防龋DNA疫苗免疫效能评价中间接ELISA检测的建立和验证 被引量：1

1

作者 李宇红 吴小丽 +2 位作者 闭兰 郭长福 张爱华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期741-743,748,共4页

目的:建立血清样本特异性抗体检测的间接ELISA方法,应用于龋齿DNA疫苗特异性抗体效力检测。方法:通过棋盘滴定确定样本检测条件建立血清特异性抗PAc抗体间接ELISA方法,并对所建立的方法进行特异性和精密度验证。结果:确定包被PAc蛋白浓... 目的:建立血清样本特异性抗体检测的间接ELISA方法,应用于龋齿DNA疫苗特异性抗体效力检测。方法:通过棋盘滴定确定样本检测条件建立血清特异性抗PAc抗体间接ELISA方法,并对所建立的方法进行特异性和精密度验证。结果:确定包被PAc蛋白浓度为10mg/L,酶标抗体工作浓度1∶5000,样本稀释倍数1∶200。方法的重复性检测表明,板间和板内误差小于15%;中间精密度高、中、低3个浓度的CV值小于15%。结论:该方法特异性强,具有良好的重复性和中间精密度,可用于防龋DNA疫苗免疫效能评价中血清样本特异性抗PAc抗体的检测。 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 间接ELISA PAc蛋白 免疫

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靶向融合防龋DNA疫苗研究（Ⅰ）-编码人CTLA4胞外区基因的质粒pGCTLA的构建 被引量：1

2

作者 樊明文 郭继华 +4 位作者 边专 贾荣 陈智 彭彬 范兵 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第3期228-228,共1页

关键词 靶向融合 防龋dna疫苗 基因编码 CTLA4胞外区基因 质粒pGCTLA 免疫效能

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树突状细胞及其在防龋DNA疫苗方面的应用前景

3

作者 许庆安 樊明文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第3期324-326,共3页

关键词 树突状细胞 防龋dna疫苗 DC T细胞 细胞免疫

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中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX免疫小鼠的实验研究 被引量：2

4

作者 杨亚萍 闵志鹏 +4 位作者 樊明文 张爱华 闭兰 黄丽 苑艺芳 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期157-160,共4页

目的:评价中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX诱导小鼠体内特异性免疫应答的效果。方法:分别由武汉生物制品研究所中试制备和实验室采用德国Qiagen公司去内毒素质粒大量提取试剂盒手工提取防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX;两种方法制备的质粒分别于0周,2... 目的:评价中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX诱导小鼠体内特异性免疫应答的效果。方法:分别由武汉生物制品研究所中试制备和实验室采用德国Qiagen公司去内毒素质粒大量提取试剂盒手工提取防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX;两种方法制备的质粒分别于0周,2周经肌肉、鼻腔免疫小鼠,并以鞭毛蛋白作为黏膜佐剂与质粒同时经鼻腔免疫小鼠,PBS及空载体pVAX1作为对照。免疫前开始每两周收集小鼠血清和唾液样本,ELISA定量检测血清及唾液中特异性抗体含量。结果:中试质粒和手提质粒肌注时均能够诱导血清特异性IgG,但诱导唾液特异性sIgA的能力较为有限。在与黏膜佐剂鞭毛蛋白同时滴鼻时,中试质粒可诱导较为明显的血清特异性IgG和唾液特异性sIgA。在相同的免疫条件下,中试质粒诱导的特异性抗体水平低于手提质粒组,但二者无显著性差异。结论:中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX能够诱导小鼠体内特异性体液免疫应答。 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 中试 特异性抗体

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靶向融合防龋DNA疫苗的构建与体外细胞表达研究 被引量：10

5

作者 郭继华 樊明文 +3 位作者 边专 贾荣 陈智 彭彬 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期282-284,共3页

目的　构建以人细胞毒性T淋巴细胞抗原 4 (cytotoxicTlymphocyte associatedantigen4 ,CTLA4 )为引导的抗变形链球菌 (Streptococcusmutans,S mutans)葡糖基转移酶(glucosyltransferase ,GTFs)Ⅰ和表面蛋白PAc的靶向融合防龋DNA疫苗pGJA... 目的　构建以人细胞毒性T淋巴细胞抗原 4 (cytotoxicTlymphocyte associatedantigen4 ,CTLA4 )为引导的抗变形链球菌 (Streptococcusmutans,S mutans)葡糖基转移酶(glucosyltransferase ,GTFs)Ⅰ和表面蛋白PAc的靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P ,检测其在真核细胞中的表达。方法　利用RT PCR方法从外周淋巴细胞中获得CTLA4胞外区和Igγ1 恒定区基因并进行T A克隆 ,获得携带CTLA4 Ig融合基因的重组质粒 pGJ,选择合适的酶切位点 ,再克隆入融合防龋DNA疫苗 pGLUA P中 ,构建靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P ,并转染CHO细胞系 ,用蛋白质免疫印迹实验检测其表达。结果　重组质粒 pGJ、pGJA P分别含有CTLA4 Igγ1 融合基因和CTLA4 、Igγ1 、pac、glu基因序列。蛋白质免疫印迹结果显示 ,pGJA P表达的抗原可以与特异性抗PAc抗体发生免疫反应。结论　成功构建了靶向融合防龋DNA疫苗 pGJA P 。 展开更多

关键词 靶向融合 防龋dna疫苗 体外细胞表达 细胞毒性 T淋巴细胞抗原4 CTLA4 链球菌

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融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究 被引量：8

6

作者 贾荣 樊明文 +3 位作者 边专 郭继华 陈智 杜民权 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期456-458,I003,共4页

目的　将变形链球菌 (Streptococcusmutans)表面蛋白PAc编码A区和P区 (A P)的序列克隆到真核载体pGLU中 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗 ,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法　将pCIA P质粒中A P片段序列与pGLU质粒连接 ,构建... 目的　将变形链球菌 (Streptococcusmutans)表面蛋白PAc编码A区和P区 (A P)的序列克隆到真核载体pGLU中 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗 ,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法　将pCIA P质粒中A P片段序列与pGLU质粒连接 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P。将pGLUA P转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA P的表达。通过脂质体将pGLUA P转染大鼠原代肌母细胞 ,以免疫组织化学检测GLUA P的表达。结果　GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P经酶切分析证实携带GLU和A P片段。pGLUA P转化的大肠杆菌BL2 1 (DE3)经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论　成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA P ,所携带的基因序列正确 。 展开更多

关键词 融合防龋dna疫苗 pGLUA-P 葡糖转移酶类 表面抗原 龋齿 变形链球菌 原核细胞 真核细胞

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靶向融合防龋DNA疫苗免疫大鼠的研究 被引量：6

7

作者 樊明文 许庆安 +3 位作者 于飞 贾荣 郭继华 边专 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期459-462,共4页

目的　检测靶向融合防龋DNA疫苗 pGJA P免疫大鼠后的原位表达。比较 pGJA P与融合防龋DNA疫苗pGLUA P免疫定菌鼠后产生的抗体水平和防龋效果。方法　质粒pGJA P分别经股四头肌注射和鼻腔滴注免疫大鼠 ,免疫组化法检测重组蛋白在免疫部... 目的　检测靶向融合防龋DNA疫苗 pGJA P免疫大鼠后的原位表达。比较 pGJA P与融合防龋DNA疫苗pGLUA P免疫定菌鼠后产生的抗体水平和防龋效果。方法　质粒pGJA P分别经股四头肌注射和鼻腔滴注免疫大鼠 ,免疫组化法检测重组蛋白在免疫部位的表达。建立定菌鼠模型 ,质粒pGJA P和 pGLUA P分别经股四头肌注射和鼻腔滴注免疫定菌鼠 ,ELISA法检测血清和唾液中的特异性抗体水平 ,取上下颌骨进行Keyes龋齿记分。 结果　在 pGJA P肌肉免疫组的股四头肌和鼻腔免疫组的鼻腔黏膜检测到了表达的重组蛋白。pGJA P肌肉免疫组的血清抗PAc和抗GTFIgG滴度显著高于其他组 (P <0 0 1)。pGJA P肌肉免疫组和 pGJA P鼻腔免疫组的唾液抗PAc和抗GTFIgA滴度显著高于其他组 (P <0 0 1)。pGJA P免疫组的龋齿记分显著低于其他组 (P <0 0 1)。结论　pGJA P在动物体内能够正确表达。与pGLUA P相比 ,pGJA P能诱导更强的体液免疫反应 。 展开更多

关键词 免疫学 大鼠 龋齿 预防 检测 变形链球菌 靶向融合防龋dna疫苗

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靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P免疫兔的实验研究 被引量：5

8

作者 贾荣 樊明文 +3 位作者 郭继华 边专 陈智 于飞 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期248-251,共4页

目的　体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P的免疫反应性 ;与非靶向融合防龋DNA疫苗 pGLUA P进行比较 ,评价其增强疫苗免疫效能的能力。 方法　将 pGJA P转染CHO细胞 ,蛋白质免疫印迹实验检测重组蛋白抗体免疫反应性。分 5组免疫兔 :pGJ... 目的　体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P的免疫反应性 ;与非靶向融合防龋DNA疫苗 pGLUA P进行比较 ,评价其增强疫苗免疫效能的能力。 方法　将 pGJA P转染CHO细胞 ,蛋白质免疫印迹实验检测重组蛋白抗体免疫反应性。分 5组免疫兔 :pGJA P经肌肉注射组 (A组 ) ;pGJA P经鼻黏膜免疫组 (B组 ) ;pGLUA P经肌肉注射 (C组 ) ;pGLUA P经鼻黏膜免疫组 (D组 )和pCI载体经股四头肌注射组 (E组 )。酶联免疫吸附实验检测血清及唾液中的特异性抗体。用收集的血清进行葡糖基转移酶 (GTF)合成水不溶性葡聚糖抑制实验。结果　pGJA P表达的重组蛋白可以与抗GTF抗体反应。A组血清特异性IgG抗体水平远高于C组 (P <0 0 1) ;B组唾液特异性IgA抗体水平显著高于D组 (P <0 0 1) ;A组同样诱导了高水平的唾液特异性IgA抗体。A组的免疫血清抑制GTF活性的能力最强。结论　pGJA P具备GTF的免疫反应性 ;并较pGLUA P有更强的诱导系统和黏膜免疫反应及抑制GTF的能力。 展开更多

关键词 靶向融合防龋dna疫苗 pGJA-P 兔 实验 免疫反应性 龋齿

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靶向融合防龋DNA疫苗经肌肉免疫动物的实验研究 被引量：3

9

作者 于飞 樊明文 +6 位作者 许庆安 贾荣 郭继华 边专 陈智 彭彬 范兵 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期754-759,共6页

目的　观察靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P在大鼠肌肉组织中的原位表达。检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P经股四头肌注射途径免疫大鼠后体内抗体水平和防龋效果 ,并与融合防龋DNA疫苗pGLUA P进行比较。在小鼠体内长期观察抗体动态变化。方法... 目的　观察靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P在大鼠肌肉组织中的原位表达。检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P经股四头肌注射途径免疫大鼠后体内抗体水平和防龋效果 ,并与融合防龋DNA疫苗pGLUA P进行比较。在小鼠体内长期观察抗体动态变化。方法　质粒pGJA P经股四头肌注射途径免疫大鼠 ,免疫组织化学方法检测重组蛋白的原位表达。质粒pGJA P和pGLUA P经股四头肌注射途径免疫定菌鼠 ,ELISA法检测血清IgG和唾液IgA抗体水平 ,Keyes记分法评估定菌鼠磨牙患龋情况。质粒pGJA P和pGLUA P经股四头肌注射途径免疫BALB/c小鼠 ,ELISA法检测血清IgG和唾液IgA动态变化。结果　大鼠股四头肌组织检测到表达的重组蛋白。大鼠pGJA P免疫组血清抗PAcIgG水平 (1∶2 0 0 0 0 0 )和抗GTFIgG水平 (1∶5 80 0 0 )均显著高于pGLUA P免疫组 (1∶2 30 0 0和 1∶110 0 0 )(均P <0 0 1)。大鼠pGJA P免疫组唾液抗PAcIgA水平 (1∶8)和抗GTFIgA水平 (1∶6 )均显著高于pGLUA P免疫组 (1∶2和 1∶2 ) (均P <0 0 1)。pGLUA P免疫组未能引起有效的唾液IgA反应。pGJA P免疫组龋齿记分显著低于pGLUA P免疫组和空白组 (P <0 0 1)。小鼠pGJA P免疫组有效血清IgG、唾液IgA和pGLUA P免疫组有效血清IgG均持续至本实验结束 ,pGJA 展开更多

关键词 靶向融合 防龋dna疫苗 免疫动物 IGA 链球菌龋齿

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人用靶向防龋DNA疫苗防龋效果及交叉免疫保护的实验研究 被引量：2

10

作者 于飞 樊明文 +3 位作者 许庆安 贾荣 边专 陈智 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第29期2081-2082,共2页

关键词 人用靶向防龋dna疫苗 防龋效果 交叉免疫保护 实验研究 龋齿

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壳聚糖-防龋DNA疫苗微粒的制备和体外表达研究 被引量：2

11

作者 李宇红 樊明文 +3 位作者 边专 陈智 张旗 杨海瑞 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期522-522,共1页

关键词 壳聚糖 防龋dna疫苗 微粒 制备 生物相容性

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实验性防龋DNA疫苗pGJA—P／VAX在小鼠体内分布和表达 被引量：2

12

作者 刘畅 樊明文 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期694-695,共2页

本研究将实验疫苗经滴鼻免疫后定量PCR应用于检测不同时间DNA疫苗pGJA-P／VAX在小鼠体内各组织中的分布及其在接种部位与引流淋巴结内mRNA的表达情况，从而为DNA疫苗产生持续性免疫应答的机制提供试验数据，对该疫苗进一步研究提供了安... 本研究将实验疫苗经滴鼻免疫后定量PCR应用于检测不同时间DNA疫苗pGJA-P／VAX在小鼠体内各组织中的分布及其在接种部位与引流淋巴结内mRNA的表达情况，从而为DNA疫苗产生持续性免疫应答的机制提供试验数据，对该疫苗进一步研究提供了安全性方面的试验资料。 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 小鼠体内分布 实验性 pGJA-P 引流淋巴结 定量PCR 表达情况 mRNA

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龋病疫苗可望让人远离蛀蚜

13

《健康生活》 2010年第4期35-35,共1页

武汉大学口腔医院樊明文教授开展的“龋病牙髓病的基础与临床研究”获2009年国家科技进步奖二等奖。他领导研发的防龋DNA疫苗历时20年，已完成实验室研究，将形成产品，待国家审批后有望走向市场。据悉，该疫苗用于1岁～3岁的儿童，喷... 武汉大学口腔医院樊明文教授开展的“龋病牙髓病的基础与临床研究”获2009年国家科技进步奖二等奖。他领导研发的防龋DNA疫苗历时20年，已完成实验室研究，将形成产品，待国家审批后有望走向市场。据悉，该疫苗用于1岁～3岁的儿童，喷入鼻腔内，小孩可直接对龋齿产生免疫，免于龋病困扰，甚至终身保留全部牙齿。 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 龋病 武汉大学口腔医院 国家科技进步奖 2009年 临床研究 牙髓病 实验室

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防龋疫苗主动免疫的现状与未来 被引量：10

14

作者 樊明文 边专 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期401-403,共3页

关键词 合成肽防龋疫苗 龋齿 防龋dna疫苗 基因工程防龋疫苗 基因工程亚单位防龋疫苗

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LE-pGJA-P/VAX黏膜递呈系统的制备及其理化性质评价 被引量：2

15

作者 杨柳 杨颖 +2 位作者 林玉红 李宇红 樊明文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第3期218-219,共2页

目的:制备LE-pGJA-P/VAX黏膜递呈系统,并对其理化和生物学性质进行检测。方法:利用中试生产的pGJA-P/VAX质粒通过与脂质体LE溶液直接混合制备LE-pGJA-P/VAX复合物,通过琼脂糖凝胶电泳阻滞实验和激光粒度仪检测该复合物的理化性质,并将... 目的:制备LE-pGJA-P/VAX黏膜递呈系统,并对其理化和生物学性质进行检测。方法:利用中试生产的pGJA-P/VAX质粒通过与脂质体LE溶液直接混合制备LE-pGJA-P/VAX复合物,通过琼脂糖凝胶电泳阻滞实验和激光粒度仪检测该复合物的理化性质,并将其体外转染CHO细胞检测是否能体外表达目的蛋白。结果:制备的LE-pGJA-P/VAX复合物平均粒径为50nm,ZETA电位为14.5mV,体外转染CHO细胞48h后,经细胞免疫荧光染色,转染组可见细胞浆红色荧光染色,提示可有效表达质粒编码的PAc蛋白,而裸质粒转染组则未见明显红色荧光。结论:LE-pGJA-P/VAX复合物表面电荷均匀,粒径小,且粒径分布范围窄,符合纳米粒子特征,可在体外表达编码蛋白,提示该递呈系统可用于防龋DNA疫苗的黏膜递呈,为后续增强防龋DNA疫苗经鼻腔黏膜途径投递的免疫效能奠定基础。 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 脂质体 黏膜 递呈系统

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预防与保健

16

《中国医学文摘（口腔医学）》 2007年第5期242-244,共3页

防龋DNA疫苗pGJA-P／VAX免疫小鼠后的抗DNA抗体检测,江苏省居民口腔健康行为调查,天津市部分老年干部口腔健康状况调查报告,陕西省中小学生龋病抽样调查及其趋势的分析,含氟、镧漱口水防治老年人根面龋的临床研究,冷酸解离-氟离子电极... 防龋DNA疫苗pGJA-P／VAX免疫小鼠后的抗DNA抗体检测,江苏省居民口腔健康行为调查,天津市部分老年干部口腔健康状况调查报告,陕西省中小学生龋病抽样调查及其趋势的分析,含氟、镧漱口水防治老年人根面龋的临床研究,冷酸解离-氟离子电极法测定牙膏中总氟含量, 展开更多

关键词 防龋dna疫苗 保健 预防 pGJA-P 健康状况调查 老年人根面龋 口腔健康 小学生龋病

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