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大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察 被引量:29
1
作者 赵豫刚 周吉 +6 位作者 张雪军 门晓炜 王锐 周飞 陈德红 余志运 石洪波 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第7期619-621,共3页
目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细... 目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。 展开更多
关键词 精索静脉曲张 附睾上皮细胞 细胞凋亡 α-1 4-葡糖苷酶 唾液酸 大鼠
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绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性 被引量:8
2
作者 范晓梅 张通 +2 位作者 栗瑞兰 边小娜 张家新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1212-1220,共9页
本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪... 本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪和CCK法分别检测细胞纯度和增殖情况,在电镜下观察细胞超微结构。结果表明,两种培养方法所获的细胞均呈岛屿状克隆生长和较好的增殖能力,具有活跃的分泌和代谢功能;上皮细胞特异性的角蛋白18和附睾特异性的谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)的表达以及流式细胞仪结果显示,两种方法所获细胞均为纯度较高的附睾上皮细胞,但改良组织块消化法获得原代细胞需要的时间长,酶消化法获得原代细胞时间短,获得的细胞量大。本研究结果为进一步研究绒山羊附睾上皮功能提供了良好的基础。 展开更多
关键词 细胞培养 附睾上皮细胞 酶消化法 改良组织块消化法
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大鼠睾丸扭转复位后附睾上皮细胞凋亡及肉碱变化 被引量:4
3
作者 官毅 郑新民 +1 位作者 杨志伟 李世文 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第7期636-638,共3页
目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与肉碱分泌的关系。方法:24只健康成年雄性SD大鼠随机均分为:对照(扭转0 h)、A组(扭转2 h)和B组(扭转5 h),建立左侧睾丸扭转复位模型。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,DTNB法检测扭转侧附睾... 目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与肉碱分泌的关系。方法:24只健康成年雄性SD大鼠随机均分为:对照(扭转0 h)、A组(扭转2 h)和B组(扭转5 h),建立左侧睾丸扭转复位模型。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,DTNB法检测扭转侧附睾肉碱的含量。结果:睾丸扭转2 h复位后24 h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比,上升不明显(P>0.05),肉碱含量改变不明显(P>0.05);扭转5 h复位后24 h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比,上升极显著(P<0.01),肉碱含量明显下降(P<0.05)。结论:睾丸扭转2 h复位后24 h,附睾上皮细胞凋亡增加无显著性,其浓缩分泌肉碱的功能不受影响;扭转5 h复位后24 h,附睾上皮细胞凋亡严重,其浓缩分泌肉碱的功能下降。 展开更多
关键词 睾丸扭转 细胞凋亡 肉碱 附睾上皮细胞 大鼠
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一氧化氮参与附睾上皮细胞感染后的宿主防御
4
作者 赵云涛 郭景慧 +2 位作者 陈璇 伍忠銮 周文良 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期84-88,共5页
以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,... 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,采用iNOS的抑制剂L-NMMA和AGE预处理后,NO水平显著降低,与空白处理组相比,抑制剂处理组的S.aureus数量显著增加,这表明NO参与了附睾上皮细胞的宿主防御过程,在附睾上皮细胞的宿主防御中具有重要的作用。 展开更多
关键词 附睾上皮细胞 一氧化氮 宿主防御
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附睾上皮细胞表达功能性的TLR-2和TLR-4
5
作者 赵云涛 郭景慧 +1 位作者 伍忠銮 周文良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-127,132,共3页
目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对... 目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对附睾上皮细胞进行功能性检测。结果:TLR2和TLR4在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上在附睾上皮细胞均有表达,TLR2和TLR4的配体LTA和LPS均能激活附睾上皮细胞的天然免疫反应,产生炎症因子TNF-α和IL-1β,差异有统计学意义。结论:附睾上皮细胞表达功能性的TLR2和TLR4。 展开更多
关键词 附睾上皮细胞 TOLL样受体2 Toll样受体4 表达 天然免疫
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大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定 被引量:2
6
作者 程胖 刘博 +3 位作者 冯潇 魏金花 马斌芳 李臻 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期232-236,共5页
目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况... 目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况进行鉴定。结果酶消化法较组织块法得到的附睾上皮细胞纯度高,免疫荧光染色结果证明所得附睾上皮细胞主要是主细胞,免疫组织化学结果证明培养的附睾上皮细胞中有雄激素受体和雌激素受体α的表达。结论利用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行体外培养,方法简单易行,成功率高。 展开更多
关键词 附睾上皮细胞 原代培养 纯化 雄激素受体 雌激素受体a
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附睾上皮细胞体外培养模式综述 被引量:1
7
作者 石慧 李建远 《中外医学研究》 2011年第9期120-121,共2页
附睾上皮细胞培养和永生化方法的确立,对研究生殖系统疾病以及附睾特异表达基因的功能具有重要意义。本文对附睾上皮细胞体外培养模式做简要综述。
关键词 附睾上皮细胞 原代培养方法 永生化
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鬼臼毒素对大鼠附睾上皮细胞基因表达差异的影响
8
作者 李国停 谢淑武 +3 位作者 钟瑞华 陈平 钱越英 朱焰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1086-1087,共2页
目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片... 目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片段化后与芯片杂交,检测芯片并记录结果。结果鬼臼毒素组细胞与空白对照组相比,差异倍数在5倍以上的有137个基因,其中73个基因上调,64个基因下调;差异倍数在10倍以上的有40个,包括26个上调基因(U2SURP,DANJB7,ARHGAP15,TEMEM47,CCL3,MMP9,CSF3,IL23A,CXCL2,MMP13,CSF2,CXCL3,MMP10,CXCL5,SCIN,LOC500846,OLR540,PLA2G2A,CXC3CLL,IL1B,LOC363060,DCHS2,CCL20,RNASE10,LOC360228,TNF-A)和14个下调基因(RAB44,KRT5,ADAMTSL2,LOC685767,LOC688842,RGD1564513,POP1,KCNJ10,POLR3A,CNTROB,FAM109A,ORL578,COL1LA2,TAS2R71)。两组差异表达基因Pathway富集功能分析显示,显著上调基因主要涉及细胞因子受体间相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)、肿瘤坏死因子信号通路、NF-kappa B信号通路、趋化因子信号通路、凋亡通路及风湿性关节炎通路;显著下调基因主要涉及神经刺激性配体受体通路和嗅觉传到通路等。差异基因最集中的通路是细胞因子间相互作用及细胞凋亡。结论鬼臼毒素主要通过两条途径影响大鼠附睾上皮细胞生长,分别是诱导凋亡和引发炎症反应。 展开更多
关键词 鬼臼毒素 附睾上皮细胞 基因表达 细胞凋亡 炎症反应
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EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究
9
作者 栾兆进 宋慧子 +3 位作者 杜炜 赵勇超 王兆琛 张家新 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第5期9-16,共8页
【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——... 【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P<0.01),凋亡指数显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P<0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P<0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P<0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。 展开更多
关键词 表皮生长因子 附睾上皮细胞 绵羊 细胞增殖 叉头盒蛋白O1
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永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析 被引量:3
10
作者 宋慧子 栾兆进 +3 位作者 王兆琛 杜炜 赵勇超 张家新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1624-1633,共10页
旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免... 旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免疫荧光法鉴定其角蛋白18(CK18)和人端粒酶逆转录亚基(hTERT)表达情况;RT-PCR检测其hTERT mRNA的表达;采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力;利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况;核型分析检测其倍体情况;从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)和雄激素受体(AR)的表达情况。结果显示,原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态。hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞,传45代后,hTERT-SEECs仍呈铺路石状;hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT,并且拥有正常的二倍体核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs(P<0.05),处于S期细胞比例显著高于SEECs(P<0.05),且其活细胞率显著高于SEECs(P<0.05),凋亡率显著低于SEECs(P<0.05);hTERT-SEECs和SEECs的GPX5和AR蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。本研究所建立的hTERT-SEECs经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态,增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性。 展开更多
关键词 绵羊附睾上皮细胞 永生化 HTERT 基因表达
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鬼臼毒素诱导离体大鼠附睾上皮细胞凋亡机制研究
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作者 李国停 钟瑞华 +4 位作者 周洁芸 谢淑武 陈平 钱越英 朱焰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1357-1363,共7页
目的探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin,PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Ann... 目的探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin,PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态;RT-PCR技术研究TNF-αmRNA的变化;ELISA法检测鬼臼毒素对细胞培养上清液TNF-α水平的影响;Western blot法检测细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达水平。结果CCK-8结果显示,鬼臼毒素能明显抑制大鼠附睾上皮细胞增殖并诱导凋亡,并呈剂量及时间依赖性(P<0.05),24、48、72 h的半数抑制浓度(95%置信区间)分别为59.36(15.50~227.41)、0.37(0.080~1.70)、0.077(0.017~0.35)μmol·L^(-1);透射电镜下观察发现,鬼臼毒素引起附睾上皮细胞形态变圆,细胞核破碎,线粒体空泡化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,鬼臼毒素能升高TNF-αmRNA水平及细胞培养上清中TNF-α的含量;Western blot结果显示,鬼臼毒素能明显增加细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达。结论鬼臼毒素可通过线粒体调控的内源性通路和TNF受体介导的外源性通路,诱导大鼠附睾上皮细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 鬼臼毒素 生育力 大鼠附睾上皮细胞 细胞凋亡 线粒体 TNF-α caspase活化
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大鼠附睾上皮细胞的识别
12
作者 陈蕙玲 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第6期578-581,共4页
本文利用免疫荧光技术,用角蛋白和波形蛋白抗体作为组化探针,对不同年龄大鼠的整体和离体培养的附睾上皮细胞进行鉴定,区分出结缔组织成分。并证明用0.05%胰蛋白酶和0.1%胶原酶相继消化附睾管可得到较丰富的上皮细胞,体外培养能维持10d... 本文利用免疫荧光技术,用角蛋白和波形蛋白抗体作为组化探针,对不同年龄大鼠的整体和离体培养的附睾上皮细胞进行鉴定,区分出结缔组织成分。并证明用0.05%胰蛋白酶和0.1%胶原酶相继消化附睾管可得到较丰富的上皮细胞,体外培养能维持10d 以上,在培养过程中显示其形态特征。因此本文所用的分离、培养方法所得到的附睾上皮细胞可作为深入研究其功能的一种模型。 展开更多
关键词 大鼠 附睾上皮细胞
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大鼠睾丸扭转复位后附睾上皮细胞凋亡及唾液酸变化 被引量:6
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作者 赵豫刚 郑新民 +2 位作者 杨志伟 李世文 胡礼泉 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期19-21,共3页
目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与唾液酸分泌的关系。方法:24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型,分为对照组、扭转2h和4h共3组,每组8只。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,5-甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。结... 目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与唾液酸分泌的关系。方法:24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型,分为对照组、扭转2h和4h共3组,每组8只。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,5-甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。结果:睾丸扭转2h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升不明显(P>0.05),唾液酸含量改变不明显(P>0.05);扭转4h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升极显著(P<0.001),唾液酸含量下降明显(P<0.05)。结论:睾丸扭转2h复位后24h,附睾上皮细胞未发生凋亡,其分泌唾液酸功能不受影响;扭转4h复位后24h,附睾上皮细胞凋亡严重,其分泌唾液酸功能下降。 展开更多
关键词 睾丸扭转 细胞凋亡 唾液酸 附睾上皮细胞 复位
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p38和NF-κB信号通路参与金黄色葡萄球菌引发的附睾上皮细胞炎症反应 被引量:2
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作者 赵云涛 郭景慧 +2 位作者 陈璇 伍忠銮 周文良 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期124-128,共5页
为探讨丝裂原蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信号通路在附睾上皮细胞炎症反应中的作用,以金黄色葡萄球菌(S.au-reus)感染附睾上皮细胞的体外感染模型,采用信号通路阻断剂、ELISA和Western blot等方法研究MAPK和NF-κB信号通路参与附睾上皮细胞... 为探讨丝裂原蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信号通路在附睾上皮细胞炎症反应中的作用,以金黄色葡萄球菌(S.au-reus)感染附睾上皮细胞的体外感染模型,采用信号通路阻断剂、ELISA和Western blot等方法研究MAPK和NF-κB信号通路参与附睾上皮细胞的宿主防御。结果表明,附睾上皮细胞感染S.aureus后,诱导产生炎症因子TNF-α和IL-1,βNF-κB和p38 MAPK信号通路阻断剂BAY11-7082和SB203580能抑制S.aureus感染诱导的附睾上皮细胞炎症因子的产生。Western blot实验表明,附睾上皮细胞感染S.aureus后p38和IκB-α均被磷酸化,BAY11-7082和SB203580能分别抑制附睾上皮细胞感染S.aureus后p38和IκBα的磷酸化。表明p38 MAPK和NF-κB信号通路参与了S.aureus感染诱导的附睾上皮细胞炎症反应。 展开更多
关键词 附睾上皮细胞 炎症反应 P38 NF-ΚB
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GYY4137对精索静脉曲张大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 夏煜琦 程帆 +3 位作者 宁金卓 余伟民 饶婷 阮远 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第11期1044-1048,共5页
目的探讨缓释硫化氢供体GYY4137对精索静脉曲张(varicocele,VC)大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组各15只。VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型... 目的探讨缓释硫化氢供体GYY4137对精索静脉曲张(varicocele,VC)大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组各15只。VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型,假手术组、假手术+GYY4137组仅开腹不结扎左肾静脉。VC+GYY4137组、假手术+GYY4137组术后腹腔注射GYY4137(20mg/kg GYY4137溶于1mL生理盐水),1次/d,连续4周,VC组、假手术组腹腔注射等量生理盐水。药物处理4周后处死大鼠,取左侧附睾组织行病理检查,TUNEL法检测4组附睾上皮细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组织化学法检测附睾上皮细胞细胞色素C(cytochrome C,CytC)、caspase-3阳性表达率,Western blot法检测附睾组织CytC、caspase-3蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测附睾组织CytC mRNA、caspase-3mRNA相对表达量。结果药物处理4周,假手术组、假手术+GYY4137组附睾结构正常、上皮细胞排列整齐,VC组附睾组织结构萎缩、附睾管腔结构破坏、间质水肿,VC+GYY4137组附睾结构破坏、间质水肿程度较VC组轻;药物处理4周,VC组、VC+GYY4137组附睾上皮细胞AI[(23.18±2.09)%、(12.73±1.14)%]、CytC阳性表达率[(25.24±1.99)%、(13.88±1.26)%]及caspase-3阳性表达率[(28.20±2.11)%、(17.33±1.28)%]高于假手术组[(5.46±0.46)%、(5.37±0.77)%、(4.52±0.63)%]、假手术+GYY4137组[(5.86±0.55)%、(5.53±0.52)%、(4.93±0.65)%](P<0.05),VC组高于VC+GYY4137组(P<0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P>0.05);VC组、VC+GYY4137组附睾组织CytC蛋白相对表达量(0.38±0.02、0.27±0.01)、CytC mRNA相对表达量(3.64±0.41、1.55±0.14)、caspase-3蛋白相对表达量(0.27±0.02、0.22±0.01)、caspase-3mRNA相对表达量(4.09±0.36、2.27±0.32)均高于假手术组(CytC蛋白:0.11±0.03;CytC mRNA:1.01±0.04;caspase-3蛋白:0.10±0.01;caspase-3mRNA:1.03±0.15)、假手术+GYY4137组(CytC蛋白:0.12±0.01;CytC mRNA:1.00±0.10;caspase-3蛋白:0.09±0.01;caspase-3mRNA:1.09±0.18)(P<0.05),且VC组高于VC+GYY4137组(P<0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GYY4137通过下调VC大鼠附睾组织CytC及caspase-3表达,抑制附睾上皮细胞凋亡,减轻附睾组织损伤。 展开更多
关键词 精索静脉曲张 GYY4137 附睾上皮细胞凋亡 细胞色素C CASPASE-3 大鼠
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绵羊附睾GPX5的抗氧化功能研究
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作者 栾兆进 赵勇超 +1 位作者 宋慧子 张家新 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2022年第8期8-14,26,共8页
【目的】利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。【方法】体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重... 【目的】利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。【方法】体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码(scramble)序列(siRNA-NC),采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照(CK),于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果。采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧(ROS)水平,采用TBA法检测其丙二醛(MDA)水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。【结果】分离培养的细胞可与角蛋白18(CK18)特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验。siRNA-N.3(即siRNA-GPX5)对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验。随着过氧化氢(H_(2)O_(2))处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降。与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高,8-OHdG水平明显上升。【结论】GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤。 展开更多
关键词 绵羊 附睾上皮细胞 谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5) 抗氧化能力
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雄激素受体及共调节因子在睾酮调节绵羊附睾GPX5表达中的作用分析
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作者 栾兆进 赵勇超 +2 位作者 许娇霞 刘永斌 张家新 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期94-108,共15页
为探究雄激素受体(Androgen receptor,AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells,EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制,本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响;利用qRT-PCR、... 为探究雄激素受体(Androgen receptor,AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells,EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制,本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响;利用qRT-PCR、免疫荧光法和Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB结合蛋白(cAMP-response element-binding protein,CBP)、p300和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况,采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性。结果表明:1)与对照组相比,100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P<0.01),1000 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量差异不显著(P>0.05),但分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)低于100 nmol/L睾酮组;100 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白表达量分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于对照组,然而1000 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白的表达量显著低于对照组(P<0.05);1000 nmol/L睾酮组细胞中的CBP、p300、SRC-1蛋白表达极显著高于对照组(P<0.01),特别是核内的表达量明显增高。2)与对照组相比,siRNA-AR组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白的表达量差异不显著(P>0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。pcDNA3.1-AR组GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高。3)siRNA-SRC-1和siRNA-p300组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组均显著降低(P<0.05),而AR的蛋白表达量与对照组差异不显著(P>0.05),AR的转录活性显著降低(P<0.05)。综上,睾酮对绵羊EECs GPX5、AR及其共调节因子的表达具有浓度依赖性的调节效应,睾酮通过AR及其共调节因子SRC-1和p300/CBP的协同调节GPX5表达。本研究为探究GPX5在绵羊附睾中的调节机制提供理论依据。 展开更多
关键词 附睾上皮细胞 谷胱甘肽过氧化物酶5 睾酮 雄激素受体 共调节因子
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APOPTOSIS OF EPIDIDYMIS EPITHELIUM AND CONTENT OF EPIDIDYMIS SIALIC ACID FOLLOWING TORSED/DETORSED TESTES IN RAT 被引量:1
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作者 赵豫刚 郑新民 +2 位作者 杨志伟 李世文 胡礼泉 《Journal of Shanghai Second Medical University(Foreign Language Edition)》 2004年第2期114-117,共4页
Objective To investigate the apoptosis of epididyrnis epithelium and the change of epididymissialic acid following torsed/detorsed testes. Methods Twenty four adult male Sprague-Dawley rats were subjected to unilatera... Objective To investigate the apoptosis of epididyrnis epithelium and the change of epididymissialic acid following torsed/detorsed testes. Methods Twenty four adult male Sprague-Dawley rats were subjected to unilateral 720 testicular torsion with the duration of 2h and 4h, then repaired. The ischemic epididymis were collected for detecting the content of sialic acid by using spectrophotometry and the apoptosis with TUNEL technique. Results There were no statistically significant difference in the apoptosis of epididymis epithelium [(9.51± 2.78)% vs (6.34±1. 98)%] and the content of epididymis sialic acid(23, 3851 ± 9. 2199mg/mgprot vs 19. 3661 6. 3373mg/mgprot) at 24h between following 2h-torsed/detorsed testes and those of sham group. There were statistically significant difference in the apopotosis of epididymis epithelium[ (46. 81 ±3. 55)% vs (6. 34±1. 98) % ] and the content of epididymis sialic acid (13. 7249±7. 8006mg/mgprot vs 19. 3661±6. 3373mg/mgprot) at 24h between following 4h-torsed/detorsed testes and those of sham group(P <0. 05). Conclusion The results suggest that the sialic acid-secreting-function of epididymis remain normal at 24h following 2h-torsed/detorsed testes, while the apoptosis index of epididymis epithelium do not increase. The epididymis would be injured at 24h following 4h-torsed/detorsed testes, while the apoptosis index increased. 展开更多
关键词 testicular torsion detorsion cell apoptosis sialic acid
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HE4和CA125联合检测在女性盆腔恶性肿瘤诊断中的应用 被引量:5
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作者 王术艺 王猛 金海红 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1400-1401,共2页
人附睾上皮分泌蛋白4(human epididymis gene product4,HFA)基因最早是在人附睾上皮细胞中发现的,可编码附睾特异性生育相关蛋白HFA。正常卵巢组织不表达HE4,卵巢癌组织中HE4高表达^[1]。HE4作为一种新的肿瘤标志物,在良性肿瘤及... 人附睾上皮分泌蛋白4(human epididymis gene product4,HFA)基因最早是在人附睾上皮细胞中发现的,可编码附睾特异性生育相关蛋白HFA。正常卵巢组织不表达HE4,卵巢癌组织中HE4高表达^[1]。HE4作为一种新的肿瘤标志物,在良性肿瘤及正常组织中含量极低,但在卵巢癌组织中含量很高。卵巢癌是祸及女性的常见恶性肿瘤之一, 展开更多
关键词 恶性肿瘤诊断 女性盆腔 CA125 联合检测 附睾上皮细胞 卵巢癌组织 肿瘤标志物 分泌蛋白
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