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题名XBP1s条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立
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作者
杨鸿泽
刘永鑫
肖炎光
许国双
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机构
第四军医大学西京医院肾脏内科
上海南方模式生物发展有限公司
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出处
《中华肾病研究电子杂志》
2016年第6期254-259,共6页
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基金
国家自然科学基金(81470993
81272621)
+1 种基金
百特公司腹膜透析专项课题(CHN-RENAL-IIS-2012-039)
西京医院新技术新业务(XJGX15Y45)
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文摘
目的获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆,经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功,经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性ES细胞克隆,通过长片段PCR的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认,共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆E3、C6经扩增后注射C57BL/6J小鼠囊胚96个,通过胚胎移植,共获得2只高嵌合雄鼠,与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得3只F1代杂合小鼠,经PCR及测序鉴定正确。结论成功建立了XBP1s基因的Rosa26定点敲入F1代杂合子小鼠,为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s条件性敲入小鼠奠定了基础。
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关键词
XBP1s
非折叠蛋白反应/内质网应激
同源重组
基因打靶
条件性基因敲入
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Keywords
Spliced X-box-binding protein 1（XBP1s）
Unfolded protein response/ER stress
Homologous recombination
Gene targeting
Conditional gene knock-in
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分类号
R-332
[医药卫生]
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