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香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备
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作者 谭老喜 王洪星 +5 位作者 张雨良 王健华 章绍延 周朋 余乃通 刘志昕 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第12期2246-2251,共6页
香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2... 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒haikou2分离物 BBTVDNA2 原核表达 抗血清制备
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香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆及其2个组群分离物的比较分析
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作者 黄永红 梅眉 +4 位作者 曾继吾 周碧容 吴元立 夏瑞 易干军 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第4期695-701,共7页
对香蕉束顶病毒(BBTV)广州分离物MGH DNA组分6全序列进行了克隆及序列分析。并对来自广州、海南、台湾、澳大利亚及印度的BBTV组分6进行了分析,结果表明:BBTV组分6都含有CR-SL(stem-loopcommon regions),CR-M(major common regions)结... 对香蕉束顶病毒(BBTV)广州分离物MGH DNA组分6全序列进行了克隆及序列分析。并对来自广州、海南、台湾、澳大利亚及印度的BBTV组分6进行了分析,结果表明:BBTV组分6都含有CR-SL(stem-loopcommon regions),CR-M(major common regions)结构等典型的特征序列。BBTV组分6的核苷酸全序列、开放阅读框(ORF)核苷酸、CR-M核苷酸序列及其氨基酸序列系统进化树结果显示,BBTV分离物可分为2个组群:亚洲组和南太平洋组。CR-M结构在2个组群间有明显的差异,南太平洋组分离物的CR-M结构中有一段不完全保守的16个核苷酸的重复序列,而在亚洲组的分离物中这个序列并不重复。对BBTV组分6蛋白质进行了二级结构预测和理化性质分析发现,这2个类群蛋白质的二级结构有差异,但是理化性质无明显差异。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 DNA组分6 克隆 分离
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香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA 4编码区功能研究 被引量:5
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作者 孙德俊 孙卉 +3 位作者 魏红艳 樊小雪 蔡文启 田颖川 《自然科学进展》 北大核心 2002年第7期708-712,共5页
利用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(BBTV-ZZ)DNA 4编码区,序列分析结果表明该编码区由351个核苷酸组成,推测其编码是一个含116个氨基酸的蛋白质,利用植物双元载体pBin438构建了含有BBTV-ZZ DNA 4编码区的植物组成型表达载体p... 利用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(BBTV-ZZ)DNA 4编码区,序列分析结果表明该编码区由351个核苷酸组成,推测其编码是一个含116个氨基酸的蛋白质,利用植物双元载体pBin438构建了含有BBTV-ZZ DNA 4编码区的植物组成型表达载体pBBTV-4B,经农杆菌介导转化了三生烟(Nicotiana tabacum Xanthi nc),在防虫条件下,将运动缺陷型CMV-Fny突变株(CMV-Fny-△MP)人工接种到转基因植株下部叶片上,12d后,在转基因植株的非接种叶上显现出不同程度的系统侵染症状,间接异种动物双抗体夹心酶联免疫吸附方法(DAS-ELISA)检测结果显示在转基因植株的上部非接种叶中有CMV-Fny的积累,而非转基因对照植株组的上部非接种叶中始终没有显现系统侵染症状,DAS-ELISA检测也未见CMV-Fny的积累,这些实验结果表明转基因植株能够支持CMV-Fny-△Mp从细胞到细胞和长距离运动并形成系统侵染症状,由此推测BBTV-ZZ DNA 4编码的蛋白质可能具有运动蛋白功能。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 中国漳州分离 DNA4编码区 运动蛋白 CMV-Fny-△Mp PCR方法 表达载体
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香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA4非编码区启动子活性的研究 被引量:1
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作者 魏红艳 孙德俊 +2 位作者 李云 孙卉 蔡文启 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期34-37,共4页
应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBI... 应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBIA 130 4的gfp::gus基因上游 ,替代椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S) ,得到重组质粒pTA2、pC2 6和pC45 .通过Agroinfiltration法 ,将含pTA2、pC2 6、pC45和pCAMBIA 130 4的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtu mefaciens)注射进烟草 (NicotianatabacumL .cv .XanthiNC)叶片 ,进行 β 葡糖苷酸酶 (GUS)和绿荧光蛋白 (GFP)含量的瞬间表达分析 .含有pTA2、pC2 6、pC45、pCAMBIA 130 4和未注射的烟草叶片其GUS活性分别为 1 0 0 7、0 85 2、0 939、2 0 6 9和 0 0 2 1pmol·MU (μg·min) ;间接酶连免疫试验 (ELISA)结果表明每毫克总蛋白中的GFP于 490处的吸收值 (A490 )分别为 89 5 77、6 5 184、72 0 96、10 0 4 40和 3 2 87.以上表明Po1、Po2和Po3具有较强的启动子活性 .此外 ,转基因烟草的GUS组织化学定位检测试验进一步表明Po1、Po2和Po3具有维管组织特异性 . 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒中国漳州分离 DNA 4 启动子活性 GUS GFP
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