页

采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click... 采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。 展开更多

关键词 天冬氨酸 固相萃取 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化肽 富集

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固定化金属离子亲和色谱研究进展 被引量：4

3

作者 韩彬 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第22期92-100,共9页

固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具... 固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具有亲和选择性高、生物兼容性好、可逆再生等优势,迄今已发展了40余年,广泛应用于靶分子的特异性富集、分离与纯化,本文综述了近3年固定化金属离子亲和色谱纳米材料、微球色谱基质、棉纤维、分子印迹材料、整体材料、共价有机骨架等方面的研究进展。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 富集 纯化 材料

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新型固定化铁离子亲和色谱整体柱的制备及评价 被引量：1

4

作者 张丽媛 王晖 +3 位作者 梁振 单亦初 张丽华 张玉奎 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第5期659-662,共4页

以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、... 以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、回收率高、重现性好。此外,利用该整体柱实现了牛奶蛋白质酶解产物中磷酸化肽段的选择性富集。本实验研制的Fe-IMAC整体柱有望用于磷酸化蛋白质组研究。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化肽 选择性富集 整体柱 铁

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基于亲和色谱的肺癌细胞磷酸化蛋白质组研究及其应用 被引量：4

5

作者 张宝会 王晨桐 +1 位作者 郭淼 肖华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期77-86,共10页

磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(T... 磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,其异常往往会导致细胞内信号通路的紊乱和疾病的发生。固定化金属离子亲和色谱(IMAC)是磷酸化肽段的高效富集技术,在磷酸化蛋白质组研究方面应用广泛。该研究以金属钛离子(Ti^4+)螯合IMAC材料(Ti^4+-IMAC)为载体,进行磷酸化肽段富集。比较了10μm Ti^4+-IMAC通过振荡法和固相萃取法(SPE)富集磷酸肽的效果,发现振荡法可以富集到更多的磷酸肽;对比了两种尺寸(10μm和30μm)Ti^4+-IMAC在磷酸化肽段富集中的差异,发现小尺寸材料富集效果更佳。进一步采用优化的策略比较了不同转移能力肺癌细胞的磷酸化蛋白质组,免标记定量蛋白质组学结果表明,优化的Ti^4+-IMAC方法可以从正常的肺成纤维细胞MRC5、低转移肺癌细胞95C和高转移肺癌细胞95D中分别鉴定到510、863和1108种磷酸化蛋白质,其中317种为3组所共有。该研究共鉴定到1268种磷酸化蛋白质上的7560个磷酸化位点,其中1130个为差异磷酸化位点,文献报道显示部分异常表达的激酶与癌症转移密切相关。通过生信对比分析发现,异常表达的磷酸化蛋白质主要与细胞侵袭、迁移和死亡等细胞迁移方面的功能有关。通过优化磷酸化肽富集策略,初步阐明了磷酸化蛋白质网络的异常与肺癌转移之间的相关性,该方法有望用于肺癌进展相关的磷酸化位点、磷酸化蛋白质及其信号通路研究。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 磷酸化 蛋白质组 癌症转移 肺癌细胞

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亲和色谱分离技术 被引量：5

6

作者 王勇 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2012年第2期15-21,共7页

亲和色谱是色谱分离技术的重要手段,具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点。综述简单阐述了亲和色谱的起源与发展,详细讨论了不同亲和色谱在不同领域的应用,并对该技术的应用前景进行了初步展望。

关键词 亲和色谱 分离纯化 免疫亲和色谱 金属离子亲和色谱

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蛋白折叠液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子 被引量：9

7

作者 王超展 王骊丽 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期514-517,共4页

用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线... 用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF。该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 蛋白折叠 纯化 重组人粒细胞集落刺激因子 大肠杆菌

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掺Ni^(2+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)金属离子聚合物对BSA的吸附性能研究

8

作者 窦尧 杨晓明 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1435-1439,共5页

本文以丙烯酰胺作为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂、偶氮二异丁腈作为引发剂作为反应体系,分别向该体系中加入一定量的醋酸镍、醋酸铜和氯化锌以获得对蛋白质具有亲和力的活性位点,采用方便易行的热引发本体聚合方法制备了... 本文以丙烯酰胺作为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂、偶氮二异丁腈作为引发剂作为反应体系,分别向该体系中加入一定量的醋酸镍、醋酸铜和氯化锌以获得对蛋白质具有亲和力的活性位点,采用方便易行的热引发本体聚合方法制备了对蛋白质具有特异性吸附的三种掺金属离子聚合物,并通过透射电子显微镜和马尔文激光粒度仪对其进行了表征。随后用牛血清白蛋白(BSA)为蛋白质模型,考察了这三种掺金属离子聚合物对蛋白质的吸附性能。结果表明,这三种掺金属离子聚合物对蛋白质的吸附是由聚合物中的金属离子含量决定的,属于特异性的亲和吸附,且掺铜离子聚合物的吸附性能最强。 展开更多

关键词 掺金属离子聚合物 牛血清白蛋白 金属离子亲和色谱

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铜离子固定金属亲和色谱在生物大分子中的应用 被引量：3

9

作者 王燕 李蓉 +1 位作者 陈国亮 王小刚 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期838-845,共8页

铜离子固定金属亲和色谱作为一种有效的分析方法,已普遍应用于生物大分子的分离与纯化。本文从理论和应用两个方面就新型基质、螯合配体、色谱动力学、联用技术以及蛋白质分离纯化、复性等方面进行了评述。

关键词 铜离子固定金属亲和色谱 生物大分子 螯合配体 色谱动力学

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氧化锆微球担体-8-羟基喹啉鳌合固定相的合成及其在痕量金属分析中的应用 被引量：1

10

作者 宋秘钊 张慧君 +2 位作者 王征 Frank S.CLee 王小如 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期979-986,共8页

以氧化锆微球为担体,通过mannich反应得到在氧化锆微球上键合8-羟基喹啉的痕量金属富集分离固定相,并对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的氧化锆微球键合8-羟基喹啉金属鳌合固定相用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和... 以氧化锆微球为担体,通过mannich反应得到在氧化锆微球上键合8-羟基喹啉的痕量金属富集分离固定相,并对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的氧化锆微球键合8-羟基喹啉金属鳌合固定相用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析流程中的固定相,对大洋海水中的痕量铅和镉进行了在线分析,得到了较满意的结果。 展开更多

关键词 金属离子亲和色谱 氧化锆微球担体 8-羟基喹啉 电感耦合等离子体质谱 流动注射

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8-羟基喹啉-硅胶介质的合成及其在海水中痕量铅检测的应用 被引量：12

11

作者 王征 荆淼 +1 位作者 黎先春 王小如 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期459-463,共5页

详细研究了以大孔硅胶为基质,一步合成8羟-基喹啉(8-HQ)型金属螯合色谱填料的方法,采用正交试验对合成方法进行了优化。与传统合成方法所得的填料进行了比较,从理化指标等方面来看,新的合成方法为佳。将该法用作微柱流动注射(FIA)在线... 详细研究了以大孔硅胶为基质,一步合成8羟-基喹啉(8-HQ)型金属螯合色谱填料的方法,采用正交试验对合成方法进行了优化。与传统合成方法所得的填料进行了比较,从理化指标等方面来看,新的合成方法为佳。将该法用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析流程中的固定相,对大洋海水中的痕量铅进行了在线分析,得到了较满意的结果。 展开更多

关键词 金属离子亲和色谱 硅胶基质 8-羟基喹啉 电感耦合等离子体质谱 流动注射

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二氧化锆微球键合8-羟基喹啉固定相的合成及其应用

12

作者 张景彬 宋秘钊 张慧君 《中国皮革》 CAS 北大核心 2008年第17期38-43,共6页

以二氧化锆微球为担体,通过Mannich反应在二氧化锆微球上键合8-羟基喹啉,得到用于痕量金属富集分离的固定相,对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的二氧化锆微球键合8-羟基喹啉形成金属螯合固定相,用作微柱流动注射(FIA)在... 以二氧化锆微球为担体,通过Mannich反应在二氧化锆微球上键合8-羟基喹啉,得到用于痕量金属富集分离的固定相,对该固定相的键合金属离子能力进行了研究。以合成的二氧化锆微球键合8-羟基喹啉形成金属螯合固定相,用作微柱流动注射(FIA)在线分离、富集和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析流程中的固定相,对海水中的痕量铅和铬进行了在线分析,得到了较满意的结果。 展开更多

关键词 金属离子亲和色谱 二氧化锆微球担体 8-羟基喹啉 电感耦合等离子体质谱 流动注射

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蛋白质组衍生肽段文库用于鉴定酪蛋白激酶2的底物模体 被引量：2

13

作者 张曼玉 王春丽 +4 位作者 边阳阳 程凯 卫晓鸾 叶明亮 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期706-711,共6页

模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了... 模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库。该肽段文库是大量非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和三磷酸腺苷作用30min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并由此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E。该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 反相液相色谱-串联质谱 模体 激酶 肽段文库 蛋白质组学

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基于MALDI-TOF MS的串联富集策略在磷酸化蛋白组学中的应用 被引量：5

14

作者 张传静 吴婷 +2 位作者 任红鑫 张玲帆 杜一平 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1061-1068,共8页

提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具... 提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具有高选择性和高灵敏度(1.6 fmol),铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料前提下的串联策略能明显降低样品的复杂性。相比直接富集方法,能够提高磷酸化肽的覆盖率。 展开更多

关键词 脱盐 固定金属离子亲和色谱 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 磷酸肽 串联富集

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不同转移潜能的肝癌细胞系定量磷酸化蛋白质组学研究 被引量：1

15

作者 衣泰龙 田苗苗 +3 位作者 翟琳辉 徐忠伟 杨晓明 徐平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1595-1599,共5页

目的研究具有不同侵袭转移能力的肝癌细胞系的磷酸化蛋白质组的动态变化。方法首先用含有重稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-L进行重稳定同位素标记氨基酸的细胞培养(SILAC);用含有轻稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的... 目的研究具有不同侵袭转移能力的肝癌细胞系的磷酸化蛋白质组的动态变化。方法首先用含有重稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-L进行重稳定同位素标记氨基酸的细胞培养(SILAC);用含有轻稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-H进行SILAC标记。将完成标记的两种肝癌细胞系的蛋白质按照1∶1混合,并用trypsin进行溶液消化;对消化得到的肽段进行除盐,并通过固相金属离子亲和色谱(IMAC)的方法进行磷酸化肽段的富集。磷酸化肽段通过质谱进行检测,并通过MaxQuant进行鉴定和定量。最后通过Z检验进行统计学分析,并对差异调控的磷酸化肽对应的蛋白质进行基因本体(GO)分析和STRING网络分析。结果最终鉴定了918个磷酸化肽段,其中806个磷酸化肽段的磷酸化位点可以定位和定量。通过Z检验,共得到了91个磷酸化修饰水平发生变化的肽段,对应25个磷酸化蛋白质。通过对这25个蛋白质进行GO分析发现,细胞骨架重塑过程中的蛋白质在MHCC97-L和MHCC97-H中磷酸化修饰形式严重失调。通过STRING分析发现,NES和PRKCA处于网络的重要节点位置。结论细胞骨架重塑这一生物学过程与肝癌侵袭转移能力密切相关;参与细胞骨架重塑的NES蛋白和参与MAPK信号通路和黏合斑信号通路的PRKCA蛋白磷酸化修饰水平的变化是影响低转移潜能MHCC97-L细胞向高转移潜能细胞MHCC97-H变化的重要调控机制。 展开更多

关键词 定量磷酸化蛋白质组学 SILAC 固相金属离子亲和色谱 肝细胞癌 侵袭转移

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径向整体柱制备蛋清蛋白

16

作者 王琳 刘鑫鑫 +1 位作者 杨锐 杨长龙 《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》 2012年第2期33-36,共4页

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,制备含高活性基团的整体材料基质。以亚氨基二乙酸为配体,通过螯合铜离子,形成固定化铜离子的径向整体柱。通过分离蛋清蛋白,该整体柱不仅对蛋清蛋白具有高速高效的分离能力... 以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,制备含高活性基团的整体材料基质。以亚氨基二乙酸为配体,通过螯合铜离子,形成固定化铜离子的径向整体柱。通过分离蛋清蛋白,该整体柱不仅对蛋清蛋白具有高速高效的分离能力,而且柱容量大、回收率高、重现性好。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 蛋清蛋白 整体柱 铜

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蛋白质组学中磷酸化肽的常用富集方法 被引量：4

17

作者 李鹏章 王粤博 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1785-1793,共9页

磷酸化作用是最重要的蛋白质翻译后修饰方式之一,它是蛋白质组学的一个重要分支,在细胞识别、细胞信息传递、基因表达和新陈代谢等方面发挥着重要作用。采用适当方法对磷酸化肽进行分析有助于我们更好地了解生理病理机制。但是直接进行... 磷酸化作用是最重要的蛋白质翻译后修饰方式之一,它是蛋白质组学的一个重要分支,在细胞识别、细胞信息传递、基因表达和新陈代谢等方面发挥着重要作用。采用适当方法对磷酸化肽进行分析有助于我们更好地了解生理病理机制。但是直接进行质谱分析时磷酸化肽的信号强度会受到无机盐以及大量非磷酸化肽的抑制,选择性差。为解决这一难题,在质谱分析前要对磷酸化肽进行选择性富集。本文回顾了几种常用的磷酸化肽富集方法,介绍了每种方法的发展状况和常用材料,其中包括固定金属离子亲和色谱法、金属氧化物富集法、强阴阳离子交换色谱法和MALDI靶板富集法。最后总结了各种富集方法的优缺点,对有效的磷酸化肽富集策略进行了前景展望。 展开更多

关键词 磷酸化肽 固定金属离子亲和色谱 金属氧化物富集法 强阳离子交换色谱 强阴离子交换色谱 MALDI靶板富集法

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