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卡立泊来德对缺血-再灌注大鼠肺组织钠氢交换蛋白-1表达及炎症损伤的影响
1
作者 李茜 朱姝颖 +1 位作者 郑剑桥 刘斌 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期606-609,共4页
目的探讨缺血-再灌注(IR)对肺钠氢交换蛋白-1(NHE-1)表达的影响,及卡立泊来德(cariporide)预处理能否通过抑制NHE-1表达减轻肺组织的炎症损伤。方法 20枚离体灌注的大鼠肺随机分为四组:对照组(C组)、IR组、NHE-1激活剂LiCl预处理组(LiCl... 目的探讨缺血-再灌注(IR)对肺钠氢交换蛋白-1(NHE-1)表达的影响,及卡立泊来德(cariporide)预处理能否通过抑制NHE-1表达减轻肺组织的炎症损伤。方法 20枚离体灌注的大鼠肺随机分为四组:对照组(C组)、IR组、NHE-1激活剂LiCl预处理组(LiCl组)和cariporide预处理+缺血-再灌注组(CIR组)。再灌注结束后,免疫组化检测肺组织中NHE-1蛋白表达,HE染色观察肺组织病理学改变并行病理评分。结果与C组和CIR组比较,IR组和LiCl组NHE-1表达明显增加(P<0.05),CIR组和C组差异无统计学意义。IR组和LiCl组肺组织病理切片均观察到明显炎症损伤,病理评分明显高于C组和CIR组(P<0.05),CIR组病理评分和C组差异无统计学意义。结论离体的IR大鼠肺组织,NHE-1表达增加,选择性NHE-1抑制剂cariporide能减轻IR导致的肺组织炎症损伤。 展开更多
关键词 钠氢交换蛋白-1 缺血-再灌注 肺炎症损伤
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钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响 被引量：6
2
作者 常城 孔佩艳 +6 位作者 陈幸华 彭贤贵 刘林 刘红 曾东风 梁雪 王庆余 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期488-491,共4页
为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑... 为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异。结果显示:HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞。结论:NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞。 展开更多
关键词 钠/氢交换蛋白-1 二甲基氨氯吡咪 HL-60/ADM细胞 PHI 细胞增殖 细胞凋亡
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实验性高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响 被引量：4
3
作者 王鹏 李玲 +5 位作者 潘雪 冯婷 蒋莉莉 余祖江 张振香 阚全程 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第11期1656-1658,共3页
目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以... 目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以及NHE1蛋白的转运活性和表达水平。结果高血氨肝细胞模型肝细胞内pH值下降,NHE1蛋白的转运活性和表达水平升高,肝细胞数量降低和凋亡率升高。结论高血氨导致的肝细胞损伤可能与降低肝细胞内pH值,激活NHE1蛋白有关。 展开更多
关键词 高血氨 钠-氢交换蛋白1型 细胞内PH值
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人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价 被引量：6
4
作者 黄美风 方伯言 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2721-2724,2728,共5页
目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/ne... 目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染293细胞,经Re-al-Time PCR评价干扰效应,筛选出干扰效应最佳的靶序列。结果测序证实目的片段正确插入载体中,成功构建4个人NHE-1基因miRNA干扰载体;Real-Time PCR证实完成干扰效应评价,并根据NHE-1基因转录调控区及其蛋白分子结构功能区评价结果,得到NHE1-4是最佳干扰片段。结论成功构建针对人NHE-1基因的miRNA特异性有效干扰质粒,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 钠氢交换蛋白-1 干扰载体 干扰效应
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NHE-1特异性抑制剂DMA逆转HL-60/ADM细胞多药耐药的实验研究 被引量：3
5
作者 常城 孔佩艳 +6 位作者 陈幸华 彭贤贵 刘林 刘红 曾东风 梁雪 王庆余 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期328-331,共4页
目的探讨钠/氢交换器-1(Na+/H+exchanger-1,NHE-1)特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪(dimethyl amilo-ride,DMA)是否能在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADM的多药耐药及其可能机制。方法以阿霉素诱导产生多药耐药(multidrug resistance,MDR)的HL-60... 目的探讨钠/氢交换器-1(Na+/H+exchanger-1,NHE-1)特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪(dimethyl amilo-ride,DMA)是否能在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADM的多药耐药及其可能机制。方法以阿霉素诱导产生多药耐药(multidrug resistance,MDR)的HL-60/ADM细胞株为研究对象,用MTT法检测化疗药物敏感性,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素积累量,RT-PCR法检测mrp、bcl-2、bax mRNA表达,免疫细胞化学法检测细胞膜多药耐药相关蛋白(MRP)表达,TUNEL法检测原位细胞凋亡。结果与50μmol/L DMA共同培养24h后,HL-60/ADM细胞对ADM、MIT、VCR、HAR4种化疗药物的IC50值分别由(839.5±45.2)、(321.2±28.9)、(70.5±15.5)、(65.2±20.7)ng/ml降低至(180.5±38.9)、(76.4±12.0)、(30.2±7.5)、(31.7±7.2)ng/ml;分别与50、100μmol/LDMA共培养24h后,HL-60/ADM细胞内DNR积累量荧光强度由作用前的33.56升高到48.74和70.10,细胞内mrp mRNA表达量、MRP蛋白表达量及bcl-2mRNA表达量明显降低,bax mRNA表达量明显升高;与100μmol/L DMA共同培养24h后,5μg/ml ADM作用下的HL-60/ADM细胞凋亡率明显增高。结论DMA可逆转HL-60/ADM细胞的MDR,其机制可能与下调MRP表达及促进bcl-2/bax凋亡途径有关。 展开更多
关键词 二甲基氨氯吡咪 钠/氢交换蛋白-1 HL-60/ADM 多药耐药 逆转
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钠-氢交换蛋白1反义表达载体对人肺腺癌细胞钠-氢交换蛋白1基因表达的影响及其意义 被引量：2
6
作者 吴国明 钱桂生 +3 位作者 黄桂君 李淑萍 姚伟 陆俊羽 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期191-194,共4页
目的　探讨Na+ /H+ 交换蛋白 1(NHE 1)反义表达载体 (pNHE 1)对人肺癌细胞NHE 1基因的抑制作用及生物学效应。方法　实验细胞分为 3组 ,A5 4 9 pNHE 1组 (反义组 )、A5 4 9空载体组(空载体组 )、A5 4 9对照组 (A5 4 9组 )。采用阳离子... 目的　探讨Na+ /H+ 交换蛋白 1(NHE 1)反义表达载体 (pNHE 1)对人肺癌细胞NHE 1基因的抑制作用及生物学效应。方法　实验细胞分为 3组 ,A5 4 9 pNHE 1组 (反义组 )、A5 4 9空载体组(空载体组 )、A5 4 9对照组 (A5 4 9组 )。采用阳离子脂质体使pNHE 1转染人肺腺癌A5 4 9细胞株。采用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法测定 3组细胞的NHE 1mRNA表达水平 ;用荧光法测定 3组细胞内pH(pHi)值 ;了解转染细胞增殖生长状况 ;用细胞凋亡原位检测法检测 3组细胞凋亡率。结果　在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段 ,证明转染成功。半定量RT PCR法证实反义组细胞的NHE 1mRNA表达水平 (0 4 2± 0 0 6 )显著低于A5 4 9组 (0 71± 0 0 8,P <0 0 1)和空载体组 (0 6 9± 0 16 ,P <0 0 1)。A5 4 9组细胞在培养 12、2 4和 4 8h后pHi值分别为 7 15 0±0 0 0 4、7 14 0± 0 0 0 7和 7 12 0± 0 0 0 8,反义组pHi值分别为 6 990± 0 0 0 5、6 84 0± 0 0 0 5和 6 75 0±0 0 0 5 ,两组差异均有极显著性 (P <0 0 1)。A5 4 9组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为 3 2 0、3 2 8和 4 97d ,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A5 4 9组及空载体组 (P <0 0 1)。反义组细胞凋亡率为 (2 展开更多
关键词 钠-氢交换蛋白1 反义表达载体 肺腺癌细胞 钠-氢交换蛋白1 基因表达
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