紫外线和^(60)Coγ射线对钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的诱变效应 被引量：7

1

作者 曹媛媛 甘旭华 +3 位作者 赵良侠 夏觅真 刘广金 唐欣昀 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第5期478-482,共5页

将对数期的钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)(原名钝顶螺旋藻,Spirulina platensis)A9菌株用超声波40 s预处理破碎成2个~4个细胞大小的片断,分别用不同剂量的紫外线(UV)和60Coγ射线处理,诱变后经3小时避光预培养分别接种于液体和固... 将对数期的钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)(原名钝顶螺旋藻,Spirulina platensis)A9菌株用超声波40 s预处理破碎成2个~4个细胞大小的片断,分别用不同剂量的紫外线(UV)和60Coγ射线处理,诱变后经3小时避光预培养分别接种于液体和固体培养基进行培养。固体培养时UV照射70 s和60Coγ照射3 500 Gy后无菌体存活,而在液体培养中高剂量处理的样品可以部分恢复生长。将诱变后的菌液分别加入20μg.mL-1的ρ-氟苯丙氨酸(-ρfluorophenylalan ine,FPA)和20μg.mL-1的刀豆氨酸(L-canavan ine su lphate,CS),放入光照培养箱中预培养3 d^4 d后涂于含相同浓度的氨基酸类似物FPA和CS平板,培养30 d后计算抗氨基酸类似物突变株的突变率。UV对A9菌株的完全致死剂量LD和存活率37%时的剂量D37值分别为70 s和22 s,LD/D37=3.18。A9菌株经UV诱变25 s时存活率为28.7%,抗FPA和抗CS突变率分别为2.31×10-3和1.50×10-3,最大诱变效应比(MME)分别为48.53和52.63。60Coγ射线对A9菌株的LD和D37值分别为3 500 Gy、1 250 Gy,LD/D37=2.8。60Coγ射线显著提高A9菌株的突变率,当诱变剂量为2 000 Gy、存活率为10.49%时A9菌株突变率最高,抗FPA和抗CS突变率分别为5.07×10-3和0.964×10-3,最大诱变效应比(MME)分别为241.43和74.15。60Coγ射线对钝顶节旋藻A9菌株的损伤比UV造成的损伤强烈(低的LD/D37值),比UV具有较大的诱变效应(高MME值)。采用两种诱变剂获得的抗FPA突变率都要高于抗CS突变率。通过诱变获得了大量的抗氨基酸类似物突变株,为遗传重组研究提供携带重要遗传标记的材料。 展开更多

关键词 紫外线 ^60Coγ射线 钝顶节旋藻 抗氨基酸类似物突变株 ρ-氟苯丙氨酸 L-刀豆氨酸

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钝顶节旋藻高产藻株的诱变选育 被引量：3

2

作者 刘奇 臧晓南 张学成 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期59-65,共7页

本文运用亚硝基胍(Nitrosoguanidine,NTG)诱变,并结合乙酰辅酶A羧化酶抑制剂喹禾灵筛选,获得了2株能够稳定遗传的高产钝顶节旋藻突变株623-8和623-16。与钝顶节旋藻出发株623相比,突变株的藻丝更长,更易聚集成团。在pH=8.5、光照强度45... 本文运用亚硝基胍(Nitrosoguanidine,NTG)诱变,并结合乙酰辅酶A羧化酶抑制剂喹禾灵筛选,获得了2株能够稳定遗传的高产钝顶节旋藻突变株623-8和623-16。与钝顶节旋藻出发株623相比,突变株的藻丝更长,更易聚集成团。在pH=8.5、光照强度45μmol·m-2·s-1和培养温度28℃的条件下,突变株623-8和623-16的生物量分别比出发株提高67.86%和46.43%。蛋白含量分别比出发株623提高1.98%和0.84%;脂类含量提高8.54%和4.88%;乙酰辅酶A羧化酶活性提高31.82%和11.36%。研究结果表明,以亚硝基胍诱变结合喹禾灵筛选,可筛选出生长速度快、蛋白含量高等性状优良的钝顶节旋藻藻株,在工业生产中有实用意义。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 亚硝基胍 诱变 喹禾灵

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钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)2-DE 分析蛋白制备方法改进及试用于螺旋手性差异蛋白研究

3

作者 王景梅 汪志平 +5 位作者 于金鑫 刘新颖 邵斌 蓝瑾瑾 马丽芳 陈子元 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期141-147,共7页

采用冻融破壁和蛋白质分步提取等技术,对钝顶节旋藻2-DE分析蛋白制备方法作了改进,并试用于螺旋手性差异表达蛋白研究,结果表明:(1)钝顶节旋藻细胞反复冻融5次完全破碎,用Tris-HCl提取液提取3次可提得近87%的水溶性蛋白,再用SDS(十二烷... 采用冻融破壁和蛋白质分步提取等技术,对钝顶节旋藻2-DE分析蛋白制备方法作了改进,并试用于螺旋手性差异表达蛋白研究,结果表明:(1)钝顶节旋藻细胞反复冻融5次完全破碎,用Tris-HCl提取液提取3次可提得近87%的水溶性蛋白,再用SDS(十二烷基磺酸钠)提取液可从沉淀中提得水不溶性蛋白;(2)将上述水溶性和水不溶性蛋白分别用TCA/丙酮法纯化后作双向电泳(2-DE)分析,可辨蛋白点分别达500和760多个,而两者间的匹配率仅7%,说明分离度好且质量高;(3)利用此法获得了13个与钝顶节旋藻螺旋手性相关的候选蛋白,其中5个为首次发现,候选蛋白功能涉及光合作用、能量代谢、物质外排和环境适应等;(4)本文所建的"冻融破壁分步提纯法"与现有节旋藻2-DE蛋白制备方法相比,具有操作简便、仪器设备简单、成本低廉及信息量更丰富等优点。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 蛋白质 制备方法 双向电泳 螺旋手性

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鄂尔多斯高原钝顶节旋藻SOD特性研究

4

作者 包玉兰 敖恩宝力格 +1 位作者 乔辰 巩东辉 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1339-1342,共4页

采用邻苯三酚自氧化法确定了鄂尔多斯高原钝顶节旋藻SOD特性。该SOD在紫外光区320 nm处有最大吸收值;在Tris-HCl缓冲溶液中最适pH值为8.2,最适温度为25℃;pH值稳定性范围为6~10;高于40℃的条件下保温20 min酶活性开始下降,高于35℃条件... 采用邻苯三酚自氧化法确定了鄂尔多斯高原钝顶节旋藻SOD特性。该SOD在紫外光区320 nm处有最大吸收值;在Tris-HCl缓冲溶液中最适pH值为8.2,最适温度为25℃;pH值稳定性范围为6~10;高于40℃的条件下保温20 min酶活性开始下降,高于35℃条件下保温60 min酶活性开始下降;室温下存放2 d后活性开始下降,7 d时活性基本丧失;室温下避光保存9 d时SOD活性完全丧失。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 超氧化物岐化酶 特性

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钝顶节旋藻SOD活性测定条件及稳定性的研究

5

作者 包玉兰 栗淑媛 乔辰 《生物过程》 2012年第1期45-49,共5页

采用邻苯三酚自氧化法研究了鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻SOD活性的测定条件以及酶的稳定性,为进一步从钝顶节旋藻中提取、纯化SOD酶制剂提供可参考的基础数据。结果显示,SOD在紫外光区320 nm处有最大吸收值;在Tris-HCl缓冲溶液中最适pH... 采用邻苯三酚自氧化法研究了鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻SOD活性的测定条件以及酶的稳定性,为进一步从钝顶节旋藻中提取、纯化SOD酶制剂提供可参考的基础数据。结果显示,SOD在紫外光区320 nm处有最大吸收值;在Tris-HCl缓冲溶液中最适pH值为8.2,最适温度为25℃。该酶的pH值稳定性范围为6~10;在不同温度下保温20 min时,高于40℃时酶活性开始下降,保温60 min时,高于35℃时酶活性开始下降;室温下存放2 d后活性开始下降,7 d时活性基本丧失;室温下避光保存9 d时SOD活性完全丧失。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 超氧化物岐化酶(SOD) 邻苯三酚自氧化法 测定条件 酶稳定性

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钝顶节旋藻羧酶体操纵子的克隆与分析

6

作者 谭扬 《现代农业科技》 2010年第11期11-12,共2页

利用高通量测序技术Solexa,测得了钝顶节旋藻AGB-AP02(Arthrospira platensis AGB-AP02)的全基因组序列。在基因组中发现了编码羧酶体的操纵子,这些基因同集胞藻PCC 6803中相应的基因具有较高的同源性,该操纵子在Genebank上的登录号是HM... 利用高通量测序技术Solexa,测得了钝顶节旋藻AGB-AP02(Arthrospira platensis AGB-AP02)的全基因组序列。在基因组中发现了编码羧酶体的操纵子,这些基因同集胞藻PCC 6803中相应的基因具有较高的同源性,该操纵子在Genebank上的登录号是HM179535。在整个基因组中没有发现编码碳酸酐酶的基因,同时发现蛋白ABT4具有典型的γ-碳酸酐酶N-末端的三维结构与催化活性位点。通过Mega3.1建树分析,蛋白ABT4与M.Thermophila的γ-碳酸酐酶聚在一支。推测ABT4蛋白在羧酶体中同时发挥碳酸酐酶与结构蛋白的作用。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 羧酶体操纵子 克隆 分析

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重组钝顶节旋藻藻蓝蛋白基因在聚球藻中的表达 被引量：1

7

作者 代易颖 马红 +3 位作者 周兵兵 陈孔翔 兰利琼 卿人韦 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期189-194,共6页

藻蓝蛋白(Phycocyanin)具有抗氧化、消炎、抗癌、增强免疫等生理活性和荧光特性.本研究从钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)中克隆藻蓝蛋白基因,构建重组藻蓝蛋白并在聚球藻7942(Synechococcus sp.PCC 7942)中表达.利用PCR技术克隆钝... 藻蓝蛋白(Phycocyanin)具有抗氧化、消炎、抗癌、增强免疫等生理活性和荧光特性.本研究从钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)中克隆藻蓝蛋白基因,构建重组藻蓝蛋白并在聚球藻7942(Synechococcus sp.PCC 7942)中表达.利用PCR技术克隆钝顶节旋藻藻蓝蛋白α亚基(cpc A)与β亚基(cpc B)基因,在cpc A的5’端及3’端加入编码6×His标签基因,克隆Hiscpc A基因,并构建同源重组表达载体p U BCA3D-1.通过自然转化法将p UBCA3D-1转入聚球藻中,经筛选鉴定获得了转基因藻株.PCR验证结果表明,目的基因整合到聚球藻基因组中的概率为86.6%.转基因聚球藻在无抗生素筛选条件下连续培养2个月,仍能稳定表达重组Cpc A.以上结果表明,重组钝顶节旋藻藻蓝蛋白在聚球藻中稳定表达;研究结果为节旋藻cpc A基因改造、重组Cpc A进一步分离纯化以及重组藻蓝蛋白的生产奠定了基础. 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 藻蓝蛋白 表达载体 聚球藻7942

原文传递

钝顶螺旋藻形态、生长及光合作用对不同波段太阳辐射的响应（英文） 被引量：1

8

作者 马增岭 M.Arocena Joselito 高坤山 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期538-546,共9页

为探讨中不同波段的光合有效辐射对钝顶螺旋藻(Arthrospira platensis)形态、生长及光合作用的影响,实验将钝顶螺旋藻D-0083藻液转入带塞的石英管中,石英管水平置于阳光下并在其上覆盖不同的截止型和带通型滤光片,以使藻丝接受不同波段... 为探讨中不同波段的光合有效辐射对钝顶螺旋藻(Arthrospira platensis)形态、生长及光合作用的影响,实验将钝顶螺旋藻D-0083藻液转入带塞的石英管中,石英管水平置于阳光下并在其上覆盖不同的截止型和带通型滤光片,以使藻丝接受不同波段的太阳辐射;并检测其生长、形态与光合活动的变化。结果发现:所有波段(320—500、395—700、510—700和610—700 nm)光合有效辐射下的藻丝均螺旋变紧且生物量增加。其中以包含少量紫外辐射A(Ultraviolet-A)的蓝光波段(320—500 nm)和红光波段(600—700 nm)对藻丝形态变化、生长及光合速率的诱发效率较高。在320—500、395—700、510—700和610—700 nm波段上的单位能量光照引起钝顶螺旋藻螺距变化的效率分别为0.070、0.015、0.021、0.045μm/(W·m^2)。波段320—500 nm虽然会轻微抑制钝顶螺旋藻D-0083的有效光化学效率(Fv′/Fm′)、电子传递速率(ETR)和藻蓝蛋白的荧光发射,但是却能够有效诱导其藻丝变紧促进生长。此外,钝顶螺旋藻D-0083的藻丝变紧程度、比生长速率变化与不同波段太阳辐射下藻丝体的光合性能相一致。该研究表明任何波段的光合有效辐射都能使螺旋藻藻丝螺旋变紧并引发生长和光合作用,其中以蓝光和红光的效率最高。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 生长 形态 光合有效辐射(PAR) 光合作用

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纯培养节旋藻全基因组提取方法的比较研究 被引量：3

9

作者 李善策 李勇勇 +1 位作者 夏金兰 秦松 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期28-36,共9页

本研究从实验室保藏的节旋藻(Arthrospira)藻种出发,挑取形态不同的单藻丝体进行纯化培养,采用6种方法进行全基因组DNA提取的比较研究,而后以16S rRNA-ITS区基因作为分子标记对藻株进行相关序列测定和分子系统进化分析。结果表明,冻融C... 本研究从实验室保藏的节旋藻(Arthrospira)藻种出发,挑取形态不同的单藻丝体进行纯化培养,采用6种方法进行全基因组DNA提取的比较研究,而后以16S rRNA-ITS区基因作为分子标记对藻株进行相关序列测定和分子系统进化分析。结果表明,冻融CTAB法能够提取出包含染色体外DNA在内的节旋藻全基因组,高质量样品可以满足分子生物学实验要求;分子系统研究表明,纯化藻株皆为钝顶节旋藻,节旋藻与螺旋藻在分子鉴定中属间差异明显。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻(Arthrospira platensis) 全基因组提取 PCR 16S rRNA-ITS

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节旋藻野生型藻株与直线型突变藻株对高温胁迫的生理响应 被引量：5

10

作者 周亚莉 张学成 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期121-126,共6页

研究高温胁迫对节旋藻生理生化的影响并比较直线型突变株和野生型节旋藻的抗高温能力,以钝顶节旋藻野生型藻株OUQDS_6及其直线型突变藻株OUQDS_6L为材料,用实验测定方法研究了38～48℃高温的胁迫对其生理的影响。结果表明,随高温胁迫强... 研究高温胁迫对节旋藻生理生化的影响并比较直线型突变株和野生型节旋藻的抗高温能力,以钝顶节旋藻野生型藻株OUQDS_6及其直线型突变藻株OUQDS_6L为材料,用实验测定方法研究了38～48℃高温的胁迫对其生理的影响。结果表明,随高温胁迫强度的增加,2株藻的相对生长速率、叶绿素a含量逐渐下降,类胡萝卜素含量先上升后下降,藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量显著下降。这4种光合色素对高温的敏感程度从高到低依次为藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、叶绿素a和类胡萝卜素。随温度的升高,细胞内丙二醛含量上升,超氧化物歧化酶活性和过氧化氢酶活性均先升高后下降,游离脯氨酸在整个胁迫过程中没有明显积累现象。2种藻株均有很强的适应高温环境胁迫的能力,但野生型藻株明显比直线型突变株有更好的适应能力。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 直线型节旋藻 高温胁迫

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煅烧沸石咪唑骨架吸附烟气CO_(2)促进节旋藻生长固碳

11

作者 朱颜霞 张泽 +2 位作者 程军 徐晓丹 杨卫娟 《中国电机工程学报》 EI CSCD 北大核心 2021年第4期1242-1249,共8页

利用藻类生物捕集CO_(2)是一种很有前景的减排烟气CO_(2)的方法,但是烟气CO_(2)在藻液中停留时间短,向溶解无机碳的转化困难,限制了藻细胞的生长固碳。通过煅烧不同时间的锌沸石咪唑骨架来制备CO_(2)吸附剂,利用不饱和金属活性位点吸附C... 利用藻类生物捕集CO_(2)是一种很有前景的减排烟气CO_(2)的方法,但是烟气CO_(2)在藻液中停留时间短,向溶解无机碳的转化困难,限制了藻细胞的生长固碳。通过煅烧不同时间的锌沸石咪唑骨架来制备CO_(2)吸附剂,利用不饱和金属活性位点吸附CO_(2)并促进CO_(2)向HCOO_(3)^(-)的转化,为藻细胞的生长固碳提供充足的溶解无机碳。结果表明:煅烧6h得到的吸附剂拥有最大的比表面积和孔容积有利于CO_(2)吸附和转化,可提高藻液中HCOO_(3)^(-)浓度55.7%,使得钝顶节旋藻的光能利用效率在99.99%煤化工烟气CO_(2)条件下增加了2.43倍,培养时间从7天缩短至5天,生物质产量提高了74.7%,CO_(2)固定速率提高了93.7%,为微藻减排烟气CO_(2)提供了新思路。 展开更多

关键词 钝顶节旋藻 煤化工烟气 沸石咪唑酯骨架 CO_(2)吸附剂 溶解无机碳

原文传递

别藻蓝蛋白β亚基基因在莱茵衣藻中重组表达及其对光能传递的影响研究 被引量：1

12

作者 徐晓婷 臧晓南 +5 位作者 章峰 尚孟慧 李瑞 毕莹 赵悦 马艺宁 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期77-88,共12页

为了探究别藻蓝蛋白与类囊体膜光合系统之间的光能传递规律,及其与异源类囊体膜光合系统之间光能转移的可能性,本研究构建了含有钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的别藻蓝蛋白β亚基基因(apcB),及合成藻蓝胆素的血红素氧化酶基因(ho)... 为了探究别藻蓝蛋白与类囊体膜光合系统之间的光能传递规律,及其与异源类囊体膜光合系统之间光能转移的可能性,本研究构建了含有钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的别藻蓝蛋白β亚基基因(apcB),及合成藻蓝胆素的血红素氧化酶基因(ho)和铁氧还蛋白氧化还原酶基因(pcyA)的转化载体pHyg3-apcB-ho-pcyA,利用玻璃珠转化法将其导入莱茵衣藻中。聚合酶链式反应筛选验证阳性转化藻株,Southern Blot结果表明基因apcB、ho、pcyA成功转化入莱茵衣藻基因组中。而后将转化藻株与对照藻株均置于高光(50μmol·m^(-2)·s^(-1))和低光(25μmol·m^(-2)·s^(-1))条件、白光和绿光条件中培养,并检测别藻蓝蛋白β亚基的表达、总叶绿素含量、77 K低温荧光、光系统表观电子传递效率、生物量变化。结果显示:实时定量PCR分析和Western Blot检测表明外源基因apcB,pcyA和ho均在转基因藻株Cr-ApcBHP中得到了转录表达。高光和低光条件下光系统Ⅱ(PSⅡ)和光系统Ⅰ(PSⅠ)位置处的荧光峰均显著高于对照莱茵衣藻藻株CC-849,绿光中PSⅡ荧光峰(波长为690 nm)显著高于对照藻株;高光与低光和白光与绿光条件下转基因藻株的光系统Ⅱ的表观电子传递速率(ETRPSⅡ)值均高于对照藻株,但生物量并未见明显提高。这些结果表明转基因莱茵衣藻中可能存在自重组别藻蓝蛋白到光系统核心的光能传递,但是吸收的光能没有达到促进生物量积累的作用。本研究为利用重组表达蓝藻藻胆蛋白提高异源类囊体膜的光合作用进行了尝试。 展开更多

关键词 别藻蓝蛋白β亚基 钝顶节旋藻 莱茵衣藻 重组表达 光能传递

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蓝藻丝氨酸蛋白酶抑制剂arthropin的制备及其靶蛋白酶的筛选

13

作者 许佳伟 周爱武 杨愈丰 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期428-436,共9页

目的·制备高纯度的蓝藻丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin),筛选其靶蛋白酶,并探究其抑制活性。方法·通过氨基酸序列分析,在人类口腔微生物组数据库(eHOMD)发现了一种钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的... 目的·制备高纯度的蓝藻丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin),筛选其靶蛋白酶,并探究其抑制活性。方法·通过氨基酸序列分析,在人类口腔微生物组数据库(eHOMD)发现了一种钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的serpin,将其命名为arthropin;构建融合表达载体pSUMO3-arthropin,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达;采用镍离子亲和层析、酶切、反向镍离子亲和层析、阴离子交换层析的4步层析纯化方案将arthropin重组蛋白分离纯化;将arthropin重组蛋白分别与活化的凝血因子Ⅸ(activated factorⅨ,FⅨa)、FⅩa、FⅪa、活化的蛋白C(activated protein C,APC)、激肽释放酶1(kallikrein 1,KLK1)等14种丝氨酸蛋白酶共孵育,再利用SDS-PAGE分析共价复合物形成情况,利用反应动力学方法检测arthropin对KLK1的抑制速率。对arthropin重组蛋白的结晶条件进行筛选,选取合适的晶体进行X射线衍射并采集数据。利用AlphaFlod Colab预测arthropin亚稳态结构模型。结果·SDS-PAGE分析发现,arthropin融合蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达;纯化后,获得了高纯度的与理论相对分子质量(45800)相近的arthropin重组蛋白。将arthropin重组蛋白与14种丝氨酸蛋白酶共孵育后发现,arthropin能与FⅩa、APC、FⅨa、FⅪa、胰蛋白酶(trypsin)、组织蛋白酶G(cathepsin G)、KLK1、KLK7和凝血酶(thrombin)9种蛋白酶形成稳定的共价复合物。Arthropin抑制KLK1的二级反应抑制速率常数为1.7×103 L/(mol·s)。Arthropin重组蛋白可以在25%聚乙二醇单甲醚550(PEG MME 550)、0.1 mol/L吗啉乙磺酸(MES,pH 6.5)、0.01 mol/L ZnCl2条件下形成片状晶体,X射线衍射分辨率为10Å(1Å=1×10−10 m)。AlphaFlod Colab预测结果发现,arthropin具有经典的抑制型serpin的结构特点。结论·成功获得高纯度的钝顶节旋藻丝氨酸蛋白酶抑制剂arthropin,其具有较广谱的丝氨酸蛋白酶抑制能力,但抑制速率较低。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 钝顶节旋藻 原核表达 蛋白结晶

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