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补肾痹通方联合骨髓间充质干细胞对损伤软骨细胞的保护机制及SOX9、MMP-13表达的影响
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作者 易林 向文远 +4 位作者 张文豪 石正誉 热米拉·艾买提 邓迎杰 方锐 《陕西中医》 CAS 2024年第6期728-732,739,共6页
目的:探讨补肾痹通方(BSBT)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对白介素(IL)-1β诱导的损伤软骨细胞的保护机制及性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达的影响。方法:使用10 ng/ml的IL-1β建立损伤软骨细胞模型,实验分为对... 目的:探讨补肾痹通方(BSBT)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对白介素(IL)-1β诱导的损伤软骨细胞的保护机制及性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达的影响。方法:使用10 ng/ml的IL-1β建立损伤软骨细胞模型,实验分为对照组、模型组(IL-1β)、中药组(IL-1β+BSBT)、干细胞组(IL-1β+BMSCs)和联合组(IL-1β+BSBT+BMSCs);CCK-8法检测各组软骨细胞增殖情况;RT-qPCR法和Western blot法分别检测软骨细胞内SOX9、MMP-13、Ⅱ型胶原α1重组蛋白(COL2A1)、IL-10的基因和蛋白表达;ELISA检测各组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的水平。结果:与模型组比较,各组软骨细胞活性显著增强(P<0.01),软骨细胞中的SOX9、COL2A1、IL-10的基因和蛋白水平显著升高(P<0.01),MMP-13的基因和蛋白水平明显降低(P<0.01),软骨细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含量显著降低(P<0.01),IGF-1、bFGF的水平升高(P<0.01),其中联合组变化最明显(P<0.05)。结论:BSBT联合BMSCs可有效保护损伤软骨细胞,其机制可能是通过上调SOX9,下调MMP-13,抑制炎症,改善软骨细胞微环境,促进关节软骨的修复与再生。 展开更多
关键词 骨关节炎 补肾痹通方 骨髓干细胞 软骨细胞 性别决定区Y框蛋白9 金属蛋白酶13
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SDF-1对骨髓间充质干细胞迁移和细胞外基质形成的影响
2
作者 陈禹江 陈欣欣 +1 位作者 狄静怿 陈文霞 《右江民族医学院学报》 2024年第3期289-294,共6页
目的探讨基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移、胶原RNA表达及细胞膜片细胞外基质表达的影响。方法CCK-8和Transwell细胞迁移实验观察SDF-1对... 目的探讨基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移、胶原RNA表达及细胞膜片细胞外基质表达的影响。方法CCK-8和Transwell细胞迁移实验观察SDF-1对BMSCs增殖和迁移的影响;实时荧光定量PCR检测BMSCs胶原RNA的表达水平;蛋白质印迹法检测BMSCs细胞膜片胶原蛋白的表达水平;酶联免疫吸附试验检测BMSCs细胞膜片培养基上清透明质酸(HA)的表达水平。结果SDF-1趋化BMSCs迁移作用的强度与浓度相关,对细胞的增殖无明显影响;SDF-1降低BMSCsⅠ型胶原与Ⅲ型胶原RNA和蛋白相对表达量的比值,并显著升高BMSCs细胞膜片透明质酸表达水平(P<0.05)。结论SDF-1在适宜的浓度范围内,可显著促进BMSCs的迁移,降低Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原RNA和蛋白相对表达量的比值,并可提高透明质酸的表达水平。 展开更多
关键词 细胞衍生因子 骨髓干细胞 细胞归巢 胶原 透明
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SDF-1表达升高促进骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移减轻哮喘大鼠气道炎症 被引量:1
3
作者 朱慧志 王坤 +2 位作者 朱舜之 王大伟 刘向国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期213-219,共7页
目的 观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法 取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成... 目的 观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法 取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成当天由尾静脉注射1 mL 106个BMSC。采用HE染色观察肺组织病理形态变化;Wright-Giemsa染色,光镜下计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种炎细胞数量;ELISA检测BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量;反转录PCR检测肺组织中SDF-1、信号转导子与转录激活子6(STAT6)的mRNA表达;免疫荧光细胞化学染色检测支气管上皮细胞中SDF-1的蛋白表达;Western blot法检测肺组织SDF-1、STAT6蛋白水平。结果 与对照组相比,模型组BALF中炎细胞计数及IL-4、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量显著升高;肺组织SDF-1、STAT6 mRNA和蛋白表达量显著升高;支气管上皮细胞SDF-1表达明显升高。与模型组相比,BMSC组BALF中炎细胞数目及炎性细胞因子含量均减少;肺组织STAT6 mRNA和蛋白表达降低,SDF-1基因表达量有所升高;支气管上皮细胞SDF-1蛋白表达增加。结论 哮喘炎症过程中,受损部位的趋化因子SDF-1的表达升高,并促进BMSC向哮喘大鼠肺组织迁移。BMSC通过归巢至受损肺组织发挥调节Th1细胞/Th2细胞免疫失衡的作用,从而抑制哮喘气道炎症。 展开更多
关键词 哮喘 骨髓干细胞(bmsc) 细胞衍生因子1(SDF-1) 气道炎症
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麝香含药血清促进骨髓间充质干细胞迁移及其机制
4
作者 李应福 谢兴文 +1 位作者 李宁 施彦龙 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期478-483,共6页
目的探讨麝香含药血清对体外骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组,制备含药血清,另设空白对照组。15只SD大鼠,分离培养BMSCs,将第3代BMSCs通... 目的探讨麝香含药血清对体外骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组,制备含药血清,另设空白对照组。15只SD大鼠,分离培养BMSCs,将第3代BMSCs通过形态学、表型鉴定、成骨及成脂诱导后鉴定。采用高、中、低组(16.8、8.4、4.2μL/100 g)麝香含药血清干预BMSCs,培养不同时间,MTT法检测细胞增殖情况;Transwell实验检测麝香含药血清及蛋白激酶C(PKC)信号通路阻断剂(GF109203X)干预对BMSCs体外迁移的影响。结果大鼠BMSCs贴壁生长,排列整齐规则,细胞活力好;表型鉴定显示CD44、CD90阳性表达,CD45、CD34阴性表达;可分化为成骨、成脂细胞。不同浓度麝香组在不同时间点的BMSCs增殖率均高于空白对照组(P<0.05);低浓度麝香组(4.2μL/100 g)在24、48、72 h的BMSCs迁移数量较对照组明显增加(P<0.05),低浓度麝香组+阻断剂(GF109203X)组的不同时间点的迁移数量明显减少,但各时间点的组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论麝香含药血清可能通过活化PKC信号通路促进BMSCs迁移。 展开更多
关键词 麝香 骨髓干细胞(bmscs) 信号通路 增殖 机制
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小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究
5
作者 钟家帅 冯玉梅 《天津医药》 CAS 2024年第2期129-135,共7页
目的探讨小鼠骨髓源性间充质干细胞(BM-MSCs)和脂肪源性间充质干细胞(AD-MSCs)的定向分化能力。方法从C57BL/6J小鼠股骨骨髓和腹股沟白色脂肪组织中分别分离和培养BM-MSCs和AD-MSCs,分别使用成骨、成软骨和成脂诱导分化培养基诱导两种... 目的探讨小鼠骨髓源性间充质干细胞(BM-MSCs)和脂肪源性间充质干细胞(AD-MSCs)的定向分化能力。方法从C57BL/6J小鼠股骨骨髓和腹股沟白色脂肪组织中分别分离和培养BM-MSCs和AD-MSCs,分别使用成骨、成软骨和成脂诱导分化培养基诱导两种细胞定向分化。采用茜素红、阿利新蓝和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化程度;实时荧光定量PCR(q PCR)鉴定MSCs并检测定向分化相关基因Runx2、Sp7(成骨),Sox9、Col2a1(成软骨),Pparg和Cebpa(成脂)表达水平,确定细胞的定向分化能力。基于GEO数据库中GSE43804和GSE122778数据集的小鼠和人类BM-MSCs和AD-MSCs基因表达谱数据,分析差异表达基因及其富集的信号通路。结果分离培养得到的BM-MSCs和AD-MSCs细胞形态不同,AD-MSCs梭形形态更明显;两种细胞均表达CD29、CD44和CD90,不表达CD34和CD45。定向诱导后AD-MSCs的成骨和成脂分化程度高于BM-MSCs,而成软骨分化程度低于BM-MSCs(P<0.05);定向诱导后AD-MSCs中Runx2、Pparg和Cebpa mRNA表达水平高于BM-MSCs,Sox9 mRNA表达水平低于BM-MSCs(P<0.05)。小鼠和人的AD-MSCs高表达的基因富集于PPAR和WNT信号通路,BM-MSCs高表达的基因富集于软骨和骨发育信号通路。结论小鼠AD-MSCs成骨和成脂分化能力强于BM-MSCs,而成软骨分化能力弱于BM-MSCs,PPAR、WNT、软骨和骨发育信号通路的活化状态在决定BM-MSCs和AD-MSCs不同定向分化潜能中起重要调节作用。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓 脂肪类 PPARγ Wnt信号通路 成骨分化 成软骨分化 成脂分化
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IFN-γ/sPD-1联合过表达的小鼠骨髓间充质干细胞具有较高生物活性和遗传稳定性
6
作者 颉亚辉 吕珍 +2 位作者 吴建军 魏兴民 郑贵森 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期806-812,共7页
目的研究慢病毒介导的γ干扰素(IFN-γ)及可溶性程序性细胞死亡蛋白1(sPD-1)过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)生物活性及遗传稳定性的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养BMSC;流式细胞术鉴定BMSC表面标志物的表达;扩增分别带有绿色荧光蛋白(... 目的研究慢病毒介导的γ干扰素(IFN-γ)及可溶性程序性细胞死亡蛋白1(sPD-1)过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)生物活性及遗传稳定性的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养BMSC;流式细胞术鉴定BMSC表面标志物的表达;扩增分别带有绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)的IFN-γ及sPD-1基因序列,通过慢病毒转染分别构建IFN-γ、sPD-1和IFN-γ/sPD-1双基因过表达的BMSC,采用倒置显微镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测IFN-γ和sPD-1的mRNA和蛋白表达;CCK-8法、BMSC端粒酶活性检测法分析IFN-γ和sPD-1过表达BMSC的生物活性和遗传稳定性。结果成功分离培养了CD44、CD105阳性,CD34、CD11b、CD45阴性的BMSC。与空载体组相比,IFN-γ/sPD-1联合组的IFN-γ、sPD-1 mRNA表达水平显著提高,但各组细胞生长情况类似。与空载体组相比,IFN-γ组端粒酶活性显著降低,但sPD-1组和IFN-γ/sPD-1联合组端粒酶活性变化不明显。结论IFN-γ和sPD-1联合过表达的BMSC具有较高生物活性和遗传稳定性。 展开更多
关键词 γ干扰素(IFN-γ) 可溶性程序性细胞死亡蛋白1(sPD-1) 骨髓干细胞(bmsc) 遗传稳定性
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BACE-1修饰的人骨髓间充质干细胞对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织的保护作用
7
作者 田青 林芸 +1 位作者 陈奕颖 吴征臻 《中国急救医学》 CAS CSCD 2024年第4期314-322,共9页
目的探究β-位点淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)修饰的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织的保护作用。方法将敲低BACE-1基因的腺病毒及空载体腺病毒感染BMSCs,并检测绿色荧光和BACE-1表达。将100只大鼠随机分... 目的探究β-位点淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)修饰的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织的保护作用。方法将敲低BACE-1基因的腺病毒及空载体腺病毒感染BMSCs,并检测绿色荧光和BACE-1表达。将100只大鼠随机分为假手术(Sham)组、TBI组、空载体腺病毒感染BMSCs(Ad-BMSCs)组和敲低BACE-1基因的腺病毒感染BMSCs(Ad-si-BACE-1-BMSCs)组,每组各25只。采用Marmarou′s自由落体方法建立大鼠TBI模型,Sham组仅切开、缝合头皮,不致伤。建模2 h后,Ad-si-BACE-1-BMSCs组和Ad-BMSCs组分别经尾静脉注射敲低BACE-1基因的腺病毒及空载体腺病毒感染的BMSCs,Sham组和TBI组均给予等体积生理盐水。BMSCs移植7 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知能力;苏木精-伊红染色和尼氏染色评估大鼠海马组织损伤;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;硫黄素-S染色、免疫组化染色检测海马组织β-淀粉样蛋白(Aβ)含量;硫代巴比妥酸法和全自动生化分析仪检测海马组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;免疫荧光染色检测海马组织离子钙结合接头分子1(Iba-1)^(+)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)+、Iba-1^(+)白细胞介素(IL)-6^(+)、Iba-1^(+)IL-1β^(+)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)+TNF-α^(+)、GFAP+IL-6^(+)、GFAP+IL-1β^(+)水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测海马组织BACE-1、Aβ、TNF-α、IL-6、IL-1β水平。结果与Sham组比较,TBI组大鼠逃避潜伏期增加、到达先前平台的次数和在平台停留的时间减少,海马神经元排列紊乱,尼氏小体减少,TUNEL阳性率增加,海马组织Aβ、BACE-1、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白、MDA含量、Iba-1^(+)TNF-α^(+)、Iba-1^(+)IL-6^(+)、Iba-1^(+)IL-1β^(+)、GFAP+TNF-α^(+)、GFAP+IL-6^(+)、GFAP+IL-1β^(+)细胞数增加,SOD含量减少(P均<0.05);与TBI组比较,Ad-BMSCs组和Ad-si-BACE-1-BMSCs组大鼠逃避潜伏期减少、到达先前平台的次数和在平台停留的时间增加,神经元排列较规则,尼氏小体增加,TUNEL阳性率减少,海马组织Aβ、BACE-1、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白、MDA含量、Iba-1^(+)TNF-α^(+)、Iba-1^(+)IL-6^(+)、Iba-1^(+)IL-1β^(+)、GFAP+TNF-α^(+)、GFAP+IL-6^(+)、GFAP+IL-1β^(+)细胞数减少,SOD含量增加(P均<0.05);且Ad-si-BACE-1-BMSCs对大鼠上述指标的影响优于Ad-BMSCs(P<0.05)。结论BACE-1修饰的人BMSCs能够抑制TBI大鼠氧化应激和炎症反应,对TBI大鼠脑组织具有保护作用。 展开更多
关键词 β-位点淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1) 骨髓干细胞(bmscs) 创伤性颅脑损伤 炎症 氧化应激
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淫羊藿苷抑制Notch信号通路促进骨髓间充质干细胞分化研究
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作者 周亚妮 张晓文 王丹 《商洛学院学报》 2024年第4期70-75,共6页
为了研究淫羊藿苷(ICA)抑制Notch信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化。选取8周龄SPF级健康雌性大鼠40只,手术摘除双侧卵巢建立大鼠骨质疏松症模型。收集BMSCs细胞进行体外分离培养,取传代第三代细胞进行鉴定,试验组加入浓度为0.... 为了研究淫羊藿苷(ICA)抑制Notch信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化。选取8周龄SPF级健康雌性大鼠40只,手术摘除双侧卵巢建立大鼠骨质疏松症模型。收集BMSCs细胞进行体外分离培养,取传代第三代细胞进行鉴定,试验组加入浓度为0.8 g/100 mL ICA,对照组加入同剂量的雌激素,对细胞进行培养。收集培育的细胞上清液,检测碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平及Notch信号通路中相关蛋白Notch1、Jagged-1、CBF1的表达水平。结果表明,流式细胞检测P3代骨髓间充质干细胞表面抗原,CD90、CD44、CD34、CD11阳性率分别为98.2%,93.3%,2.6%,4.4%,确认细胞鉴定为骨髓干细胞。与对照组比较,试验组ALP和OCN活性明显升高、另外Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达量均较对照组降低。淫羊藿苷通过上调ALP和OCN水平及抑制Notch通路中Notch1、CBF1、Jagged-1蛋白的表达,实现对去卵巢骨质疏松症大鼠BMSCs的增殖和成骨细胞分化。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 疏松症 骨髓干细胞(bmscs) NOTCH信号通路 成骨分化
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骨髓间充质干细胞
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《中国口腔种植学杂志》 2024年第2期126-126,共1页
存在于骨髓中的间充质干细胞,具有定向或多向分化的潜能,呈成纤维细胞样,不仅可以分化为造血基质细胞,还可以分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞等。
关键词 造血基细胞 骨髓干细胞 成纤维细胞 软骨细胞 成肌细胞 脂肪细胞 多向分化
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miR-877-3p抑制小鼠骨髓间充质干细胞分泌MCP-1及T淋巴细胞趋化及凋亡引起小鼠骨质疏松 被引量:2
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作者 秦杰 张燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期481-487,共7页
目的研究miR-877-3p对骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移趋化及凋亡T淋巴细胞的影响。方法构建双侧卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症及假手术(sham)模型。术后8周,显微CT(Micro-CT)检测两组小鼠骨参数指标;ELISA检测BMSC单核细胞趋化蛋白1(MCP-1... 目的研究miR-877-3p对骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移趋化及凋亡T淋巴细胞的影响。方法构建双侧卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症及假手术(sham)模型。术后8周,显微CT(Micro-CT)检测两组小鼠骨参数指标;ELISA检测BMSC单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,OVX组及假手术组BMSC分别与T淋巴细胞共培养,采用PKH26染色TranswellTM实验观察两组T淋巴细胞迁移能力,流式细胞术检测两组T淋巴细胞凋亡水平,反转录PCR检测BMSC的miR-877-3p表达。通过细胞转染,过表达或下调BMSC miR-877-3p水平,ELISA检测各组BMSC分泌的MCP-1水平,采用上述方法检测T淋巴细胞迁移能力T淋巴细胞凋亡水平。结果OVX组小鼠骨小梁数量,骨密度均低于假手术组小鼠。OVX组BMSC分泌MCP-1水平,趋化及凋亡T淋巴细胞能力均低于假手术组BMSC。OVX组BMSC表达miR-877-3p水平高于假手术组。过表达BMSC miR-877-3p后,BMSC分泌MCP-1,趋化及凋亡T淋巴细胞水平降低,下调miR-877-3p后则结果相反。结论miR-877-3p通过抑制BMSC MCP-1的分泌及T淋巴细胞趋化及凋亡,可能是骨质疏松症的发生发展原因之一。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmsc) 趋化 凋亡 miR-877-3p
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腺苷酸环化酶(AC)基因家族在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达 被引量:4
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作者 李超 杨栋 +5 位作者 张梦迪 周艳芬 邓传怀 张燕花 乔团团 王振山 《科学技术与工程》 北大核心 2015年第16期28-32,共5页
骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是骨髓中具有多向分化潜能的干细胞,腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)作为第二信使c AMP信号通路的重要组分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亚型表达种类,尚待... 骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是骨髓中具有多向分化潜能的干细胞,腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)作为第二信使c AMP信号通路的重要组分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亚型表达种类,尚待明了。通过对小鼠BMSCs原代培养条件优化,获得最适培养条件下生长良好的细胞,提取其总RNA并反转录;采用RT-PCR和序列比对分析,鉴定了小鼠BMSCs中AC亚型的表达种类。研究发现:1小鼠BMSCs原代培养:以4.0×106cell/m L的骨髓单核细胞浓度培养,并于4 d首次换液,增殖速度快,可以达到后续实验要求;2原代小鼠BMSCs中AC亚型表达种类分别为AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmscs) 原代培养 腺苷酸环化酶(AC)
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低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响 被引量:1
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作者 刘红 俞小芳 +4 位作者 滕杰 邹建洲 方艺 刘少鹏 丁小强 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期558-564,共7页
目的探讨低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响及其可能机制。方法采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs,通过细胞成脂、成骨分化诱导及流式细胞仪检测其表面标志... 目的探讨低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响及其可能机制。方法采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs,通过细胞成脂、成骨分化诱导及流式细胞仪检测其表面标志物(CD29、CD90、CD45)鉴定BMSCs;运用siRNA干扰技术沉默低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)基因。将细胞分成6组:正常培养组、正常培养+转染阴性对照组、正常培养+HIF-1αRNA干扰组、低氧预处理组、低氧培养+转染阴性对照组及低氧培养+HIF-1αRNA干扰组,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪和乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase,LDH)活力测定等方法,检测各组BMSCs的增殖、凋亡和坏死情况;Western blot和real-time PCR检测各组BMSCs中HIF-1α、葡萄糖转运子-1(glucose transporter,GLUT-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的mRNA和蛋白的表达。结果培养的BMSCs具有成脂、成骨等多向分化潜能;流式检测呈现CD29和CD90高表达,CD45低表达;低氧预处理可促进BMSCs增殖,减轻坏死,对细胞凋亡无明显影响;低氧预处理组HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA表达明显高于常氧培养组(P<0.05);给予低氧预处理组siRNA HIF-1α后其HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA表达均明显低于未干扰前(P<0.05),且细胞增殖受抑制,细胞凋亡和坏死加重(与未干扰前相比,P<0.05)。结论低氧预处理可促进BMSCs的体外增殖,减轻坏死,其机制可能与低氧预处理后HIF-1α表达增加及上调其下游基因GLUT-1和VEGF表达有关。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmscs) 低氧 增殖 凋亡
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氧化应激诱导自噬抑制人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖和凋亡
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作者 刘治军 刘少津 +3 位作者 郑维蓬 魏合伟 廖志浩 陈胜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期626-632,共7页
目的探讨H_(2)O_(2)诱导氧化应激反应对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)自噬和凋亡的影响。方法分离培养hBMSC,分为空白组(只加培养基)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理组、H_(2)O_(2)处理组、H_(2)O_(2)联合3-MA处理组。采用2′,7′-... 目的探讨H_(2)O_(2)诱导氧化应激反应对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)自噬和凋亡的影响。方法分离培养hBMSC,分为空白组(只加培养基)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理组、H_(2)O_(2)处理组、H_(2)O_(2)联合3-MA处理组。采用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测hBMSC活性氧(ROS)水平,CCK-8法检测(0、50、100、200、400)μmol/L H_(2)O_(2)对hBMSC增殖的影响;单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光胺基探针染色、溶酶体荧光探针LysoTracker Red染色观察细胞自噬水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞beclin 1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3蛋白表达。结果与空白组、3-MA预处理组比较,H_(2)O_(2)处理组细胞内ROS水平升高、细胞自噬体增加,细胞增殖和凋亡率显著降低;beclin 1、mTOR、c-caspase-3蛋白表达上调,p-mTOR蛋白表达下调。与3-MA处理组比较,H_(2)O_(2)联合3-MA处理组细胞内ROS水平升高、细胞自噬体增加,细胞凋亡率升高不明显;beclin 1、mTOR、c-caspase-3蛋白表达上调,p-mTOR蛋白表达下调。结论H_(2)O_(2)可诱导hBMSC产生氧化应激,hBMSC自噬增强,细胞增殖和凋亡降低。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmsc) 氧化应激 自噬 过氧化氢(H2O2)
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脉冲电磁场对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究进展
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作者 刘朝辉 邓叶龙 +4 位作者 孔令俊 高文婷 李兴国 杨德龙 唐仲海 《中医正骨》 2023年第4期38-42,共5页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是临床常见病,脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)是治疗OP的新方法,其可以通过共振效应促进成骨细胞的增殖和分化,从而发挥治疗OP的作用。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcell,BMSC... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是临床常见病,脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)是治疗OP的新方法,其可以通过共振效应促进成骨细胞的增殖和分化,从而发挥治疗OP的作用。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcell,BMSC)是一种具有多向分化能力的干细胞,其对OP的预防和治疗具有重要作用。本文概述了PEMFs和BMSC,就PEMFs对BMSC的作用、PEMFs促进BMSC成骨分化的相关信号通路进行了综述。 展开更多
关键词 电磁场 骨髓 干细胞 细胞分化 骨生成 疏松 信号传导 综述
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自体骨髓间充质干细胞复合髓核脱细胞基质修复椎间盘退变的实验研究
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作者 杜志才 谢秀峰 +1 位作者 银和平 王宇鹏 《内蒙古医科大学学报》 2023年第5期484-487,492,共5页
目的探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)辅以髓核脱细胞基质(DNPM)的细胞治疗作用。方法在本研究中,我们制作了一种优化的DNPM并通过评估其生化组成、水含量、生物安全性和力学性能来评估其性能。进一步研究DNPM在体外对BMSCs的NP样分化... 目的探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)辅以髓核脱细胞基质(DNPM)的细胞治疗作用。方法在本研究中,我们制作了一种优化的DNPM并通过评估其生化组成、水含量、生物安全性和力学性能来评估其性能。进一步研究DNPM在体外对BMSCs的NP样分化的刺激作用,以及在体内动物模式下,对退变椎间盘髓核的再生作用。实验分组:(1)sham组:非椎间盘损伤组;(2)退变组:椎间盘退变造模后未处理;(3)BMSCs组:椎间盘退变单纯注射BMSCs;(4)复合组:椎间盘退变注射BMSCs复合DNPM。结果4周后,约68%和43%的胶原蛋白和sGAG分别保留在NPCs中。NPCs也表现出与新鲜NP相似的力学性能。此外,NPCs具有生物相容性,能够诱导椎间盘退变(IVDD)中髓核样分化和细胞外基质(ECM)的合成。在体外实验中,12周后,复合组的椎间盘高度指数(DHI)(近81%)和MRI指数(349.05±38.48)显著高于造模组,接近sham组。NPCs还部分恢复了体内退化NP组织的ECM含量和结构。结论自体BMSCs辅以DNPM具有良好的生物和力学性能,并具有促进退化NPCs再生的能力,对椎间盘退变有较好的修复能力。 展开更多
关键词 盘退变 骨髓干细胞 髓核脱细胞 修复
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Wnt5a基因沉默对骨髓间充质干细胞向睾丸间质细胞分化的影响
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作者 赵伟 郭亚雄 刘春 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第7期980-987,共8页
目的 通过siRNA干扰技术研究Wnt5a基因沉默对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向睾丸间质细胞(LC)分化的初步机制。方法 采用流式细胞仪检测由中国科学院干细胞库提供的Sprague Dawley(SD)大鼠骨髓间充质干细胞株表面蛋白(CD29、CD44、CD45... 目的 通过siRNA干扰技术研究Wnt5a基因沉默对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向睾丸间质细胞(LC)分化的初步机制。方法 采用流式细胞仪检测由中国科学院干细胞库提供的Sprague Dawley(SD)大鼠骨髓间充质干细胞株表面蛋白(CD29、CD44、CD45、CD90)的表达。BMSCs分为NC组、siRNA1组和siRNA2组,分别转染空载siRNA,Wnt5a-siRNA-1,Wnt5a-siRNA-2;采用RT-qPCR法检测Wnt5a-siRNA转染后Wnt5a及Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF mRNA的表达;采用ELISA法检测Wnt5a-siRNA转染后Wnt5a及Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF的蛋白表达;免疫荧光实验通过检测转染3 d的细胞表面标志物3β-羟化类固醇脱氢酶(3β-HSD),分析BMSCs向LC分化水平;倒置显微镜观察转染5 d细胞的形态学变化。ELISA法检测转染后LC的睾酮生成水平。结果 购买的大鼠BMSCs细胞株表面抗体CD29、CD44及CD90阳性表达及CD45阴性表达符合大鼠BMSCs的特异性抗体特征。与NC组比较,siRNA1组和siRNA2组Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF的mRNA及蛋白表达量下降(P<0.05),睾酮分泌量均显著升高(P<0.05)。siRNA1组和siRNA2组LC特异性标记物3β-HSD染色阳性面积百分比明显高于NC组(P<0.01);细胞转染后形态学变化符合LC的形态特点。结论 Wnt5a-siRNA转染BMSCs细胞可显著抑制Wnt5a的mRNA和蛋白表达;Wnt5a基因沉默通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥促进BMSCs向LC分化的作用。 展开更多
关键词 骨髓干细胞 睾丸细胞 WNT5A Β-CATENIN 迟发性性腺功能减退症
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发动蛋白(dynamin)抑制剂Dyngo-4a在大鼠骨髓间充质干细胞内吞葡聚糖过程中存在脱靶效应 被引量:1
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作者 张颖 朱静 +5 位作者 许皓 易勤 颜亮 叶亮 张心愿 谭彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期57-62,共6页
目的研究发动蛋白(DNM)抑制剂Dyngo-4a在依赖DNM的内吞途径中可能存在的脱靶作用。方法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并进行流式细胞术鉴定,将细胞分为抑制剂对照组、Dyngo-4a处理组、转染阴性对照(si-NC)组、DNM2小干扰RNA(si-... 目的研究发动蛋白(DNM)抑制剂Dyngo-4a在依赖DNM的内吞途径中可能存在的脱靶作用。方法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并进行流式细胞术鉴定,将细胞分为抑制剂对照组、Dyngo-4a处理组、转染阴性对照(si-NC)组、DNM2小干扰RNA(si-DNM2)转染组、转染和Dyngo-4a共处理组。反转录PCR和Western blot法验证DNM2基因沉默效率,CCK-8法检测Dyngo-4a处理后细胞活性变化,共聚焦显微镜检测内吞的Dylight649标记的转铁蛋白(transferrin-Dylight649)和四甲基罗丹明标记的葡聚糖(dextran-TMR)阳性的囊泡数量以及平均荧光强度。结果使用小干扰RNA能显著下调BMSC的DNM2的mRNA和蛋白表达,转染组内吞的转铁蛋白囊泡数量与转染阴性对照组比较明显降低,si-DNM2转染组内吞的葡聚糖囊泡数量和平均荧光强度与si-NC组比较变化不明显,转染si-DNM2和Dyngo-4a共处理组与单独si-DNM2转染组比较,Dyngo-4a处理组与抑制剂对照组比较,葡聚糖囊泡数量和平均荧光强度均明显降低。结论Dyngo-4a作为靶向DNM的抑制剂在葡聚糖内吞进BMSC过程中存在脱靶效应。 展开更多
关键词 脱靶效应 发动蛋白 Dyngo-4a 内吞作用 葡聚糖 骨髓干细胞(bmsc)
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骨髓间充质干细胞治疗激素性股骨头坏死的研究进展 被引量:3
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作者 钱士达 于雪峰 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第5期553-556,共4页
激素性股骨头坏死的病因和发生机制尚未完全阐明,且缺乏有效的治疗方法。随着干细胞治疗技术在各大学科的应用,许多学者开始研究干细胞的性质和功能,并应用于激素性股骨头坏死的治疗中。单纯的干细胞移植效果不佳,但对干细胞进行移植前... 激素性股骨头坏死的病因和发生机制尚未完全阐明,且缺乏有效的治疗方法。随着干细胞治疗技术在各大学科的应用,许多学者开始研究干细胞的性质和功能,并应用于激素性股骨头坏死的治疗中。单纯的干细胞移植效果不佳,但对干细胞进行移植前修饰可以提高其疗效。该文就骨髓间充质干细胞治疗激素性股骨头坏死的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 股骨头坏死 干细胞 干细胞移植 激素性股骨头坏死 骨髓干细胞
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骨髓间充质干细胞外泌体miR-126-3p靶向CCR1抑制非小细胞肺癌细胞恶性增殖及转移 被引量:2
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作者 杜坤 汪兵 +4 位作者 杨盛荣 罗于杰 李云鹤 冉旭 朱冰 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期189-194,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)来源的外泌体中miR-126-3p靶向趋化因子受体1(chemokine receptor 1,CCR1)对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养BMSCs,提取外泌体并通过外泌体标志蛋白CD63和TSG101... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)来源的外泌体中miR-126-3p靶向趋化因子受体1(chemokine receptor 1,CCR1)对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养BMSCs,提取外泌体并通过外泌体标志蛋白CD63和TSG101进行鉴定;外泌体共培养A549细胞不同时长(0、24、48、72 h)后,CCK-8检测细胞存活率,q RT-PCR检测miR-126-3p和CCR1 m RNA表达,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blotting检测CCR1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin)相对表达。结果外泌体呈边缘高亮、中间灰暗的圆形或椭圆形杯状结构,粒径分布范围152 nm左右,有CD63、TSG101蛋白表达;外泌体中miR-126-3p表达高于A549细胞,A549细胞中CCR1 m RNA表达高于外泌体,而在A549细胞与外泌体共培养后,A549细胞中miR-126-3p表达升高,CCR1表达降低;A549细胞与外泌体共培养0、24、48、72 h,细胞的存活率、迁移和侵袭能力和CCR1、N-cad和Vimentin蛋白表达及CCR1 m RNA表达均随着培养时间的延长逐渐降低,而miR-126-3p水平和E-cad蛋白表达随着培养时间的延长逐渐升高。结论BMSCs来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-126-3p的表达,miR-126-3p通过靶向抑制CCR1表达可降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmscs) 外泌体 miR-126-3p 趋化因子受体1(CCR1) 肺癌 增殖 迁移 侵袭
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骨髓间充质干细胞基于Rho/ROCK信号通路对膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响 被引量:3
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作者 刘朝政 李克文 +1 位作者 牛兴邦 张兰涛 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第13期3255-3259,共5页
目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对... 目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对比各组软骨组织Mankin评分,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及RhoA、ROCK蛋白表达水平,分析BMSCs对KOA大鼠软骨细胞凋亡的影响。结果BMSCs组Mankin评分高于正常组、低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组血清MMP-1、TNF-α、Bax、RhoA、ROCK表达水平低于模型组、高于正常组,IL-10、Bcl-2表达水平高于模型组、低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组软骨细胞凋亡指数低于模型组、高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Rho/ROCK信号通路调控BMSCs可改善KOA大鼠膝关节软骨病理状态、抑制炎症反应蔓延、调控Bax、Bcl-2蛋白表达、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关,证实BMSCs具有良好的抗软骨细胞凋亡疗效。 展开更多
关键词 骨髓干细胞(bmscs) 鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路 膝骨性关节炎(KOA) 软骨细胞凋亡
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