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大白菜的马铃薯蛋白酶抑制剂基因转化及抗菜青虫性的鉴定 被引量：3
1
作者 张军杰 刘凡 +3 位作者 罗晨 姚磊 赵泓 黄玉碧 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期193-198,共6页
以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, ... 以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, 证实了嵌合体的存在,并通过此方法来消除嵌合体。获得的转基因植株经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实,目的基因已经整合入植物基因组中。对菜青虫(Pieris rapae L.) 进行了转基因大白菜叶片的连续离体饲喂,结果表明:受试的转基因大白菜对菜青虫的生长发育有较明显的抑制作用。 展开更多
关键词 大白菜 马铃薯蛋白酶抑制剂基因 基因转化 菜青虫 抗性鉴定
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马铃薯蛋白酶抑制剂酶解产物超滤组分的抗氧化活性与结构特征
2
作者 李苏红 赵起越 +4 位作者 于思琦 杨慧 邹沅辛 陈晨 李拖平 《中国粮油学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期134-143,共10页
超声波联合蛋白酶K酶解马铃薯蛋白酶抑制剂,研究酶解产物(PPIHs)的理化性质、抗氧化稳定性及其超滤后各组分的抗氧化活性及结构特性。结果表明,超声联合酶解处理后,PPIHs的溶解度和乳化及乳化稳定性增强;抗氧化稳定性在80℃以下较好,超... 超声波联合蛋白酶K酶解马铃薯蛋白酶抑制剂,研究酶解产物(PPIHs)的理化性质、抗氧化稳定性及其超滤后各组分的抗氧化活性及结构特性。结果表明,超声联合酶解处理后,PPIHs的溶解度和乳化及乳化稳定性增强;抗氧化稳定性在80℃以下较好,超过80℃有下降趋势;在酸性或非碱性环境下,除对ABTS自由基的抗氧化稳定性较差,PPIHs对其他自由基的抗氧化稳定性较好。PPIHs经过超滤得到PPIHs-Ⅰ(>10 ku)、PPIHs-Ⅱ(3~10 ku)和PPIHs-Ⅲ(<3 ku)3种超滤产物,PPIHs-I对ABTS自由基的清除能力最强,Zeta电位的绝对值显著增大;PPIHs-II的抑制油脂氧化以及对-OH和DPPH自由基的清除能力较强,粒径显著减小。紫外吸收光谱、红外光谱和荧光光谱表明,酶解产物的结构发生改变,如无规卷曲和β-转角含量提高,β-折叠和α-螺旋减少,疏水性增强等,进而改善其抗氧化活性。 展开更多
关键词 马铃薯蛋白酶抑制剂 酶解产物 结构特性 抗氧化活性
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马铃薯蛋白酶抑制剂-Ⅱ基因在转基因水稻中的遗传及表达 被引量：7
3
作者 程仲毅 薛庆中 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期603-609,共7页
以水稻光敏不育系浙农大 115 (ZAU11S)和 3个转基因品系杂交 ,研究了其F2 群体中bar、pinII基因的遗传及其表达行为。通过涂抹除草剂Basta,进行PCR分析和测定胰蛋白酶被抑制活性 ,发现F2 代bar和pinII基因按孟德尔方式遗传并紧密连锁 ,... 以水稻光敏不育系浙农大 115 (ZAU11S)和 3个转基因品系杂交 ,研究了其F2 群体中bar、pinII基因的遗传及其表达行为。通过涂抹除草剂Basta,进行PCR分析和测定胰蛋白酶被抑制活性 ,发现F2 代bar和pinII基因按孟德尔方式遗传并紧密连锁 ,但在部分植株中bar基因表达不充分 ;作为创伤诱导的pinII基因具有明显的时空表达特性 ,其诱导信号传导不仅向上 ,也向下传导 ;不同水稻转基因系中pinII基因的诱导表达不完全一致。 展开更多
关键词 马铃薯蛋白酶抑制剂—Ⅱ基因 转基因水稻 遗传表达 光敏不育系 孟德尔方式
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不同启动子驱动下马铃薯蛋白酶抑制剂PinⅡ转基因水稻的遗传、表达和对粘虫抗性分析 被引量：4
4
作者 武亮 卜庆云 +2 位作者 周明 杨世湖 万建民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期261-267,共7页
以不同启动子驱动的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因(PinⅡ-2x,PinⅡ-4x)转基因水稻为材料,经潮霉素抗性、PCR和Southern blot等检测对转基因水稻后代进行了遗传分析。结果显示:外源基因在68.4%的转基因植株中符合孟德尔遗传模式,单拷贝植株率... 以不同启动子驱动的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因(PinⅡ-2x,PinⅡ-4x)转基因水稻为材料,经潮霉素抗性、PCR和Southern blot等检测对转基因水稻后代进行了遗传分析。结果显示:外源基因在68.4%的转基因植株中符合孟德尔遗传模式,单拷贝植株率为63.6%。转基因植株后代的PinⅡ蛋白活性测定结果表明:ActI和Ubi驱动的PinⅡ-2x转基因水稻植株中,每克鲜叶片的PinⅡ蛋白含量为160μg和176μg,而由PIN5′驱动的PinⅡ-4x为104μg,对照水稻仅为20μg。ActI和Ubi驱动的PinⅡ表达产物对胰蛋白酶活性抑制程度分别达到37.7%和43.1%,明显高于PinⅡ自身启动子PIN5′(29.2%)。叶片饲养粘虫幼虫的实验表明:转基因植株叶片对粘虫有抗性,但抗性达不到显著水平,且启动子效率、PinⅡ表达量与抗粘虫性之间也没有相关性。 展开更多
关键词 马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ 遗传 活性 粘虫
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水稻巯基蛋白酶抑制剂基因导入马铃薯和茄子 被引量：16
5
作者 胡晓琴 贾士荣 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期65-69,共5页
在优化长茄下胚轴外植体器官发生体系、芽分化频率达８０％～９５％的基础上，以农杆菌为介导，从不同苗龄外植体、不同菌液浓度和侵染时间、不同共培养时间等方面对长茄的遗传转化体系进行了优化。优化后ＫａｎＲ芽的分化频率可达７．... 在优化长茄下胚轴外植体器官发生体系、芽分化频率达８０％～９５％的基础上，以农杆菌为介导，从不同苗龄外植体、不同菌液浓度和侵染时间、不同共培养时间等方面对长茄的遗传转化体系进行了优化。优化后ＫａｎＲ芽的分化频率可达７．３％。将水稻巯基蛋白酶抑制剂基因（Ｏｒｙｚａｃｙｓｔａｔｉｎ，ＯＣ－Ⅰ）导入长茄和马铃薯品种Ｄｅｓｉｒｅ，分别获得ＫａｎＲ植株１７株和３１株。对部分ＫａｎＲ植株进行ＰＣＲ扩增、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，结果证明了外源基因的整合。总的转化频率达１．９％。 展开更多
关键词 马铃薯 茄子 遗传转化 转基因植物 蛋白酶抑制剂
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二倍体马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的克隆、序列分析及表达载体的构建 被引量：4
6
作者 卜庆云 武亮 +1 位作者 杨世湖 万建民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期417-422,共6页
根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(Solanum.tuberosum)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因序列,用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101(Solanum.phurejia)cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的cDNA和DNA,命名为PINⅡ2x。测序表... 根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(Solanum.tuberosum)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因序列,用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101(Solanum.phurejia)cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的cDNA和DNA,命名为PINⅡ2x。测序表明,PINⅡ2x基因组DNA全长580bp,含有一个115bp的内含子,cDNA有462bp(除去终止密码子)。推测的PINⅡ2x分子量是16.6kD,等电点6.08。与其他马铃薯蛋白抑制剂Ⅱ同源性比较表明,核苷酸同源性高达88%;推测的氨基酸序列同源性为93%,并具有相同的活性中心。RT PCR表明,PINⅡ2x的mRNA在叶片中具有强烈的伤害诱导表达特性。同时,构建了分别以水稻ActⅠ启动子和玉米Ubi启动子驱动PINⅡ2x基因的双元载体。 展开更多
关键词 二倍体马铃薯(Solanum.phurejia) 蛋白酶抑制剂Ⅱ 伤害诱导
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马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因转化烟草研究 被引量：2
7
作者 王永胜 扈廷茂 +2 位作者 刘明秋 李丽莉 孔威 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期129-132,共4页
将马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因由重组质粒 pAPI189中亚克隆到双元表达载体 pGA643的XbaI和KpnI位点之间 ,构建成高效表达重组质粒pGAPI3。三亲融合法将其转移至农杆菌LB4404。通过叶盘法利用此融合后的含有目的基因的农杆菌转化烟... 将马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因由重组质粒 pAPI189中亚克隆到双元表达载体 pGA643的XbaI和KpnI位点之间 ,构建成高效表达重组质粒pGAPI3。三亲融合法将其转移至农杆菌LB4404。通过叶盘法利用此融合后的含有目的基因的农杆菌转化烟草叶圆片 ,在含有Km的培养基上筛选抗性芽。将抗性芽接种到生根培养基至长成完整植株后再移栽到土质中以获得转基因植株。通过目的基因的特异引物进行PCR检测以及目的基因的片段为探针进行South ern杂交检测 ,证实已获得马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的转基因烟草植株。 展开更多
关键词 马铃薯 天冬氨酸蛋白酶抑制剂 转基因烟草 研究
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马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PCPI)在马铃薯晚疫病抗性中的功能表征研究 被引量：1
8
作者 史伟 韦献雅 +2 位作者 付绍宏 阳翠 陈志国 《种子》 北大核心 2019年第11期108-112,共5页
由于马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PCPI)构造载体双链RNA在疫霉抗性马铃薯品种中薯5号中瞬时表达,PCPI转录减少了93.94%。PCPI的沉默导致了病变尺寸和水浸的显著增长,表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂能在限制病变扩张中发挥作用。本研究通... 由于马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PCPI)构造载体双链RNA在疫霉抗性马铃薯品种中薯5号中瞬时表达,PCPI转录减少了93.94%。PCPI的沉默导致了病变尺寸和水浸的显著增长,表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂能在限制病变扩张中发挥作用。本研究通过农杆菌渗入法生产了针对PCPI用于测试在马铃薯中获得瞬态基因沉默可能性的dsRNA构造,结果显示:在马铃薯植株叶片上的构造导致PCPI的下调和相应转录积累的降低;沉默的马铃薯基因编码了马铃薯晚疫病的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,用以抵抗中薯5号品种破裂的阻力。该研究可用于生产稳定的敏感基因型的抗性转基因植物。 展开更多
关键词 马铃薯 RNA干扰 晚疫病 农杆菌渗入法 半胱氨酸蛋白酶抑制剂
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小麦半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的鉴定与表达分析
9
作者 范永胜 程相杰 +2 位作者 董彦琪 马华平 蒋志凯 《种子》 北大核心 2023年第3期20-29,共10页
以小麦品种中国春的基因组为参考序列,利用Hummer search技术在小麦全基因组水平上对小麦TaCYS家族基因进行了鉴定。对TaCYS家族基因的进化关系、基因结构、保守基序列、顺式作用元件等进行了分析。结果表明,系统进化树分析将TaCYS分为A... 以小麦品种中国春的基因组为参考序列,利用Hummer search技术在小麦全基因组水平上对小麦TaCYS家族基因进行了鉴定。对TaCYS家族基因的进化关系、基因结构、保守基序列、顺式作用元件等进行了分析。结果表明,系统进化树分析将TaCYS分为A、B、C三类且同组的TaCYS的基因结构与motif分布相对保守。染色体定位显示,TaCYS位于除chr 6 A、chr 5 B外的19条染色体上。通过分析启动子区域的顺式作用元件,推测TaCYS基因的表达可能受到光照、温度、激素等因素的调控。对小麦转录组数据分析显示,大部分A类的TaCYS基因在小麦不同时期的根、叶、穗、粒中均表达,大部分B类与C类的TaCYS基因只在生殖发育时期的籽粒中表达。TaCYS基因在抵抗不同营养型真菌入侵时可能具有专一性,TaCYS35-D、TaCYS37-D能激活PTI反应,对生物胁迫的反应更为强烈。 展开更多
关键词 小麦 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 生物胁迫 非生物胁迫 基因表达
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马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析
10
作者 王永胜 刘中大 +1 位作者 施一燊 扈廷茂 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1996年第5期670-674,共5页
以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除... 以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子． 展开更多
关键词 抗虫性育种 天冬氨酸 蛋白酶抑制剂 基因结构
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马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5′上游调控区的分离和序列分析
11
作者 刘中大 扈廷茂 王永胜 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CSCD 1996年第4期573-576,共4页
利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．Ｄ... 利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５′上游区的插入物的核苷酸序列．从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ．此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的上游区相比较在序列和ＴＡＴＡ及ＣＡＡＴ盒的位置上有着很大的不同． 展开更多
关键词 马铃薯 天冬氨酸蛋白酶 抑制剂 基因表达调控
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马铃薯汁水中粗蛋白及其蛋白酶抑制剂性质的初步研究 被引量：2
12
作者 李国明 吴娜 +4 位作者 周明 孙慧 姜忠杰 王艳丽 刘凌 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2013年第1期58-61,共4页
以马铃薯汁水中分离的粗蛋白和蛋白酶抑制剂为材料,研究了其理化性质和初步抗肿瘤活性。结果显示,粗蛋白具有优良的溶解性、乳化性、起泡性和泡沫稳定性,它与蛋白酶抑制剂在高浓度时对B16黑色素瘤细胞的抑制率分别为54%和45%。
关键词 马铃薯粗蛋白 马铃薯蛋白酶抑制剂 理化性质 B16黑色素瘤细胞
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马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂与DNA的相互作用及抗氧化作用 被引量：1
13
作者 孙莹 田亚平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期435-439,共5页
从马铃薯中纯化一种天冬氨酸蛋白酶抑制剂(PPI)并对其与DNA的相互作用及抗氧化作用进行研究。以溴化乙啶作为探针,利用荧光法在初步筛选抗癌药物上的应用,首次对PPI与DNA的相互作用进行了研究;利用二苯代苦味酰基自由基体系、H2O2/Fe2+... 从马铃薯中纯化一种天冬氨酸蛋白酶抑制剂(PPI)并对其与DNA的相互作用及抗氧化作用进行研究。以溴化乙啶作为探针,利用荧光法在初步筛选抗癌药物上的应用,首次对PPI与DNA的相互作用进行了研究;利用二苯代苦味酰基自由基体系、H2O2/Fe2+产生的羟基自由基体系、超氧阴离子自由基体系对PPI的体外清除自由基的能力进行研究,结果表明PPI具有一定体外抗氧化活性且从与DNA作用的角度分析可能具有抗癌效果。 展开更多
关键词 马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂 荧光谱 抗癌活性 抗氧化活性
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马铃薯胰蛋白酶抑制剂的抑菌活性 被引量：5
14
作者 李琪孟 罗志刚 李小林 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第12期43-51,共9页
本研究探讨了马铃薯胰蛋白酶抑制剂(PTI)抑菌活性及其抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径,微量二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),以此评价PTI的抑菌性。通过扫描电镜观察并测定胞膜通透性、胞膜完整性、胞内... 本研究探讨了马铃薯胰蛋白酶抑制剂(PTI)抑菌活性及其抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径,微量二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),以此评价PTI的抑菌性。通过扫描电镜观察并测定胞膜通透性、胞膜完整性、胞内活性氧含量及对细菌蛋白酶的抑制率等实验,探讨了PTI的抑菌机理。结果表明:PTI对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和铜绿假单胞菌有较明显的抑制作用,其抑菌圈直径分别为12.56 mm、12.35 mm和11.76 mm,MIC为1.88~3.75 mg/mL,MBC均为3.75 mg/mL。PTI破坏了菌体细胞的形态,导致菌悬液中相对电导率升高和核酸的泄漏,影响了细菌的膜通透性;通过荧光显微镜观察,1 MIC的PTI使菌体胞膜的完整性遭到破坏并促进胞内ROS的产生,造成了菌体氧化损伤;PTI对菌体蛋白酶的活性表现出一定的抑制作用。通过实验得出PTI可能通过这种多靶点协同增效作用达到其抑菌效果。 展开更多
关键词 马铃薯胰蛋白酶抑制剂 抑菌 细胞膜 抑菌机理
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转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因抗虫甘蓝植株的获得 被引量：26
15
作者 方宏筠 李大力 +3 位作者 王关林 李英慧 朱祯 李向辉 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1997年第10期940-945,共6页
利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再... 利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再生植株中得到有效表达。对转化植株进行Southern blot分子杂交实验进一步证明CpTI基因已整合到甘蓝的基因组。实验室内的叶片离体饲虫及盆栽饲虫试验表明,转基因甘蓝对菜青虫具有一定抗性。实验中还观察到,采用愈伤组织分化途径可以获得较高的转化频率,但嵌合体较多;而直接分芽的途径转化率低,但嵌合体较少。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶 抑制剂基因 转基因植株 抗虫
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根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种 被引量：42
16
作者 师校欣 王斌 +2 位作者 杜国强 翁曼丽 高仪 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期282-284,共3页
研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证... 研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。 展开更多
关键词 苹果 抗中性 遗传转化 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探 被引量：19
17
作者 高越峰 朱祯 +2 位作者 朱玉 肖桂芳 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第9期5-9,共5页
从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源... 从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为99．5％和98．2％。由此，构建了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体pBinSKTI。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获得的转基因烟草再生植株经抗虫测试表明：与对照烟草相比，具有明显的抗棉铃虫能力。 展开更多
关键词 大豆胰蛋白酶 抑制剂 抗虫基因 转基因烟草
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慈姑蛋白酶抑制剂基因转化小白菜获抗虫转基因植株 被引量：28
18
作者 张智奇 周音 +7 位作者 钟维瑾 张建军 殷丽青 陈全庆 龚蓁蓁 谢伟军 叶俊强 邹振 《上海农业学报》 CSCD 1999年第4期4-9,共6页
通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的... 通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的抗生素选用Ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，浓度为３００～５００ ｍ ｇ·Ｌ－ １。小白菜带柄子叶被农杆菌感染后，抗性芽的诱导频率为０．２％ ～２．０％ 。加入适量的ＡｇＮＯ３ 不仅可以抑制过度生长的农杆菌，还可以使抗性芽的诱导频率约提高到５％ 。试验获得转基因植株９７ 株。其中８１ 株ＰＣＲ 检测为阳性。部分转基因植株经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 及ＲＴＰＣＲ 的进一步分子检测分析，证明ＡＰＩ基因已被整合进小白菜植株的基因组中。转基因小白菜的叶片离体饲虫初步试验结果表明：对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用，其幼虫摄食转基因植株叶片后，平均体重、体长均分别比对照（摄食非转基因植株叶片）减轻和短小，且约有２７．８％ 的幼虫不能正常羽化，而对照全部正常羽化。 展开更多
关键词 小白菜 慈姑蛋白酶 抑制剂 抗虫性 转基因植株
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用 被引量：44
19
作者 高越峰 朱祯 +3 位作者 肖桂芳 朱玉 吴茜 李向辉 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第5期405-411,共7页
大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ，然后反转录成单链ｃＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑... 大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ，然后反转录成单链ｃＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）的ＳｍａⅠ位点上。序列分析表明：克隆片段大小为６６３ｂｐ，包含了基因完整的编码序列。编码多肽由２１７个氨基酸组成，其中包括Ｎ端２５个氨基酸组成的信号肽序列，１８１个氨基酸组成的成熟蛋白序列和Ｃ端１１个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体，用于烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）等作物的转化。利用棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）对经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试，结果表明，转基因烟草和对照烟草相比，具有明显的抗虫能力。 展开更多
关键词 大豆 胰蛋白酶抑制剂 抗虫 转基因烟草 基因工程
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豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)抗虫转基因新疆杨的获得 被引量：16
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作者 诸葛强 王婕琛 +4 位作者 陈英 伍宁丰 黄敏仁 范云六 王明庥 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第4期491-496,共6页
利用根癌农杆菌介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入新疆杨 (Populusal bavar pyramidalis) ,经筛选获得了大量转基因植株。对转基因植株经PCR鉴定、PCR Southern和点杂交分子检测结果证实CpTI基因已整合进杨树基因... 利用根癌农杆菌介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入新疆杨 (Populusal bavar pyramidalis) ,经筛选获得了大量转基因植株。对转基因植株经PCR鉴定、PCR Southern和点杂交分子检测结果证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。部分转基因植株的饲虫实验表明 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 抗虫基因 新疆杨 转基因 根癌农杆菌 CPTI基因
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