目的 克隆颗粒酶 B(Gra B) ,构建 Gra B的原核表达载体 ,从而建立其原核表达体系 ,获得高效表达的重组 Gra B.方法 抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆Gra B c DNA,构建 Gra B原核表达载体 ,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴...目的 克隆颗粒酶 B(Gra B) ,构建 Gra B的原核表达载体 ,从而建立其原核表达体系 ,获得高效表达的重组 Gra B.方法 抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆Gra B c DNA,构建 Gra B原核表达载体 ,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;异丙基 - 1-硫代 -β-呋喃半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定 ,以 Gra B底物测定其活性 .结果 表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,并能作用于 Gra B特异性底物 .结论 建立了 Gra B原核表达系统 .展开更多
文摘目的 克隆颗粒酶 B(Gra B) ,构建 Gra B的原核表达载体 ,从而建立其原核表达体系 ,获得高效表达的重组 Gra B.方法 抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆Gra B c DNA,构建 Gra B原核表达载体 ,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;异丙基 - 1-硫代 -β-呋喃半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定 ,以 Gra B底物测定其活性 .结果 表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,并能作用于 Gra B特异性底物 .结论 建立了 Gra B原核表达系统 .
