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不同杂交瘤饲养细胞上清和条件培养液中IL-2和IL-6水平的比较 被引量：2
1
作者 杨琨 金伯泉 +3 位作者 赵宁 朱勇 刘崟 刘雪松 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1992年第1期59-62,共4页
本文应用细胞因子依赖细胞株CTLL和7TD1及。<sup>3</sup>H-TDR掺入方法,分别对6种常用培养杂交瘤的饲养细胞培养上清和条件培养液中IL-2和IL-6的生物学活性水平进行了定量检测和比较。结果发现,除大鼠混合胸腺细胞培养上清... 本文应用细胞因子依赖细胞株CTLL和7TD1及。<sup>3</sup>H-TDR掺入方法,分别对6种常用培养杂交瘤的饲养细胞培养上清和条件培养液中IL-2和IL-6的生物学活性水平进行了定量检测和比较。结果发现,除大鼠混合胸腺细胞培养上清中含有约1u/ml IL-2外,其它均未测出IL-2的生物学活性。但6种上清中都含有IL-6,其中人成纤维细胞CRL<sub>1506</sub>和人内皮细胞中含有很高水平的IL-6,分别为10000u/ml和2512u/ml;大鼠混合胸腺细胞和小鼠腹腔巨噬细胞培养上清分别为158u/ml和126u/ml;小鼠脾脏细胞和胸腺细胞培养上清中IL-6相对较低,分别为79u/ml和16u/ml。此外,本文还对常用饲养细胞及条件培养液在杂交瘤细胞生长中可能起的主要作用进行了讨论。 展开更多
关键词 杂交瘤 饲养细胞 培养液 IL-2
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胚胎干细胞来源的饲养细胞支持自体胚胎干细胞生长 被引量：1
2
作者 施英唐 唐帆 褚建新 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期470-475,共6页
目的探讨小鼠胚胎干细胞(mESCs)来源的饲养细胞是否具备支持自体mESCs未分化生长的能力。方法先诱导mESCs形成类胚体(EB),进一步诱导其分化为成纤维细胞(mEB-dFE),以用作饲养细胞。采用形态学、集落形成率、细胞分化率、免疫细胞化学、... 目的探讨小鼠胚胎干细胞(mESCs)来源的饲养细胞是否具备支持自体mESCs未分化生长的能力。方法先诱导mESCs形成类胚体(EB),进一步诱导其分化为成纤维细胞(mEB-dFE),以用作饲养细胞。采用形态学、集落形成率、细胞分化率、免疫细胞化学、碱性磷酸酶染色和RT-PCR对生长在mEB-dF上的mESCs的未分化特性进行鉴定。采用RT-PCR和诱导mESCs体内外分化方法鉴定mESCs多分化潜能特性。结果从EB三个发育阶段(EB贴壁10、15、20 d)分离出48个mEB-dF系,其中5个(来自15 d的EB)能维持mESCs未分化生长和多潜能性达10代以上。生长在这种饲养层上的mESCs与生长在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)上一样,其特性无明显差异,均表达碱性磷酸酶和特殊的mESCs标记,包括SSEA-1、OCT-4、NANOG,在体外形成EB和体内形成畸胎瘤;其他43个mEB-dF系则不具有这种能力。结论研究不仅为mESCs体外培养提供了一种新的饲养细胞,避免了MEF作饲养细胞的许多不足;而且还提示mESCs可诱导出不同功能的成纤维样细胞,其差异的分子机制值得进一步研究。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎干细胞 类胚体 饲养细胞
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用饲养细胞辅助原代培养豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的研究 被引量：1
3
作者 毛俊峰 刘双珍 +3 位作者 秦文娟 黄瑞尧 李凤云 吴小影 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第8期612-612,共1页
关键词 视网膜MÜLLER细胞 原代培养 饲养细胞 近视眼 豚鼠 腹腔渗出细胞 TGFΒ2 信号因子
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适时应用饲养细胞提高杂交瘤细胞克隆形成率的探索 被引量：1
4
作者 王建六 李文锦 +2 位作者 钱和年 傅天云 韦平 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第2期51-52,共2页
适时应用饲养细胞提高杂交瘤细胞克隆形成率的探索王建六，李文锦，钱和年，傅天云，韦平（北京医科大学人民医院妇癌研究所，北京１０００３４）本文通过改变饲养细胞加人时间及数量，来研究杂交瘤细胞６Ｂｌｌ的克隆化形成率。１材料... 适时应用饲养细胞提高杂交瘤细胞克隆形成率的探索王建六，李文锦，钱和年，傅天云，韦平（北京医科大学人民医院妇癌研究所，北京１０００３４）本文通过改变饲养细胞加人时间及数量，来研究杂交瘤细胞６Ｂｌｌ的克隆化形成率。１材料和方法杂交瘤细胞系６Ｂｌｌ是我室制... 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 克隆 形成率 饲养细胞
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“饲养细胞”在建立恶性疟原虫红内期体外培养中的作用 被引量：1
5
作者 江钢锋 洪佳冬 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1995年第2期131-132,共2页
在建立恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）新分离株体外连续培养的初期，使用小鼠腹腔洗脱细胞（主要是单核巨噬细胞）作为“饲养细胞”。结果表明，在饲养细胞的辅助下，Ｐ．ｆ虫株很快适应体外培养条件，生长发育良好。６周后停用饲养细胞，虫株仍... 在建立恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）新分离株体外连续培养的初期，使用小鼠腹腔洗脱细胞（主要是单核巨噬细胞）作为“饲养细胞”。结果表明，在饲养细胞的辅助下，Ｐ．ｆ虫株很快适应体外培养条件，生长发育良好。６周后停用饲养细胞，虫株仍能继续正常生长繁殖。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 体外培养 饲养细胞
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牙髓干细胞诱导iPS细胞的无饲养细胞培养条件研究 被引量：1
6
作者 颜兴 George T-J Huang +1 位作者 张方明 王松灵 《北京口腔医学》 CAS 2010年第3期143-145,共3页
目的研究适合牙髓干细胞诱导iPS细胞的无饲养细胞培养条件与方法。方法分离牙髓干细胞,慢病毒介导Lin28、Nanog、Oct4和Sox2因子重编程获得iPS细胞。在不同浓度及不同处理时间的基质胶(Matrigel)上传代培养iPS,检验iPS的单细胞生长密度... 目的研究适合牙髓干细胞诱导iPS细胞的无饲养细胞培养条件与方法。方法分离牙髓干细胞,慢病毒介导Lin28、Nanog、Oct4和Sox2因子重编程获得iPS细胞。在不同浓度及不同处理时间的基质胶(Matrigel)上传代培养iPS,检验iPS的单细胞生长密度,比较不同基质胶培养方法对iPS生长的影响。结果 DPSC iPS在60ug/cm2浓度的基质胶上生长密度最高;基质胶覆盖2小时后应用可以获得最好的DPSC iPS生长密度。。结论应用60ug/cm2浓度的基质胶覆盖培养板2小时是DPSC iPS无饲养细胞培养的最佳条件。 展开更多
关键词 诱导多潜能干细胞 牙髓干细胞 无饲养细胞培养 基质胶
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“无饲养细胞”杂交瘤制备技术
7
作者 杨艳艳 张改平 +3 位作者 李青梅 郭军庆 李培庆 袁麦顺 《河南农业科学》 CSCD 1999年第8期31-32,共2页
在３７℃温度下，用４５％ＰＥＧ（ｐＨ７．４）对ＮＳ０瘤细胞和免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠脾脏细胞做１ｍｉｎ融合。细胞融合后，加入１６４０／ＨＡＴ培养基，在不加饲养细胞和预加饲养细胞的两种环境中培养。结果发现融合细胞培养中不加小... 在３７℃温度下，用４５％ＰＥＧ（ｐＨ７．４）对ＮＳ０瘤细胞和免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠脾脏细胞做１ｍｉｎ融合。细胞融合后，加入１６４０／ＨＡＴ培养基，在不加饲养细胞和预加饲养细胞的两种环境中培养。结果发现融合细胞培养中不加小鼠腹腔巨噬细胞，杂交瘤克隆孔形成的量较预加小鼠腹腔巨噬细胞的多。 展开更多
关键词 饲养细胞 杂交瘤 制备 免疫脾细胞 细胞融合
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无饲养细胞无外源因子条件下高克隆密度维持人类胚胎干细胞自身未分化状态(英文)
8
作者 罗树伟 林戈 +3 位作者 孙真 谢平原 刘天成 卢光琇 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1123-1128,共6页
目的:建立人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养体系。方法:比较hESCs克隆种植密度对其无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养的影响,以及克隆种植密度对hESCs培养体系骨形蛋白(bone morp... 目的:建立人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养体系。方法:比较hESCs克隆种植密度对其无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养的影响,以及克隆种植密度对hESCs培养体系骨形蛋白(bone morphology protein,BMP)样诱导活性的影响。结果:在没有外源性细胞因子条件下,高克隆密度(34克隆/cm2)可以维持hESCs处于未分化状态,而低克隆密度不能维持hESCs处于未分化状态。同时,NB体系BMP样诱导活性可以被hESCs克隆种植密度所改变,高hESCs克隆密度时,培养基具有高的BMP样诱导活性。结论:高hESCs克隆种植密度可以改变自身生长的微环境,可以维持自身未分化状态,这为阐明hESCs自身未分化状态机制和简化hESCs无饲养培养体系提供了新的思路。 展开更多
关键词 人类胚胎干细胞 饲养细胞 自分泌
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^(60)Co照射法饲养细胞的制备
9
作者 邹征云 刘宝瑞 《放射免疫学杂志》 CAS 2004年第1期25-27,共3页
目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植... 目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植物血球凝集素 (PHA)等 ,观察照射后第 1天、第 7天及第 1 5天细胞的凋亡情况及活细胞的细胞周期分布情况。结果 :γ射线照射剂量的加大会导致PBMC增殖能力的下降、存活细胞 (Annexin -V-/PI-)的减少、凋亡 (Annexin -V+ /PT-)与死亡 (Annexin -V+ /PT+ )的细胞数增加。结论 :采用60 Co照射法制备饲养细胞时 ,1 展开更多
关键词 ^60Co照射法 饲养细胞 外周血单个核细胞 单克隆抗体 免疫活性细胞 细胞扩增
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饲养细胞用于挽救濒死的珍稀贴壁细胞 被引量：1
10
作者 李利 杨屹 +3 位作者 张宇 邵丽军 谷丽娟 金立杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期136-138,141,共4页
目的挽救濒于死亡的珍稀贴壁细胞。方法将濒于死亡的RINm5F细胞接种到一定量体外培养的小鼠腹腔细胞中,经过一段时间的培养,待RINm5F细胞逐渐长成岛状时,传代并再连续添加2次饲养细胞培养后,传2代,冻存。结果濒于死亡的RINm5F细胞与饲... 目的挽救濒于死亡的珍稀贴壁细胞。方法将濒于死亡的RINm5F细胞接种到一定量体外培养的小鼠腹腔细胞中,经过一段时间的培养,待RINm5F细胞逐渐长成岛状时,传代并再连续添加2次饲养细胞培养后,传2代,冻存。结果濒于死亡的RINm5F细胞与饲养细胞共培养,随着时间的延长,细胞生长速度加快,饲养细胞逐渐死亡,再经2次与饲养细胞共培养,细胞已恢复正常生长,冻存后复苏生长状态良好。结论添加饲养细胞的方法可用于挽救濒于死亡的细胞。 展开更多
关键词 饲养细胞 贴壁细胞 挽救
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不同培养基与饲养细胞组合对多房棘球绦虫体外培养模型的影响 被引量：4
11
作者 韩振阳 邓子 +1 位作者 王泽宇 张示杰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第19期3080-3085,共6页
背景:多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础。D-MEM与RPMI-1640是最适宜用于泡球蚴体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No. CRL-1600)也是常用饲养细胞。目的:构建多房棘球绦虫体外培... 背景:多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础。D-MEM与RPMI-1640是最适宜用于泡球蚴体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No. CRL-1600)也是常用饲养细胞。目的:构建多房棘球绦虫体外培养模型,观察泡球蚴在不同饲养细胞[HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600)]及含有体积分数10%胎牛血清的不同培养基[D-MEM(高/低糖型)与RPMI-1640]下生长情况。方法:预先培养HeLa细胞及大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600),从新疆石河子大学第一附属院实验动物中心提供的感染多房棘球绦虫6个月以上的种鼠体内提取原头节后分别与不同饲养细胞及培养基体外共同培养。实验经石河子大学医学院第一附属医院医学伦理委员会批准,批准号:2015-018-01,批准时间:2017-04-07。实验根据饲养细胞与培养基组合分为6组,每组加入1×10~6饲养细胞与50mL含体积分数10%胎牛血清的培养基及5000个原头节,Ⅰ组:HeLa细胞与1640培养基培养;Ⅱ组:HeLa细胞与D-MEM(高糖型)培养基培养;Ⅲ组:大鼠肝癌细胞与1640培养基培养;Ⅳ组:大鼠肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基培养;Ⅴ组:HeLa细胞与D-MEM(低糖型)培养基培养;Ⅵ组:大鼠肝癌细胞与D-MEM(低糖型)培养基培养,观察泡球蚴原头节的生存、生长和发育,每隔7d计算原头蚴成囊率,使用目镜测微尺测量囊泡平均直径大小。结果与结论:①原头蚴在6种组合中均可长期存活,大部分都形成囊泡,囊泡直径分布在1-6 mm;②培养第56天原头蚴成囊率和囊泡平均直径均为大鼠肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基组效果最佳(P <0.05),成囊率(72.08±1.79)%,囊泡平均直径(3.379±0.199) mm;③囊泡囊液蛋白定量检测结果显示6组囊液蛋白含量均低于体内囊泡,Ⅳ组蛋白含量高于其他5组(P <0.05);④结果证实:同条件下D-MEM(高糖型)培养基囊泡大小与数量优于其他2种培养基。大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600)作为饲养细胞囊泡大小与数量优于HeLa细胞。D-MEM(高糖型)与大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600)共同作用的环境下原头蚴生长发育的成囊率及囊泡大小最佳,可作为体外培养泡球蚴原头蚴获得囊泡的最优选择。 展开更多
关键词 泡球蚴 体外培养 培养基 饲养细胞 囊泡 葡萄糖 囊液 直径 成囊率 蛋白定量
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小鼠腹腔细胞作为人杂交瘤细胞饲养细胞的实验研究 被引量：1
12
作者 聂晶 范永星 赵洪礼 《沈阳部队医药》 1998年第4期373-374,共2页
在人杂变瘤细胞克隆化过程中，常规采用人外周血淋巴细胞(PBL)作为饲养细胞．但因PBL制备比较繁琐，来源有限，给实际工作带来不便。我们试用小鼠腹腔细胞作饲养细胞，并与PBL对比，证明两者对人杂变瘤细胞的克隆化率及用性率没有显著... 在人杂变瘤细胞克隆化过程中，常规采用人外周血淋巴细胞(PBL)作为饲养细胞．但因PBL制备比较繁琐，来源有限，给实际工作带来不便。我们试用小鼠腹腔细胞作饲养细胞，并与PBL对比，证明两者对人杂变瘤细胞的克隆化率及用性率没有显著性差别。现将结果报告如下。 展开更多
关键词 小鼠 腹腔细胞 人杂交瘤细胞 饲养细胞 实验 细胞克隆
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以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞构建上皮细胞植片
13
作者 牟式鲁 姚玉峰 裘文亚 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第7期586-587,共2页
关键词 口腔黏膜上皮细胞 3T3成纤维细胞 饲养细胞 细胞构建 自体结膜 植片 角膜缘干细胞缺乏 兔
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饲养细胞促进人胚脑神经细胞体外扩增的动物实验 被引量：1
14
作者 于丽华 赵书平 《实用医药杂志》 2006年第11期1347-1348,共2页
目的探讨饲养细胞对人胚脑神经细胞体外培养的作用。方法取妊娠12～16周合法人工流产胎儿大脑皮层,用DMEM培养液制备神经细胞悬液。接种于预先制备的饲养细胞、铺有聚L-赖氨酸和没有经过上述处理的培养板上进行原代人胚脑神经细胞培养... 目的探讨饲养细胞对人胚脑神经细胞体外培养的作用。方法取妊娠12～16周合法人工流产胎儿大脑皮层,用DMEM培养液制备神经细胞悬液。接种于预先制备的饲养细胞、铺有聚L-赖氨酸和没有经过上述处理的培养板上进行原代人胚脑神经细胞培养。倒置显微镜下观察神经细胞的生长发育、增殖分化、细胞迁移、形态学变化等,免疫组织化学Streptavidin peroxidase(SP)法鉴定神经细胞。结果饲养细胞组神经细胞贴壁时间早于对照组(P<0．05),神经细胞迁移速度、胞体大小、突起长度均高于对照组(P<0．05)。结论饲养细胞具有促进人胚脑神经细胞贴壁、生长以及迁移的作用。 展开更多
关键词 饲养细胞 人胚脑神经细胞
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利用饲养细胞体外扩增高纯度的效应NK细胞 被引量：2
15
作者 郭振兴 张艳慧 刘绍辉 《同济大学学报（医学版）》 CAS 2019年第2期174-179,共6页
目的比较两类饲养细胞(FC)体外扩增自然杀伤(NK)细胞的效果,鉴定出特定的NK细胞群并进行功能性分析,从而确定最优的FC。方法构建两类FC,分别是第1代FC(FC-000,K562-41BBL)和第2代FC(FC-002,K562-41BBL-mbIL15-mbIL21),分别与人外周血单... 目的比较两类饲养细胞(FC)体外扩增自然杀伤(NK)细胞的效果,鉴定出特定的NK细胞群并进行功能性分析,从而确定最优的FC。方法构建两类FC,分别是第1代FC(FC-000,K562-41BBL)和第2代FC(FC-002,K562-41BBL-mbIL15-mbIL21),分别与人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)共培养14 d,收获细胞,流式细胞术鉴定NK细胞表型,利用实时无标记细胞分析仪检测两类NK细胞对A549肿瘤细胞的杀伤能力。结果培养14 d后,FC-002扩增的NK细胞纯度(93. 5%)高于FC-000扩增的NK细胞(70. 2%)(P<0. 05); FC-002扩增的NK细胞增殖倍数(3 325)高于FC-000扩增的NK细胞增殖倍数(10)(P<0. 05)。两者均促进了具有NKG2D、NKp44、CD69功能性受体的NK细胞群增殖,且FC-002扩增的NK细胞具有更高的肿瘤杀伤能力及干扰素-γ表达能力(P<0. 05)。结论利用FC能够在体外有效地扩增高纯度的NK细胞,并能够选择性扩增具有NKG2D、NKp44、CD69功能性受体的NK细胞群,且第2代FC所扩增的NK细胞对于肿瘤细胞具有更强的杀伤能力,并在NK细胞增殖倍数、纯度上均优于第1代FC。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 体外扩增 饲养细胞 体外杀伤
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饲养细胞在建立恶性疟原虫体外培养中的作用
16
作者 江钢锋 洪佳冬 《广东医药学院学报》 1994年第3期160-161,共2页
饲养细胞在建立恶性疟原虫体外培养中的作用江钢锋，洪佳冬（热带病研究室）关键词疟原虫；体外培养；饲养细胞中图号Ｒ３８２．３恶性疟原虫红内期体外连续培养技术是疟疾研究领域的一大突破。自从该技术创立［１］以来，国内外已相继... 饲养细胞在建立恶性疟原虫体外培养中的作用江钢锋，洪佳冬（热带病研究室）关键词疟原虫；体外培养；饲养细胞中图号Ｒ３８２．３恶性疟原虫红内期体外连续培养技术是疟疾研究领域的一大突破。自从该技术创立［１］以来，国内外已相继成功地分离和建立了许多恶性疟原虫不... 展开更多
关键词 疟原虫 体外培养 饲养细胞 生理 营养 代谢
全文增补中
人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞构建人口腔黏膜上皮细胞片层的研究
17
作者 张明琦 王乐 +3 位作者 孙岩 郑玉强 李娜 王卓实 《沈阳医学院学报》 2023年第2期127-130,共4页
目的:探讨人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞代替鼠源饲养层细胞在体外培养人口腔黏膜上皮细胞的可行性。方法:通过酶消化法从人眼睑组织中分离成纤维细胞传代培养,取P5代成纤维细胞通过丝裂霉素C方法制备饲养层细胞,将其制备... 目的:探讨人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞代替鼠源饲养层细胞在体外培养人口腔黏膜上皮细胞的可行性。方法:通过酶消化法从人眼睑组织中分离成纤维细胞传代培养,取P5代成纤维细胞通过丝裂霉素C方法制备饲养层细胞,将其制备成的饲养层细胞用来培养商品化人口腔黏膜上皮细胞。通过罗丹明染色观察其细胞克隆形成率;HE染色观察细胞片层的结构;免疫荧光检测特征蛋白P63、β1-integrin的表达。结果:人眼睑组织来源的成纤维细胞在体外具有较强的增殖能力,高表达成纤维细胞特异性标志性蛋白CD90,培养的人口腔黏膜上皮细胞呈克隆样生长,细胞克隆形成率约为2.2%,并将其构建成3~4层口腔黏膜细胞片层,且高表达上皮细胞标志物P63及β1-integrin。结论:人眼睑组织来源的成纤维细胞可以作为饲养层细胞构建人口腔黏膜上皮细胞片层,为临床应用提供一种新的人源化饲养层工具细胞。 展开更多
关键词 人口腔黏膜上皮细胞 成纤维细胞 饲养层细胞 眼睑组织
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小鼠饲养层细胞制备与小鼠胚胎干细胞SF1-G的培养
18
作者 刘峰 雷闽湘 陈慧玲 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期4303-4308,共6页
背景:小鼠胚胎干细胞系SF1-G是由雌性C57BL/6小鼠与雄性M.spretus小鼠交配后,取桑葚胚期胚胎在STO饲养层细胞上分离培养获得,STO细胞较昂贵,而由小鼠胚胎成纤维细胞制备的饲养层细胞不仅取材容易,而且形成胚胎干胞的克隆率、维持胚胎干... 背景:小鼠胚胎干细胞系SF1-G是由雌性C57BL/6小鼠与雄性M.spretus小鼠交配后,取桑葚胚期胚胎在STO饲养层细胞上分离培养获得,STO细胞较昂贵,而由小鼠胚胎成纤维细胞制备的饲养层细胞不仅取材容易,而且形成胚胎干胞的克隆率、维持胚胎干细胞正常核型的能力均比STO细胞要好一些,因此,建立一种适宜SF1-G细胞扩增的培养体系,保持其未分化状态生长是充分利用胚胎干细胞资源的前提。目的:建立有效的小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及胚胎干细胞饲养层细胞制备体系;以建立有效的小鼠胚胎干细胞(SF1-G细胞)扩增培养体系。方法:从孕12.5～14.5d的ICR小鼠分离培养原代小鼠胚胎成纤维细胞;取3～5代的小鼠胚胎成纤维细胞,以丝裂霉素C抑制其增殖能力制备饲养层细胞;在饲养层细胞上增殖培养SF1-G细胞;染色体G显带分析法检测SF1-G细胞核型,SF1-G细胞碱性磷酸酶染色和RT-PCR检测Oct4、Nanog基因表达。结果与结论:从孕鼠胚胎有效分离到小鼠胚胎成纤维细胞,以3～5代细胞制备的饲养层细胞能够支持胚胎干细胞SF1-G呈边界清晰的克隆样生长。染色体核型检测SF1-G保持正常核型,碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性。实验建立了有效的小鼠胚胎成纤维细胞分离培养体系,并制备供胚胎干细胞进行增殖培养饲养层细胞体系,能够在实验室对SF1-G细胞保持正常未分化状态培养。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 饲养细胞 胚胎干细胞 细胞培养
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饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素 被引量：6
19
作者 王颖 陈莉娜 +1 位作者 张艳艳 关伟军 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第11期39-42,共4页
胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一,它与遗传工程,转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实... 胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一,它与遗传工程,转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述,介绍了饲养层细胞的分类,并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 饲养层细胞 分离培养
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人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究 被引量：10
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作者 刘峰 徐永胜 +2 位作者 俞海燕 王薇 张纯 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第4期271-276,I0009,共7页
目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长... 目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体。结论人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 人脐带间充质干细胞 饲养层细胞 临床应用
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