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青藤碱可有效抑制白细胞介素1β介导的髓核细胞凋亡 被引量：2
1
作者 王倩 卢子昂 +3 位作者 李利和 吕超亮 王盟 张存鑫 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第2期224-230,共7页
背景:椎间盘退变是导致脊柱退行性疾病的基础,然而目前尚无有效的治疗药物。目的:探讨青藤碱是否可以抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞凋亡及其分子机制。方法:采用胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法体外培养大鼠髓核细胞,并绘制细胞生长曲线,采... 背景:椎间盘退变是导致脊柱退行性疾病的基础,然而目前尚无有效的治疗药物。目的:探讨青藤碱是否可以抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞凋亡及其分子机制。方法:采用胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法体外培养大鼠髓核细胞,并绘制细胞生长曲线,采用CCK-8法筛选合适的青藤碱药物浓度。将髓核细胞分为对照组、青藤碱组、白细胞介素1β组、青藤碱+白细胞介素1β组、锌原卟啉(血红素氧合酶1抑制剂)组、锌原卟啉+青藤碱组、锌原卟啉+白细胞介素1β组、青藤碱+锌原卟啉+白细胞介素1β组。分别检测各组髓核细胞增殖活性、活性氧含量、凋亡率及血红素氧合酶1的表达情况。结果与结论:①体外培养的大鼠髓核细胞呈现多角形、三角形、短楔形等形态,其呈现“S”型曲线生长,接种第1-3天生长缓慢,第4-6天生长迅速,第七八天生长速度缓慢,进入“平台期”,细胞数量不再增加;②当青藤碱的浓度≤80μmol/L时,髓核细胞的增殖活性不会受到显著影响(P>0.05);③白细胞介素1β可以显著降低髓核细胞的增殖活性,增加活性氧含量,导致细胞凋亡(P<0.01);④当采用青藤碱干预后,不仅可以促进血红素氧合酶1的表达(P<0.05),而且可以抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞增殖活性降低、活性氧含量和凋亡率增加(P<0.05),其作用可被锌原卟啉逆转(P<0.01)。 展开更多
关键词 青藤碱 白细胞介素1Β 血红素氧合酶1 髓核细胞 细胞增殖 细胞凋亡 活性氧 椎间盘 椎间盘退变
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不同氧浓度下髓核细胞中PI3K/Akt/HIF-1α信号通路表达对延缓椎间盘退变的意义 被引量：1
2
作者 周明瀚 张慧 +1 位作者 郑先波 徐无忌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第28期4491-4497,共7页
背景:椎间盘退变是一种由于细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等多种因素共同作用导致的疾病,目前认为其核心在于髓核细胞退变与凋亡,然而具体病理机制尚不明确。目的:通过探究不同氧浓度下髓核细胞中磷脂酰激醇-3-激酶(phosphatidylinosito... 背景:椎间盘退变是一种由于细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等多种因素共同作用导致的疾病,目前认为其核心在于髓核细胞退变与凋亡,然而具体病理机制尚不明确。目的:通过探究不同氧浓度下髓核细胞中磷脂酰激醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF-1α)信号通路的表达及髓核细胞凋亡情况,明确不同氧浓度下髓核细胞的生物学特性,探讨椎间盘退变的机制。方法:取人正常及退变髓核细胞,取第2代细胞用于影像学鉴定,取第3代细胞分别采用37℃、空气、100%湿度环境,100μmol/L CoCl_(2)浓度的Leibovitz’s培养基、100μmol/L H_(2)O_(2)浓度的10%胎牛血清培养基构建常氧、低氧及氧化应激环境,将细胞分为正常髓核细胞+低氧环境、正常髓核细胞+常氧环境、正常髓核细胞+氧化应激环境、退变髓核细胞+低氧环境、退变髓核细胞+常氧环境、退变髓核细胞+氧化应激环境6组;采用CCK-8法检测细胞活力及增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western-blot检测PI3K、AKT、HIF-1α的蛋白及mRNA表达情况。结果与结论:①在不同的氧浓度下,正常及退变髓核细胞的增殖率随氧浓度升高而下降,凋亡率随氧浓度升高而上升(P<0.05),以正常髓核细胞+低氧环境为对照组,细胞正常与否对凋亡率影响极为显著(P<0.001),氧浓度对髓核细胞增殖率与凋亡率影响极为显著(P<0.001),细胞是否退变与氧浓度二者交互作用对髓核细胞增殖率与凋亡率影响显著(P<0.05)。②在不同的氧浓度下,正常髓核细胞中低氧环境下PI3K、AKT、HIF-1α的蛋白及mRNA表达最高,氧化应激环境下其次,常氧环境下最低;退变髓核细胞中3项指标的蛋白和mRNA表达随氧浓度升高而下降;正常髓核细胞中PI3K、Akt的蛋白、mRNA表达均显著高于退变髓核细胞(P<0.05)。以正常髓核细胞+低氧环境为对照组,髓核细胞正常或退变及氧浓度对上述3项指标的蛋白和mRNA表达影响均极为显著,二者交互作用对3项指标的蛋白和mRNA表达影响极为显著(P<0.001)。③结果表明,髓核细胞的增殖、凋亡与氧浓度和细胞自身功能状态密切相关,PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在不同细胞功能状态及不同氧浓度环境下具有拮抗调节作用,其机制可能与PI3K/Akt信号通路被激活,并翻译转录HIF-1α,从而维持活性氧自由基代谢平衡有关。该通路对于抑制氧化应激,拮抗髓核细胞凋亡,进而延缓椎间盘退变具有重要意义。 展开更多
关键词 氧浓度 髓核细胞 细胞凋亡 氧化应激 生物学特性 信号通路
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髓核细胞退变模型建立的研究进展
3
作者 李亚雄 韩硕 刘勇 《神经损伤与功能重建》 2024年第1期41-44,共4页
髓核细胞(NPCs)退变模型对研究椎间盘退变(IVDD)病理机制和治疗策略有着重要意义。对于退变严重的NPCs,往往较难贴壁生长,而轻度退变的细胞,虽可体外培养,但难有显著的实验结果,因此通过不同的诱导手段构建有效的退变细胞模型,不仅可以... 髓核细胞(NPCs)退变模型对研究椎间盘退变(IVDD)病理机制和治疗策略有着重要意义。对于退变严重的NPCs,往往较难贴壁生长,而轻度退变的细胞,虽可体外培养,但难有显著的实验结果,因此通过不同的诱导手段构建有效的退变细胞模型,不仅可以提升实验的可信度,更能增加实验数据的说服力。目前有较多诱导NPCs退变的方法,但模型建立缺乏统一标准,且无系统性的总结。因此,本文将从诱导NPCs退变的方式、方法、模型效果评价指标等方面展开综述,并从物理、化学和生物工程等方面对不同建模方式进行了分类总结,旨在为筛选、评价有效的退变细胞模型建立方法,探究IVDD治疗机制等研究提供参考。 展开更多
关键词 椎间盘退变 细胞模型 髓核细胞 方法
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苦参碱对椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡的影响
4
作者 王冲 孔丽 +1 位作者 崔学超 鲍铁周 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第27期4281-4287,共7页
背景:髓核细胞凋亡是引发椎间盘退变的主要病理基础,炎症和过氧化反应是导致髓核细胞凋亡的重要因素。研究表明苦参碱具有抗氧化、衰老、炎症和细胞凋亡等作用,可作为治疗椎间盘退变的潜在药物。目的:观察苦参碱调节环状GMP-AMP合成酶-... 背景:髓核细胞凋亡是引发椎间盘退变的主要病理基础,炎症和过氧化反应是导致髓核细胞凋亡的重要因素。研究表明苦参碱具有抗氧化、衰老、炎症和细胞凋亡等作用,可作为治疗椎间盘退变的潜在药物。目的:观察苦参碱调节环状GMP-AMP合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号通路对椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡的影响。方法:①将处于对数生长期的大鼠髓核细胞分6组处理:除对照组外,模型组、苦参碱低剂量组、苦参碱高剂量组、空载组、苦参碱高剂量+cGAS过表达组采用氧糖剥夺建立椎间盘退变细胞模型,造模同时苦参碱低剂量组、苦参碱高剂量组分别给予0.4,0.8 mmol/L苦参碱处理,空载组转染空载质粒,苦参碱高剂量+cGAS过表达组给予0.8 mmol/L苦参碱处理并转染cGAS过表达质粒。处理24 h后,检测细胞活性与凋亡,细胞内活性氧、超氧化物歧化酶、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平,以及细胞内凋亡蛋白、cGAS-STING通路蛋白表达。②将60只SD大鼠随机分为6组,每组10只:除对照组外,模型组、苦参碱低剂量组、苦参碱高剂量组、空载组、苦参碱高剂量+cGAS过表达组建立椎间盘退变模型;造模12周后,苦参碱低剂量组、苦参碱高剂量组分别灌胃给予60,120 mg/kg苦参碱(1次/d),空载组尾静脉注射空载质粒(2次/周),苦参碱高剂量+cGAS过表达组灌胃给予120 mg/kg苦参碱+尾静脉注射cGAS过表达质粒,连续治疗3周。给药结束后取材,检测细胞凋亡,活性氧、超氧化物歧化酶、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平,以及凋亡蛋白、cGAS-STING通路蛋白表达。结果与结论:①与对照组比较,模型组细胞活性、超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、活性氧含量、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平及cGAS、STING、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05);苦参碱可呈剂量依赖性地改善上述因细胞造模造成的各指标变化(P<0.05),而cGAS过表达可部分拮抗高剂量苦参碱的改善作用。②在动物实验中获得了与体外细胞实验类似的结果。③结果表明,苦参碱可通过阻断cGAS-STING信号传导抑制炎症和氧化应激反应,进而减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡、提升其活性。 展开更多
关键词 苦参碱 cGAS-STING通路 椎间盘退变 髓核细胞 细胞凋亡
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蛇床子素通过NF-kB信号通路调控退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应及凋亡
5
作者 高峰 于喜微 李晨辰 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第3期142-146,共5页
目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OG... 目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OGD培养+蛇床子素处理)、PDTC组(OGD培养+NF-κB通路抑制剂PDTC处理)和蛇床子素+PDTC组(OGD培养+蛇床子素+PDTC处理)。采用Western blot检测细胞中Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col2al)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、P65和p-P65蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中炎性因子血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较,OGD组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显降低,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,细胞凋亡率明显升高,细胞中p-P65蛋白表达明显升高;与OGD组比较,蛇床子素组和PDTC组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显升高,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,细胞凋亡率明显降低,细胞中p-P65蛋白表达明显降低,而蛇床子素+PDTC组上述指标改变最为明显。结论 蛇床子素可能通过抑制核因子激活的B细胞的κ轻链增强(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的活性,促进退变髓核细胞的细胞外基质合成、抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡。 展开更多
关键词 髓核细胞 蛇床子素 NF-KB信号通路 细胞外基质 炎症反应 凋亡
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右美托咪定对IL-1β诱导的人髓核细胞凋亡和炎症反应的影响
6
作者 王磊 吴海龙 张金强 《山东医药》 CAS 2024年第7期52-55,共4页
目的观察右美托咪定(Dex)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的人髓核细胞凋亡和炎症反应的影响。方法常规培养人髓核细胞,并将其随机分为对照组(Control组)、IL-1β组、IL-1β+Dex-L组、IL-1β+Dex-M组、IL-1β+Dex-H组。Control组不做任何处... 目的观察右美托咪定(Dex)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的人髓核细胞凋亡和炎症反应的影响。方法常规培养人髓核细胞,并将其随机分为对照组(Control组)、IL-1β组、IL-1β+Dex-L组、IL-1β+Dex-M组、IL-1β+Dex-H组。Control组不做任何处理,其他组依次给予10 ng/mL IL-1β、10 ng/mL IL-1β+25 nmol/L Dex、10 ng/mL IL-1β+50 nmol/L Dex、10 ng/mL IL-1β+100 nmol/L Dex,继续培养24 h。用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)、一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6),Western blotting法检测B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)蛋白。结果与Control组比较,IL-1β组细胞培养24、48 h存活率及Bcl-2蛋白表达低,凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2、iNOS蛋白表达、NO水平高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+Dex-L组、IL-1β+Dex-M组、IL-1β+Dex-H组细胞培养24、48 h存活率及Bcl-2蛋白表达高,凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2、iNOS蛋白表达、NO水平低,差异均有统计学意义(P均<0.05);IL-1β+Dex-L组、IL-1β+Dex-M组、IL-1β+Dex-H组细胞培养24、48 h存活率及Bcl-2蛋白表达依次升高,凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2、iNOS蛋白表达、NO水平依次降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论右美托咪定可抑制IL-1β诱导的人髓核细胞凋亡,减轻炎症反应,且该作用呈浓度依赖性。 展开更多
关键词 椎间盘退变 右美托咪定 白细胞介素1Β 髓核细胞 细胞凋亡 炎症反应
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miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响
7
作者 唐家国 李晨芳 +5 位作者 左斌 何精选 夏晓枫 王鹏 邹凯 娄文杰 《颈腰痛杂志》 2024年第1期1-8,13,共9页
目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细... 目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫荧光染色对其鉴定。NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1组,除Ctrl组外的五组细胞均使用10 ng/mL的IL-1β诱导NP细胞退变模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及CollagenⅡ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1的靶向关系。结果大鼠椎间盘NP细胞被成功分离。与IL-1β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3表达及Bax/Bcl-2比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、CollagenⅡ、Aggrecan表达升高(P<0.05)。miR-455-3p直接靶向负调控sirt1表达。干扰sirt1可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响。结论抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖。 展开更多
关键词 miR-455-3p 沉默信息调节因子2同源蛋白1 大鼠 椎间盘髓核细胞 增殖 凋亡
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JAK/STAT通路介导椎间盘髓核细胞凋亡的研究进展
8
作者 易军 姬广林 《赣南医学院学报》 2024年第2期194-200,共7页
椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration, IDD)是一种与年龄相关的退行性疾病。近年来,IDD的发病率逐年升高,已成为全球关注的公共卫生问题。髓核细胞作为椎间盘内的主要细胞,其凋亡是椎间盘发生退变的重要病理基础之一。研究表明... 椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration, IDD)是一种与年龄相关的退行性疾病。近年来,IDD的发病率逐年升高,已成为全球关注的公共卫生问题。髓核细胞作为椎间盘内的主要细胞,其凋亡是椎间盘发生退变的重要病理基础之一。研究表明Janus激酶(Janus kinase, JAK)/信号转导子及转录激活因子(Signal transducer and activator of transcriptor, STAT)信号途径与髓核细胞凋亡过程联系密切。本文就JAK/STAT信号通路介导的椎间盘髓核细胞凋亡的研究进展及以JAK/STAT信号通路为潜在治疗靶点进行综述,以期为IDD的治疗提供参考。 展开更多
关键词 JAK/STAT信号通路 髓核细胞 凋亡 椎间盘退变
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lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究 被引量：1
9
作者 陈振 张燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1238-1242,共5页
目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、... 目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。 展开更多
关键词 大鼠髓核细胞 lncRNA CTBP1-AS2 miR-205-5p 凋亡 炎症
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基于mTOR信号通路探讨鹿茸多肽对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响
10
作者 姚啸生 马南廷 +2 位作者 戚晓楠 崔海舰 杨鸫祥 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第7期21-25,共5页
目的 探讨鹿茸多肽(pilose antler polypeptides, PAP)对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响。方法 购入1月龄的60只健康SD大鼠,随机分为正常组(normal)、对照组(control)、鹿茸多肽组(PAP)、雷帕霉素组(Rapamycin, Rap)、鹿茸多肽+雷帕... 目的 探讨鹿茸多肽(pilose antler polypeptides, PAP)对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响。方法 购入1月龄的60只健康SD大鼠,随机分为正常组(normal)、对照组(control)、鹿茸多肽组(PAP)、雷帕霉素组(Rapamycin, Rap)、鹿茸多肽+雷帕霉素组(PAP+Rap)5组,每组12只。后4组采用双前肢去势直立法复制大鼠腰椎间盘退变模型。造模6周后,正常组普通饲养不做任何处置,对照组用0.9%氯化钠注射液灌胃,鹿茸多肽组用4.5 mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,雷帕霉素组腹腔注射0.2 mg/mL浓度的雷帕霉素,鹿茸多肽+雷帕霉素组腹腔注射0.2 mg/mL浓度的雷帕霉素联合4.5 mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,各组均给药8周。给药结束后,5组中,半数样本取L5-L6椎间盘及上下相邻椎体,用10%的甲醛溶液固定后使用苏木精-伊红染色和阿利新蓝染色进行切片染色,置于显微镜下观察;另半数样本取完整L5-L6椎间盘组织,经液氮罐速冻后移入-80℃冰箱冻存,Western blot检验Akt-mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-Akt和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。结果 Alcian blue染色及苏木精-伊红染色下,与对照组比较,PAP组、Rap组、PAP+Rap组均可显著延缓椎间盘退变。蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR的表达水平排列为:PAP+Rap>PAP>control>Rap(P<0.05);LC3-Ⅱ的表达水平排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ的比例排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP(P<0.05)。结论 鹿茸多肽具有抑制大鼠椎间盘髓核细胞自噬的作用,进而延缓大鼠椎间盘退变,这可能与激活mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 髓核细胞 自噬 椎间盘退变
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NLRP3炎症小体通路在IL-6、TNF-α促进椎间盘髓核细胞神经营养因子和感觉神经肽P物质表达中的作用
11
作者 韩建龙 常刚 +2 位作者 吕晓业 王雪 左金良 《老年医学研究》 2023年第4期16-19,共4页
目的探讨NLRP3炎症小体通路在细胞炎症因子IL-6和TNF-α促进椎间盘髓核细胞(NP细胞)神经营养因子(NGF)和感觉神经肽P物质(SP)表达中的作用。方法从3只Sprague-Dawley大鼠椎间盘组织中提取原代NP细胞,分为对照组、处理组和MCC950组。对... 目的探讨NLRP3炎症小体通路在细胞炎症因子IL-6和TNF-α促进椎间盘髓核细胞(NP细胞)神经营养因子(NGF)和感觉神经肽P物质(SP)表达中的作用。方法从3只Sprague-Dawley大鼠椎间盘组织中提取原代NP细胞,分为对照组、处理组和MCC950组。对照组不经过任何处理,处理组用浓度1、10和100 ng/mL的IL-6或TNF-α处理48 h,MCC950组用1μmol/L的NLRP3抑制剂MCC950处理1 h后,用100 ng/mL的IL-6或TNF-α处理48 h。采用ELISA检测细胞培养上清液中NGF和SP的水平。结果与对照组相比,1、10和100 ng/mL IL-6或TNF-α处理NP细胞后,NGF和SP蛋白水平升高(P均<0.05)。MCC950组NGF、SP蛋白水平均较100 ng/mL IL-6或TNF-α处理组降低(P均<0.05)。结论细胞炎性因子IL-6和TNF-α能够通过激活NP细胞中NLRP3炎症小体信号通路,促进NGF和SP的表达。 展开更多
关键词 椎间盘退行性病变 髓核细胞 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 神经营养因子 感觉神经肽P物质
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黄芩素对TBHP诱导小鼠髓核细胞衰老的保护作用 被引量：1
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作者 甘延池 何嘉辉 +9 位作者 尚奇 陈桂锋 陈弘林 张学来 张友 颜先伟 刘慧雯 梁德 任辉 江晓兵 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期61-68,103,共9页
目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法取8周龄小鼠,体外分离培养髓核细胞,传代至P2~P3代。将实验分为对照组、模型组及黄芩素组... 目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法取8周龄小鼠,体外分离培养髓核细胞,传代至P2~P3代。将实验分为对照组、模型组及黄芩素组3组。β半乳糖苷酶染色检测髓核细胞衰老变化。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、p53、p16 mRNA表达。免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测TNF-α表达水平。免疫印迹试验(Western blot)检测白细胞介素-6(IL-6)、aggrecan、p53、p16、IL-1β、TNF-α蛋白表达。结果TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,干预时间4 h;黄芩素最佳干预浓度为1.0μg/mL,干预时间为24 h。与对照组比较,模型组β半乳糖染色阳性率较对照组显著升高(P<0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),MMP-3 mRNA表达显著升高(P<0.05),MMP-9 mRNA表达升高,差异无统计学意义(P>0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),collagenⅡmRNA表达降低,差异无统计学意义(P>0.05),IL-6蛋白表达升高,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,黄芩素组β半乳糖染色阳性率较模型组明显降低(P<0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),MMP-3、MMP-9 mRNA表达显著降低(P<0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),collagenⅡmRNA表达显著升高(P<0.05),IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论黄芩素能延缓TBHP诱导的小鼠髓核细胞衰老的进程。 展开更多
关键词 黄芩素 TBHP 髓核细胞 衰老
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全血及不同方式制备富血小板血浆对髓核细胞的干预效应 被引量：1
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作者 练诗林 张燕 +3 位作者 蒋强 张晗硕 李土胜 丁宇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第8期1199-1204,共6页
背景:目前椎间盘退变的富血小板血浆修复疗法受到越来越多的关注,临床应用中椎间盘修复的富血小板血浆常用的制备方法包括手工制备一次离心和套装制备二次离心法,不同制备方法的优劣证据不足。目的:通过手工制备、套装制备富血小板血浆... 背景:目前椎间盘退变的富血小板血浆修复疗法受到越来越多的关注,临床应用中椎间盘修复的富血小板血浆常用的制备方法包括手工制备一次离心和套装制备二次离心法,不同制备方法的优劣证据不足。目的:通过手工制备、套装制备富血小板血浆以及全血干预猪的原代髓核细胞,对比其效应差异,探讨更适合椎间盘退变修复的富血小板血浆制备方式。方法:提取分离猪的静脉血,按照手工制备一次离心法及OSP套装制备二次离心法分别制备富血小板血浆,同时留取全血对比,并设立空白对照组PBS。检测制备富血小板血浆的血小板浓度、白细胞浓度,计算富集倍数。富血小板血浆激活后获得激活物并利用ELISA法检测其中转化生长因子β1、血小板源性生长因子BB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β浓度。培养猪的髓核细胞至P3代,利用制备的富血小板血浆以及全血进行干预,CCK-8法检测富血小板血浆对髓核细胞的促增殖作用,Western-blot法检测富血小板血浆对髓核细胞Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖的促合成代谢作用。结果与结论:①OSP组的富血小板血浆在制备耗时、血小板浓度、白细胞浓度方面均显著高于手工组,OSP组与手工组血小板富集倍数分别为5.6倍、3.0倍,白细胞富集倍数分别为2.21倍、1.36倍;②转化生长因子β1浓度、血小板源性生长因子BB浓度、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β水平OSP组均高于手工组,差异有显著性意义(P<0.05);③CCK-8检测细胞增殖情况中,OSP组的A450 nm值高于其余各组,差异有显著性意义(P<0.0001);手工组的A450 nm值与全血组和对照组相比,差异无显著性意义(P=0.1927);④Western-blot检测Ⅱ型胶原合成情况,OSP组的相对表达量显著高于其他组(P<0.0001);聚蛋白聚糖的合成情况,手工组的相对表达量低于其余各组(P=0.0405);⑤结果说明,相对于手工制备方式,以OSP为代表的套装制备法制备耗时更长,所得富血小板血浆的白细胞浓度显著高于手工组,并且促炎因子浓度更高;但同时套装制备法能够获得更高浓度的血小板和生长因子,并且有更好的促细胞增殖效果和促细胞外基质合成效果。为取得更好的套装制备富血小板血浆疗效,应在套装制备操作中加强对白细胞的分离。 展开更多
关键词 髓核细胞 富血小板血浆 手工制备 套装制备 椎间盘退变 组织修复
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氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立 被引量：1
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作者 李欣怡 王洪伸 +3 位作者 谭傲威 吴浩杰 李永津 陈博来 《广东医学》 CAS 2023年第6期729-734,共6页
目的观察氯化钴(CoCl_(2))对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl_(2)溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13... 目的观察氯化钴(CoCl_(2))对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl_(2)溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13个分组:空白对照组,CoCl_(2)处理组(100μmol/L-12 h组,100μmol/L-24 h组,100μmol/L-36 h组,100μmol/L-48 h组;200μmol/L-12 h组,200μmol/L-24 h组,200μmol/L-36 h组,200μmol/L-48 h组;300μmol/L-12 h组,300μmol/L-24 h组,300μmol/L-36 h组,300μmol/L-48 h组)。利用CCK-8实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况,并通过免疫印迹(western blot)及实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果与空白对照组比较,CoCl_(2)处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低(P<0.05),但在低浓度、短时间的CoCl_(2)诱导下,髓核细胞的生存率反而提高(P<0.05)。HIF-1α与VEGF的mRNA及蛋白表达亦随CoCl_(2)浓度升高和时间延长而增加(P<0.05)。但在300μmol/L CoCl_(2)的诱导下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期。结论CoCl_(2)对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关,总体成逐渐升高趋势。本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法,可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考。 展开更多
关键词 氯化钴 椎间盘 髓核细胞 缺氧模型 缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子
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牛膝总皂苷对IL-1β诱导髓核细胞的凋亡及炎性损伤的影响
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作者 李硕夫 刘宏哲 +4 位作者 张嘉麟 杨雷 陈龙 郭彦涛 刘笑蓉 《湖南中医药大学学报》 CAS 2023年第9期1591-1597,共7页
目的通过观察髓核细胞(nucleus pulposus cell,NPC)的凋亡、炎症及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢研究不同浓度牛膝总皂苷(achyranthes bidentata saponin,ABS)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导人源NPC损伤的... 目的通过观察髓核细胞(nucleus pulposus cell,NPC)的凋亡、炎症及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢研究不同浓度牛膝总皂苷(achyranthes bidentata saponin,ABS)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导人源NPC损伤的保护作用。方法通过IL-1β诱导建立NPC退变模型,随机将细胞分为正常组、模型组(10 ng/mL IL-1β)、ABS低剂量组(10 ng/mL IL-1β+3μg/mL ABS)、ABS中剂量组(10 ng/mL IL-1β+10μg/mL ABS)及ABS高剂量组(10 ng/mL IL-1β+30μg/mL ABS),干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,采用Tunel法和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X protein,Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-xl(B-cell lymphoma-xl,Bcl-xl)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(recombinant a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-5,ADAMTS-5)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组NPC活力显著下降(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),Bax、Caspase-3、COX-2、MMP-3和ADAMTS-5蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-xl蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,不同浓度的ABS处理后,NPC活力显著上升(P<0.05),凋亡率减少(P<0.05),Bax、Caspase-3、COX-2、MMP-3和ADAMTS-5蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-xl蛋白表达升高(P<0.05)。结论ABS可以通过抑制由IL-1β诱导引起的NPC凋亡、炎症反应、ECM降解,促进细胞增殖和活性,对NPC产生保护作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3、ADAMTS-5、MMP-3及COX-2表达,促进Bcl-xl表达相关。 展开更多
关键词 炎性损伤 牛膝总皂苷 髓核细胞 细胞凋亡 椎间盘退行性变性
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小鼠髓核细胞体外衰老模型的建立及评价
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作者 甘延池 何嘉辉 +7 位作者 龚焱 程招军 尚奇 陈弘林 沈耿杨 梁德 江晓兵 任辉 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期808-814,共7页
目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型.方法:取8周龄C57BU6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定.... 目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型.方法:取8周龄C57BU6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定.取不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L)的叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)干预NPCs,采用CCK8法检测干预2h、4h后的细胞活性,筛选TBHP的最佳干预浓度及时间.应用最佳干预浓度TBHP、最佳干预时间干预P1代NPCs后换成完全培养基继续培养24h、48h、72h,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associatedβ-galactosidase staining,SA-β-gal)检测各时间点的衰老NPCs阳性率,观察不同时间点NPCs的衰老变化.将P2代NPCs分为对照组和模型组,对照组在完全培养基中培养,模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测两组细胞衰老相关基因p53、p21、p16以及Aggrecan、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)mRNA表达,免疫印迹法(Western blot,WB)检测Aggrecan、Collagen Ⅱ、MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达水平.结果:分离培养的细胞高表达Aggrecan,为NPCs.TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,最佳干预时间为4h.在100μmol/L TBHP干预4h后培养24h、48h、72h,NPCs的SA-β-gal染色阳性率均显著性增加(P<0.05),三个时间点间无统计学差异(P>0.05),后续模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养24h,对照组培养相同时间.RT-qPCR检测模型组p53、p21、p16、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ mRNA表达较对照组显著性降低(P<0.05);WB检测模型组MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ蛋白表达较对照组显著性降低(P<0.05).结论:采用TBHP诱导能成功构建小鼠NPCs体外衰老模型,可为椎间盘退行性变的发病机制研究提供良好的研究样本. 展开更多
关键词 髓核细胞 叔丁基过氧化氢 衰老 小鼠
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缺氧诱导因子1α调控wnt/β-catenin信号通路对常氧条件下大鼠髓核细胞衰老的作用及机制
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作者 雷淼 邹略滔 +3 位作者 蔡伟业 董伟 江维 胡侦明 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期815-822,共8页
目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制.方法:取5只4周龄雌性SD大鼠,提取鼠尾髓核原代细胞进行研究.(1)将髓核细胞分为5组:转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理... 目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制.方法:取5只4周龄雌性SD大鼠,提取鼠尾髓核原代细胞进行研究.(1)将髓核细胞分为5组:转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理髓核细胞]、空载腺病毒组(用空载腺病毒处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、空载siRNA组(用空载siRNA处理髓核细胞)、敲减HIF-1α组(用siRNA敲减HIF-1α处理髓核细胞),在常氧下培养48h后,免疫蛋白印迹(western blot,WB)检测HIF-1α和衰老相关基因p53、p21、p16,β-gal染色检测细胞衰老,评估常氧条件下HIF-1α对于髓核细胞衰老的影响.(2)取髓核细胞,分为空载腺病毒组、过表达HIF-1α组、空载siRNA组、敲减HIF-1α组,处理方式同前,在常氧下培养48h后,WB检测HIF-1α、GSK-3β和β-catenin通路的表达.取髓核细胞,分为对照组(用PBS处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、XAV-939组(用XAV-939处理髓核细胞)、XAV-939+过表达HIF-1α组(用XAV-939+载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞),WB检测HIF-1α、p53、p21、p16和wnt/β-catenin的表达,β-gal染色检测细胞衰老,以检测HIF-1α与wnt/β-catenin信号通路的关系以及对髓核细胞衰老的影响.结果:(1)腺病毒转染HIF-1α后,与转染对照组和空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05).小干扰RNA转染HIF-1α后,与转染对照组和空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05).WB结果显示,与空载腺病毒组相比过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05),而p53、p21和p16表达降低(P<0.05),与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05),而p53和p16表达增加(P<0.05).β-gal染色显示,在常氧条件下培养48h,与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组衰老细胞降低(P<0.05),与空载siRNA组相比,敲减HIF-1α组衰老细胞数量则增加(P<0.001).(2)与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组β-catenin表达升高(P<0.01),同时GSK-3β表达降低(P<0.05).与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.0001),同时GSK-3β表达升高(P<0.05).与对照组相比,XAV-939组β-catenin表达降低(P<0.001),p53、p21和p16的表达升高,XAV-939+过表达HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.05),p21表达升高(P<0.05).与过表达HIF-1α组相比XAV-939+过表达HIF-1α组衰老细胞数增加(P<0.001),与对照组相比过表达HIF-1α组的细胞核内β-catenin表达更多,而XAV-939组和XAV-939+过表达HIF-1α组则相对较少(P<0.05).结论:HIF-1α通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制常氧条件培养下大鼠髓核细胞的衰老. 展开更多
关键词 缺氧诱导因子1Α WNT/Β-CATENIN信号通路 氧气浓度 髓核细胞衰老
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脂肪间充质干细胞修复氧化损伤髓核细胞机制研究
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作者 段嘉豪 李兆勇 +4 位作者 陈龙 刘恩旭 李硕夫 杨雷 杨少锋 《湖南中医药大学学报》 CAS 2023年第8期1408-1414,共7页
目的探究脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADSC)修复氧化损伤髓核细胞(nucleus pulposus cell,NPC)的作用机制。方法实验分为NPC组、ADSC组、NPC+ADSC组、H2O2+NPC+ADSC组、H2O2+NPC组5组。采用H2O2构建NPC氧... 目的探究脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADSC)修复氧化损伤髓核细胞(nucleus pulposus cell,NPC)的作用机制。方法实验分为NPC组、ADSC组、NPC+ADSC组、H2O2+NPC+ADSC组、H2O2+NPC组5组。采用H2O2构建NPC氧化损伤模型;SA-β-Gal染色分析NPC衰老程度;流式细胞仪检测NPC氧化损伤水平;Western blot检测ADSC中CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达水平,以及NPC中CollagenⅡ、p53、p21、TGF-β1、Smad2、p-Smad2蛋白表达水平;qPCR检测ADSC中CollagenⅡ、Aggrecan mRNA表达水平,以及NPC中CollagenⅡ、p53、p21、TGF-β1、Smad2 mRNA表达。结果与H2O2+NPC组相比较,H2O2+NPC+ADSC组的NPC衰老数量减少(P<0.05),NPC氧化损伤减轻(P<0.05),p53、p21蛋白和基因表达下降(P<0.05),CollagenⅡ、TGF-β1、p-Smad2蛋白和基因表达升高(P<0.05)。与ADSC组相比,NPC+ADSC组CollagenⅡ、Aggrecan基因和蛋白表达升高(P<0.05)。结论ADSC与NPC共培养不仅可以促进ADSC类髓核化,而且ADSC可修复氧化损伤的NPC,抑制其衰老,该过程可能与调控TGF-β1/Smad2信号通路有关。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 髓核细胞 氧化损伤 细胞衰老 TGF-β1/Smad2信号通路
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lncRNA HOTAIR促椎间盘髓核细胞凋亡的机制研究
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作者 艾力夏提·艾热提 马志刚 李洪伟 《局解手术学杂志》 2023年第9期764-770,共7页
目的研究长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)对椎间盘髓核细胞凋亡的调控作用。方法培养人椎间盘髓核细胞系(HNPC),并将HNPC细胞随机分为对照组(Ctrl组)、晚期糖基化终末产物(AGE)组(AGE组)、微小RNA(microRNA,miR)-22的拟似... 目的研究长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)对椎间盘髓核细胞凋亡的调控作用。方法培养人椎间盘髓核细胞系(HNPC),并将HNPC细胞随机分为对照组(Ctrl组)、晚期糖基化终末产物(AGE)组(AGE组)、微小RNA(microRNA,miR)-22的拟似物组(mimic组)、mimic的阴性对照组(mimic-NC组)、lncRNA HOTAIR过表达组(HOTAIR组)、过表达质粒的空载体组(Vector组)、HOTAIR联合mimic处理组(HOTAIR+mimic组)、HOTAIR联合核苷酸结合寡聚结构域样受体家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)的抑制剂mcc950处理组(HOTAIR+mcc950组)。qRT-PCR法检测miR-22和lncRNA HOTAIR的表达。双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA HOTAIR和miR-22以及miR-22和NLRP3的关系。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。流式细胞术和Hoechst 33342染色检测HNPC细胞的凋亡水平。结果与Ctrl组比较,AGE组lncRNA HOTAIR及NLRP3、Caspase1、含半胱天冬氨酸蛋白酶激活和招募结构域结构的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)均上调,细胞凋亡增加,miR-22表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);lncRNA HOTAIR可以和miR-22的碱基序列结合,且miR-22能和NLRP33'UTR的碱基序列结合。与Vector组比较,HOTAIR组的lncRNA HOTAIR及NLRP3、Caspase1、ASC蛋白表达上调,细胞凋亡增加,miR-22表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与HOTAIR组比较,HOTAIR+mimic组的miR-22表达上调,NLRP3、Caspase1、ASC蛋白表达均下调,细胞凋亡数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与HOTAIR组比较,HOTAIR+mcc950组的lncRNA HOTAIR和miR-22表达差异不显著(P>0.05),NLRP3、Caspase1、ASC蛋白表达下调,细胞凋亡数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过靶向调控miR-22激活NLRP3炎症小体促进椎间盘髓核细胞凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA HOX转录反义RNA miRNA-22 核苷酸结合寡聚结构域样受体家族Pyrin域蛋白3 椎间盘髓核细胞 凋亡
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miR-149-3p调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎性反应的影响 被引量：2
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作者 王惟达 蒋林 史桂霞 《河北医药》 CAS 2023年第4期513-517,共5页
目的探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,... 目的探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,转染miR-NC)、IL-1β+miR-149-3p组(IL-1β处理,转染miR-149-3p)、IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组(IL-1β和通路激活剂Anisomycin处理,转染miR-149-3p)。采用qRT-PCR检测miR-149-3p相对表达水平;MTT、流式细胞术实验检测细胞增殖和凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II/LC3I、JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8表达水平。结果IL-1β组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于Con组,凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显高于Con组(P<0.05)。IL-1β+miR-149-3p组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显高于IL-1β+miR-NC组(P<0.05),凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组的p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达、凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平明显高于IL-1β+miR-149-3p组,细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于IL-1β+miR-149-3p组(P<0.05)。结论上调miR-149-3p能促进IL-1β诱导的髓核细胞增殖,抑制细胞凋亡、自噬和炎性反应,其作用机制可能与激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 miR-149-3p JNK/p38 MAPK信号通路 髓核细胞 凋亡 自噬 炎症反应
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