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非同位素法分析序列特异性DNA结合蛋白的三种方法 被引量：1
1
作者 高春芳 王皓 +2 位作者 高国华 宓庆梅 孔宪涛 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第5期499-503,共5页
目的为在转录调控水平研究蛋白质异常表达机制,利用核转录因子与相应DNA调控序列特异结合的原理,非同位素法分析细胞内序列特异性DNA结合蛋白。方法凝胶滞留实验(EMSA)采用Dig-ddUTP末端标记DNA,核蛋白粗提或纯化产物与之液相结合后,PAG... 目的为在转录调控水平研究蛋白质异常表达机制,利用核转录因子与相应DNA调控序列特异结合的原理,非同位素法分析细胞内序列特异性DNA结合蛋白。方法凝胶滞留实验(EMSA)采用Dig-ddUTP末端标记DNA,核蛋白粗提或纯化产物与之液相结合后,PAGE分离核蛋白并转印至尼龙膜,化学发光法检测结果,Southwestern分析方法首先采用SDS-PAGE分离核蛋白粗提或纯化产物,蛋白转印至膜上后与Dig-dUTP末端标记的DNA杂交,酶免疫学检测结果,磁性DNA结合蛋白纯化法则将靶DNA与商品化磁性DNA粒子相连,用不同的连接、洗脱条件得到序列特异性靶DNA结合蛋白,银染显示核蛋白纯化结果。结果 EMSA中由于游离DNA与DNA-蛋白复合物有不同电泳迁移率,出现滞后DNA条带提示有识别该特定DNA序列的核蛋白存在,Southwestern分析除能提示核抽提物中有无可与DNA结合的核蛋白外,还提示其中核蛋白分子质量,核蛋白粗提物经磁性DNA亲和层析后DNA结合蛋白在银染时出现较纯的特异识别该DNA序列的核蛋白条带。结论 EMSA,Southwestern分析及磁性DNA层析是3种实用的研究DNA结合蛋白的方法,配伍应用具有简便、重复性好、敏感性和特异性高、无同位素污染等优点,是转录调控水平研究疾病相关基因异常表达的有效方法。 展开更多
关键词 序列分析 DNA结合蛋白类 遗传学 转录因子 非同位素法 细胞 病理
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非同位素PCR方法检测脆性X综合征FMR-1基因CGG重复序列数目
2
作者 李红 肖丽娟 韩冰 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2003年第5期537-539,共3页
目的　建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因。方法　采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针 ,检测通过PCR扩增的FMR - 1基因中CGG三核苷酸重复序列数目。从而判断所检样品中FMR - 1基因是否正常。结果　该法可检... 目的　建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因。方法　采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针 ,检测通过PCR扩增的FMR - 1基因中CGG三核苷酸重复序列数目。从而判断所检样品中FMR - 1基因是否正常。结果　该法可检测出正常人及携带者的CGG重复拷贝数。结论　该方法可以简便、安全、可靠地检测FMR - 1基因中 (CGG)n重复拷贝数 ,从而确定为正常人或携带者 。 展开更多
关键词 脆性X综合征 FMR—1基因 非同位素PCR法
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非同位素标记双向杂交法筛选差减文库
3
作者 罗敏捷 来茂德 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2001年第6期493-494,共2页
关键词 差减文库 非同位素标记双向杂交法DIG法 PCR
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非同位素方法在HLA-Ⅱ类抗原研究中的应用
4
作者 楼启华 范丽安 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1993年第3期179-181,共3页
HLA-Ⅱ类抗原的血清学分型存在着困难,故主要用基因分型的方法,如PCR/SSO方法。但受同位素的限制,还有许多不便之处。本文介绍几种同样具有高效,敏感,特异等特点的非同位素标记的方法:用辣根过氧化物酶(HRP),生物素(Biotin),地高辛(DIG... HLA-Ⅱ类抗原的血清学分型存在着困难,故主要用基因分型的方法,如PCR/SSO方法。但受同位素的限制,还有许多不便之处。本文介绍几种同样具有高效,敏感,特异等特点的非同位素标记的方法:用辣根过氧化物酶(HRP),生物素(Biotin),地高辛(DIG)标记探针,及与上述标记物结合的反转点杂交的方法,适合各实验室采用。 展开更多
关键词 人白细胞抗原 抗原 非同位素法
原文传递
地高辛标记核酸探针的应用
5
作者 刘剑凯 洪敏 +1 位作者 董丽雅 陈文华 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第4期432-433,共2页
本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ... 本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。 展开更多
关键词 非同位素标记法 核酸探针 地高辛 肿瘤 基因表达
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