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循环筛选法在除虫链霉菌诱变育种中的应用 被引量:12
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作者 徐志南 刘刚 +1 位作者 柯世省 岑沛霖 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期175-177,236,共4页
考察了诱变因素对除虫链霉菌的产量变异效应,从中选择了4种有效的诱变处理方式,并应用于该菌的诱变育种。通过引入循环筛选新方法,仅经4轮诱变筛选程序,得到了3株avermectin高产菌,其中IP842突变株在27℃经5... 考察了诱变因素对除虫链霉菌的产量变异效应,从中选择了4种有效的诱变处理方式,并应用于该菌的诱变育种。通过引入循环筛选新方法,仅经4轮诱变筛选程序,得到了3株avermectin高产菌,其中IP842突变株在27℃经5d摇瓶avermectinB1a效价可达到421mg/L,并具有较好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 Avermeetin 除虫链霉菌 循环筛选法 大环内酯
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培养基成分和补料对阿维菌素发酵过程中除虫链霉菌菌丝形态的影响 被引量:11
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作者 陈凝 王永红 +4 位作者 储炬 巫延斌 储消和 庄英萍 张嗣良 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期496-501,共6页
研究了阿维菌素发酵过程中培养基成分和补料对菌丝形态的影响,以及在这些条件下菌丝形态、菌体代谢以及产量之间的相互关系。结果表明:碳氮源种类和碳氮比与菌体生长密切相关,对除虫链霉菌前期的菌丝形态影响较大。只有当除虫链霉菌为... 研究了阿维菌素发酵过程中培养基成分和补料对菌丝形态的影响,以及在这些条件下菌丝形态、菌体代谢以及产量之间的相互关系。结果表明:碳氮源种类和碳氮比与菌体生长密切相关,对除虫链霉菌前期的菌丝形态影响较大。只有当除虫链霉菌为密实的球状时,才能获得较高的阿维菌素产量;进一步通过调控使发酵中后期菌丝形态保持一定的菌球尺寸(球核面积、核区周长和菌丝球面积)对维持阿维菌素合成有利。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 阿维菌素 菌丝形态
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构建有序排列的除虫链霉菌基因组的柯斯文库用于工业生产菌株的遗传改造 被引量:6
3
作者 夏海洋 黄隽 +5 位作者 胡敏杰 沈美娟 谢鹏飞 张亮 王海彬 覃重军 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期403-405,444,共4页
以容纳DNA大片段的柯斯质粒Supercos-1为载体,构建了除虫链霉菌的基因组文库。对约1000个柯斯质粒上插入片段的两端进行测序,并利用全基因组序列的信息,构建了覆盖约91%基因组的有序排列的柯斯文库。利用λ-Red高效DNA重组和大肠埃希菌... 以容纳DNA大片段的柯斯质粒Supercos-1为载体,构建了除虫链霉菌的基因组文库。对约1000个柯斯质粒上插入片段的两端进行测序,并利用全基因组序列的信息,构建了覆盖约91%基因组的有序排列的柯斯文库。利用λ-Red高效DNA重组和大肠埃希菌-链霉菌接合转移技术,建立了除虫链霉菌的基因组遗传操作系统。运用该系统可以在除虫链霉菌工业菌株中进行高效、精确的基因敲除工作和连续的基因缺失研究,获得可以用来生产多拉菌素的工程菌株。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 有序基因文库 基因敲除 工业菌株
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除虫链霉菌10个聚酮类抗生素生物合成基因簇的敲除对阿维菌素产量的影响 被引量:4
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作者 胡敏杰 夏海洋 覃重军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1471-1476,共6页
【目的】考察除虫链霉菌基因组中其它聚酮合成酶类(Polyketide synthase,PKS)抗生素生物合成基因簇的敲除突变对于阿维菌素产量的影响。【方法】构建了11个PKS基因簇的打靶Cosmid和质粒载体,导入除虫链霉菌中筛选突变株。【结果】在工... 【目的】考察除虫链霉菌基因组中其它聚酮合成酶类(Polyketide synthase,PKS)抗生素生物合成基因簇的敲除突变对于阿维菌素产量的影响。【方法】构建了11个PKS基因簇的打靶Cosmid和质粒载体,导入除虫链霉菌中筛选突变株。【结果】在工业菌株MMR630中成功敲除了10个PKS基因簇。发酵结果显示7个PKS基因簇敲除突变株中阿维菌素的产量均有不同程度的提高,而2个突变株不能产生阿维菌素。然而,在3个连续敲除2个PKS基因簇的突变株中阿维菌素产量没有能够超过单个PKS敲除突变株的提升幅度。【结论】除虫链霉菌基因组的一些PKS基因簇的敲除可以提高阿维菌素的产量,同时暗示同一类次生代谢产物的代谢流之间存在复杂的相互作用关系。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 聚酮类抗生素生物合成基因簇 基因敲除 工业菌株
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链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株 被引量:21
5
作者 陶纯长 谌颉 +4 位作者 郭美锦 郭元昕 储炬 庄英萍 张嗣良 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期521-523,528,共4页
为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 3... 为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 30 %以上。实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时 。 展开更多
关键词 AVERMECTIN 除虫链霉菌 霉素抗性 理性筛选
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阿维菌素产生菌的诱变育种 被引量:8
6
作者 于秀莲 何建勇 +2 位作者 白秀峰 王晓伟 段焕光 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期222-225,共4页
目的提高产生菌B1a组分的产量。方法采用诱变剂亚硝基胍处理菌种 ,以含 1g·L-1甲硫氨酸的分离培养基作为定向筛选的分离平板 ,挑选生长快的菌落进行初筛、复筛。结果筛选得到高产菌株中B组分含量显著提高 ,其中得到的突变株M— 2 ... 目的提高产生菌B1a组分的产量。方法采用诱变剂亚硝基胍处理菌种 ,以含 1g·L-1甲硫氨酸的分离培养基作为定向筛选的分离平板 ,挑选生长快的菌落进行初筛、复筛。结果筛选得到高产菌株中B组分含量显著提高 ,其中得到的突变株M— 2 0经摇瓶初、复筛和传代实验表明是稳定的B组分高产变异株 ,其B组分含量达 82 1% ,较出发菌株提高 14 6 % ,其中B1组分达5 2 4 % ,较出发菌株提高 19 3%。结论采用NTG诱变结合使用含 展开更多
关键词 阿维菌素 除虫链霉菌 诱变育种 定向选育
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烟碱降解微生物的筛选、鉴定及其烟碱降解效果评价 被引量:2
7
作者 丁怀宇 韩铭海 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期82-85,共4页
采用烟碱降解微生物平板筛选鉴别方法,从白肋烟和烤烟中筛选出11株烟碱降解微生物,经初步鉴定,3株为细菌,8株为放线菌;采用荷移光谱法测定了11株菌对纯烟碱和白肋烟叶片中烟碱的降解能力,其中放线菌K2对烟碱的降解能力最强,对白肋烟叶... 采用烟碱降解微生物平板筛选鉴别方法,从白肋烟和烤烟中筛选出11株烟碱降解微生物,经初步鉴定,3株为细菌,8株为放线菌;采用荷移光谱法测定了11株菌对纯烟碱和白肋烟叶片中烟碱的降解能力,其中放线菌K2对烟碱的降解能力最强,对白肋烟叶片中的烟碱降解率(48h)为74.77%,对纯烟碱可以完全降解。经过生理生化试验鉴定和16SrDNA序列比对,确定放线菌K2为除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)。 展开更多
关键词 白肋烟 烤烟 烟碱 放线菌 烟碱降解 除虫链霉菌
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利用合成多位点突变aveC*基因提高多拉菌素工业菌株中有效活性组份的含量 被引量:1
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作者 路志群 党福军 +1 位作者 夏海洋 覃重军 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期574-578,共5页
目的合成多位点突变的aveC*基因用于提高除虫链霉菌工业菌株产生多拉菌素(CHC-B1)组份的含量。方法利用相互重叠的引物进行PCR扩增,合成多位点突变的aveC*基因。利用PCR打靶技术获得aveC*基因发生置换的突变株。结果用32条引物进行PCR扩... 目的合成多位点突变的aveC*基因用于提高除虫链霉菌工业菌株产生多拉菌素(CHC-B1)组份的含量。方法利用相互重叠的引物进行PCR扩增,合成多位点突变的aveC*基因。利用PCR打靶技术获得aveC*基因发生置换的突变株。结果用32条引物进行PCR扩增,获得了10个位点突变的aveC*基因。构建了打靶载体pFX-HA,在基因组上将aveC基因原位替换成了aveC*基因。所获得的突变株LF2发酵产生多拉菌素组份的纯度由出发菌株的25%提高到93%,发酵效价达到691.5mg/L。结论除虫链霉菌工业菌株基因组中原位替换的多位点突变的aveC*基因可以大幅度提高多拉菌素组份的含量,降低工业提取纯化的成本。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 aveC*基因 多拉菌素
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avermectin生物合成基因簇的研究进展 被引量:3
9
作者 孙宇晖 邓子新 《国外医药(抗生素分册)》 CAS 2001年第3期108-112,共5页
近期对除虫链霉菌 avermectin生物合成基因簇的研究揭示 ,它包含 4个大的开放阅读框 ,分别编码avermectin聚酮合成酶 4个巨大多功能多肽 (AVRS1,AVRS2 ,AVRS3和 AVRS4) ,构成了迄今已知的最复杂的多功能酶系统。此外 ,序列分析结果还显... 近期对除虫链霉菌 avermectin生物合成基因簇的研究揭示 ,它包含 4个大的开放阅读框 ,分别编码avermectin聚酮合成酶 4个巨大多功能多肽 (AVRS1,AVRS2 ,AVRS3和 AVRS4) ,构成了迄今已知的最复杂的多功能酶系统。此外 ,序列分析结果还显示 ,在这 4个大的开放阅读框的前、后及中间还存在另 14个开放阅读框 ,它们分别与聚酮后修饰以及 avermectin生物合成的其它步骤有关。本文综述了对 avermectin生物合成基因簇分子研究的最新进展。 展开更多
关键词 聚酮合酶 AVERMECTIN 除虫链霉菌 生物合成 基因簇 抗生素
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阿维菌素的生物合成及代谢工程研究进展 被引量:4
10
作者 田靖 张惟材 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期447-450,共4页
阿维菌素(avermectin)是由除虫链霉菌(Streptomycesavermitilis)产生的一种具有杀虫活性的大环内酯类抗生素,在农业和畜牧业中应用广泛。本文综述了有关除虫链霉菌基因组序列分析、阿维菌素的生物合成以及阿维菌素育种和代谢工程的研究... 阿维菌素(avermectin)是由除虫链霉菌(Streptomycesavermitilis)产生的一种具有杀虫活性的大环内酯类抗生素,在农业和畜牧业中应用广泛。本文综述了有关除虫链霉菌基因组序列分析、阿维菌素的生物合成以及阿维菌素育种和代谢工程的研究进展。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 阿维菌素 生物合成 代谢工程
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前体氨基酸对avermectin生物合成的影响 被引量:9
11
作者 胡景 储炬 +4 位作者 谌颉 庄英萍 张嗣良 罗家立 白骅 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期388-390,396,共4页
Avermectin(AVM)是十六元大环内酯类抗生素 ,其类似物的组成及产量受外源氨基酸的强烈影响。本文研究了 Asp、Thr、Val、Met、Ile五种前体氨基酸对 avermectin生物合成的影响。实验结果表明在发酵开始前加入 0 .0 5 %的异亮氨酸 ,AVMB1... Avermectin(AVM)是十六元大环内酯类抗生素 ,其类似物的组成及产量受外源氨基酸的强烈影响。本文研究了 Asp、Thr、Val、Met、Ile五种前体氨基酸对 avermectin生物合成的影响。实验结果表明在发酵开始前加入 0 .0 5 %的异亮氨酸 ,AVMB1a的效价比对照提高了 2 0 0 %。同时 ,初步定量研究了添加各种氨基酸对 avermectin产生菌除虫链霉菌的菌丝形态的影响 ,探讨了菌形与 avermectin合成能力的相关性。 展开更多
关键词 AVERMECTIN 氨基酸 生物合成 除虫链霉菌 菌丝形态
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工业规模产阿维菌素的分批发酵动力学及其流变特性模型 被引量:6
12
作者 王遗 陈中兵 +3 位作者 储消和 唐寅 夏建业 王永红 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期576-580,584,共6页
本文主要对除虫链霉菌在150m3发酵罐产阿维菌素分批发酵动力学及其流变特性进行研究,并建立了动力学模型以及相应的发酵液流变特性模型。对模型参数进行了非线性回归的结果显示,预测值与实验值有良好的拟合性,实验值平均偏差在5%左右,... 本文主要对除虫链霉菌在150m3发酵罐产阿维菌素分批发酵动力学及其流变特性进行研究,并建立了动力学模型以及相应的发酵液流变特性模型。对模型参数进行了非线性回归的结果显示,预测值与实验值有良好的拟合性,实验值平均偏差在5%左右,表明了这些模型对在150m3发酵罐产阿维菌素的发酵生产具有实际意义。引入菌丝形态分析软件,对发酵过程菌丝球的周长进行了定量计算,并对其与流变参数之间的关系建立模型,这种快速的菌丝形态采集和定量分析手段可用于阿维菌素发酵过程在线实时监控,对快速预测发酵过程阿维菌素产量,及时指导阿维菌素发酵过程提供了一个有效的参数。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 阿维菌素 动力学模型 流变特性模型 菌丝球
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接种方式对阿维菌素发酵过程的影响 被引量:2
13
作者 姚小员 储消和 +4 位作者 庄英萍 梁剑光 王永红 储炬 张嗣良 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期682-687,共6页
在摇瓶发酵中对除虫链霉菌的孢子接种工艺进行了初步研究,同时比较了孢子接种、常规的挖块接种和菌丝接种3种不同接种方式对除虫链霉菌菌体生长和细胞代谢参数的影响。实验结果表明:孢子接种的最适孢子接种量在4~6×10^6个/mL... 在摇瓶发酵中对除虫链霉菌的孢子接种工艺进行了初步研究,同时比较了孢子接种、常规的挖块接种和菌丝接种3种不同接种方式对除虫链霉菌菌体生长和细胞代谢参数的影响。实验结果表明:孢子接种的最适孢子接种量在4~6×10^6个/mL范围内,而不同接种方式导致了发酵过程除虫链霉菌营养物质消耗、PH值变化、菌丝形态以及效价等方面差异。孢子接种方式在摇瓶发酵中表现出明显优势,采用孢子接种方式获得最终阿维菌素的效价比常规的挖块接种方式提高10%以上,比菌丝接种方式提高了20%以上。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 阿维菌素 孢子接种 接种方式
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利用前体物质定向选育阿维菌素高产菌株 被引量:3
14
作者 陈中兵 王普 宋友礼 《农药》 CAS 北大核心 2008年第10期731-733,共3页
以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株。通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量。在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D-脱氧葡萄... 以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株。通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量。在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D-脱氧葡萄糖作为前体物质进行正突变株的定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株AV-03-35,其摇瓶发酵效价达到4695u/mL,较出发菌株提高15.5%。采用该菌株在2t罐进行生产验证,平均发酵效价达4592u/mL,较出发菌株提高了13%。 展开更多
关键词 阿维菌素 除虫链霉菌 诱变育种 定向筛选 前体物质
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5-酮基avermectin基因工程菌的构建 被引量:1
15
作者 马颖谡 何建勇 张怡轩 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期148-152,共5页
采用基因插入失活的方法,将1.5kb安普霉素抗性基因插入1.8kb aveF基因内部SalI位点,构建重组质粒pPC-5,并转化除虫链霉菌D2-14,获得基因工程菌株AV-F1。经HPLC分析,发现该菌株主要产生两个组分,分别为5-酮avermectin 1a和5-酮avermectin... 采用基因插入失活的方法,将1.5kb安普霉素抗性基因插入1.8kb aveF基因内部SalI位点,构建重组质粒pPC-5,并转化除虫链霉菌D2-14,获得基因工程菌株AV-F1。经HPLC分析,发现该菌株主要产生两个组分,分别为5-酮avermectin 1a和5-酮avermectin 2a,还产生一个小组分为acermectin B1a。5-酮avermectin基因工程菌株的构建成功,为化学合成新的avermectin衍生物提供了可利用的原料来源。 展开更多
关键词 除虫链霉菌 AVERMECTIN 5-酮avermectin 基因失活
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质谱仪在avermectin发酵过程中的应用 被引量:11
16
作者 谌颉 储炬 +3 位作者 庄英萍 张嗣良 罗家立 白骅 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期4-7,22,共5页
在除虫链霉菌发酵过程中,国内首次成功引入质谱仪进行尾气的在线测定,从而有助于过程的控制与理解。通过进行数据关联,发现质谱测定的数据更为全面和精确,由此计算的间接参数更为合理;呼吸商可以作为葡萄糖浓度过低的预警,参与补料速率... 在除虫链霉菌发酵过程中,国内首次成功引入质谱仪进行尾气的在线测定,从而有助于过程的控制与理解。通过进行数据关联,发现质谱测定的数据更为全面和精确,由此计算的间接参数更为合理;呼吸商可以作为葡萄糖浓度过低的预警,参与补料速率控制;另外还找到临界通气量为1600m3/h。 展开更多
关键词 质谱仪 除虫链霉菌 发酵过程 呼吸商
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采用紫外线连续诱变方法选育阿维菌素高产菌株 被引量:2
17
作者 狄小青 曲志西 张京力 《河北化工》 2009年第9期36-37,共2页
以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)为出发菌株,采用连续3次紫外诱变,同时使用D-脱氧葡萄糖进行定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株,较出发菌株提高了34.4%。
关键词 阿维菌素 除虫链霉菌 紫外连续诱变 D-脱氧葡萄糖
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Enhancement and selective production of avermectin B by recombinants of Streptomyces avermitilis via intraspecific protoplast fusion 被引量:10
18
作者 CHEN Zhi WEN Jia SONG Yuant WEN Ying LI JiLun 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第5期616-622,共7页
Among eight components of avermectin, B1 fractions have the most effective antiparasitic activities and the lowest level of toxic side-effects and are used widely in veterinary and agricultural fields. In-traspecific ... Among eight components of avermectin, B1 fractions have the most effective antiparasitic activities and the lowest level of toxic side-effects and are used widely in veterinary and agricultural fields. In-traspecific protoplast fusion between two strains of Streptomyces avermitilis, one an avermectin high producer (strain 76-05) and the other a genetically engineered strain containing the mutations aveDˉ and olmAˉ (strain 73-12) was performed for enhancement and selective production of avermectin B in the absence of oligomycin. Two recombinant strains (F23 and F29) were isolated and characterized with regards to the parental merits. F23 and F29 produced only the four avermectin B components with high yield and produced no oligomycin. The avermectin production of F23 and F29 was about 84.20% and 103.45% of the parental strain 76-05, respectively, and increased about 2.66-fold and 3.50-fold, re-spectively, compared to that of parental strain 73-12. F23 and F29 were genetically stable prototrophic recombinants and F29 was quite tolerant of fermentation conditions compared to avermectin high producer parental strain 76-05. The ability to produce avermectin B with high yield without the produc-tion of other avermectin components and oligomycin will make F23 and F29 useful strains for aver-mectin production. Strain F29's tolerance of fermentation conditions will also make it suitable for in-dustrial applications. 展开更多
关键词 除虫链霉菌 重组体 种内原生质体融合 除虫菌素B 高产菌株 选择性生产 阿维菌素B
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An adpA homologue in Streptomyces avermitilis is involved in regulation of morphogenesis and melanogenesis 被引量:3
19
作者 ZHAO JinLei WEN Ying CHEN Zhi SONG Yuan LI JiLun 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第5期623-630,共8页
In Streptomyces griseus, AdpA, the key transcriptional activator in the A-factor regulatory cascade, switches on the transcription of multiple genes required for secondary metabolism and morphological differentiation.... In Streptomyces griseus, AdpA, the key transcriptional activator in the A-factor regulatory cascade, switches on the transcription of multiple genes required for secondary metabolism and morphological differentiation. Streptomyces avermitilis also contains an ortholog of adpA, which is named adpA-a. To clarify the in vivo function of adpA-a, an adpA-a-disrupted strain was constructed by double crossover recombination. No difference in avermectin production was found between the adpA-a-disruptant and the wild-type strain. However, this disruptant neither formed spores nor produced melanin and its phenotype was restored to the original wild-type by a single copy of the adpA-a gene integrated into the chromosome. This report shows that adpA-a is involved in regulation of morphological differentiation and melanin production in S. avermitilis. 展开更多
关键词 灰色霉菌 除虫链霉菌 黑素生成 AdpA同族体 转化致活因子 形态发生 次级代谢
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利用基因组工程技术改良多拉菌素工业菌株
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《药物生物技术》 CAS CSCD 2010年第3期239-239,共1页
多拉菌素因其抗寄生虫能力强、疗效好、残留低,成为目前全球最好的抗寄生虫药之一。但是日前全球只有辉瑞独家生产,中国均从辉瑞进门,价格昂贵。中科院上海生科院与浙江海正药业集团公司合作,利用基因组工程技术改良除虫链霉菌,
关键词 技术改良 基因组 菌素 工程 抗寄生 菌株 工业 除虫链霉菌
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