鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量：53

1

作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页

利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。

关键词 新城疫 F基因 鸡il-2 重组DNA疫苗

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鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用 被引量：16

2

作者 姜永厚 刘忠贵 +2 位作者 陈奖励 宋秀龙 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期22-24,共3页

利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2... 利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 鸡il-2 佐剂 基因疫苗 免疫

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重组鸡IL-2作为传染性法氏囊病疫苗免疫增强剂对鸡细胞免疫水平的影响 被引量：15

3

作者 李宏梅 郭慧君 +1 位作者 李祥瑞 汪志楷 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期13-14,共2页

关键词 重组鸡il-2 传染性法氏囊病 疫苗 免疫增强剂 细胞免疫 免疫保护力

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鸡IL-2基因的克隆及序列测定 被引量：15

4

作者 陈奖励 王欢 +4 位作者 宋英晖 宋秀龙 陈红岩 姜永厚 卢景良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第4期11-13,共3页

应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载... 应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术 ,参照 Sundick发表的鸡白细胞介素 2 (IL- 2 ) c DNA基因序列 ,利用自行设计合成的 1对引物 ,从 Con A活化的 5周龄 HWL - SPF鸡脾细胞中 ,扩增出长 4 4 5bp的鸡IL- 2 c DNA基因 ,以 p UC119为载体 ,克隆了扩增片段 ,经酶切鉴定及 DNA序列测定 ,确认为鸡 IL- 2基因 ,该序列与 Sundick报道的结果一致。对氨基酸的比较发现 ,鸡 IL - 2与牛 IL - 2和 IL - 15之间分别存在着 2 4 %及4 4 %的同源性 ,该基因系国内首次获得经序列测定证实的鸡 IL- 2 c DNA基因 ,这为今后进一步进行鸡 IL- 展开更多

关键词 鸡il-2 分子克隆 RT-PCR 免疫传剂 预防接种

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重组鸡IL-2增强鸡四联灭活苗免疫效果的研究 被引量：18

5

作者 费聿锋 钱建飞 +4 位作者 凌雯 李银 张则斌 王贵升 李祥瑞 《畜牧与兽医》 北大核心 2004年第4期9-11,共3页

使用在原核表达系统中表达的重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 )蛋白 ,经过初步的分离纯化 ,与鸡新城疫 禽流感 法氏囊 传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用 ,检测其对疫苗的免疫增强效果。试验共分 5组 ,每组 1 0只鸡。其中对照组只注射... 使用在原核表达系统中表达的重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 )蛋白 ,经过初步的分离纯化 ,与鸡新城疫 禽流感 法氏囊 传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用 ,检测其对疫苗的免疫增强效果。试验共分 5组 ,每组 1 0只鸡。其中对照组只注射四联油乳剂灭活苗 ;4个试验组 ,在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL 2蛋白 0 0 5mg、 0 0 1mg、 0 1 5mg、 0 2 0mg。试验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗 0 5mL。采用HA、HI试验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明 :重组鸡IL 2对该四联油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用。以第 3、 4组的增强效果较为明显 ,其中对鸡新城疫病毒和禽流感抗原的抗体效价 ,与对照组相比分别提高 2 42 8和 2 2 3 0个滴度。重组鸡IL 2在使用的过程中 ,没有发现任何毒副作用 ,证明是一种安全高效的免疫增强剂。 展开更多

关键词 重组鸡il-2 鸡 四联灭活苗 禽流感 新城疫 抗体 免疫增强剂

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鸡IL-2基因的克隆及序列测定 被引量：18

6

作者 陈洪岩 刘胜旺 +2 位作者 陈奖励 张宝山 卢景良 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第7期5-7,共3页

根据已发表的鸡白细胞介素２（ＩＬ２）基因序列设计引物，用ＲＴＰＣＲ方法从新城疫病毒感染的雏鸡脾淋巴细胞培养物中扩增出鸡的ＩＬ２基因ｃＤＮＡ，并进行序列测定，为进一步表达鸡ＩＬ２并深入研究其功能奠定了基础。

关键词 鸡il-2基因 克隆 序列测定

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鸡新城疫系疫苗诱导鸡IL-2基因转录及cDNA克隆的研究 被引量：2

7

作者 李银聚 程相朝 +1 位作者 吴庭才 张春杰 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第9期69-72,共4页

　应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的... 　应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列,与已发表的IL-2基因的同源性分别为97.7%～99.8%和95.1%～99.3%。其中第8位、68位和130位氨基酸(分别是L,V和S)的变异是其他品种鸡所没有的。 展开更多

关键词 鸡il-2基因 转录 克隆 序列分析

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重组鸡IL-2的抗球虫作用 被引量：17

8

作者 谢昆 李祥瑞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第8期7-9,共3页

鸡白细胞介素2(Ch IL-2)是一种重要的细胞因子,对Ch IL-2的抗球虫作用做了初步研究,分别在14日龄和21日龄给实验雏鸡胸部肌肉注射不同剂量的重组Ch IL-2蛋白,28日龄口服接种1×105个活球虫卵囊,结果表明,重组Ch IL-2蛋白能降低相对... 鸡白细胞介素2(Ch IL-2)是一种重要的细胞因子,对Ch IL-2的抗球虫作用做了初步研究,分别在14日龄和21日龄给实验雏鸡胸部肌肉注射不同剂量的重组Ch IL-2蛋白,28日龄口服接种1×105个活球虫卵囊,结果表明,重组Ch IL-2蛋白能降低相对卵囊产量、减少盲肠病变、提高相对增重。其中以注射250μg重组Ch IL-2蛋白的试验组抗球虫效果最好,相对卵囊产量为23.26%,盲肠病变记分分别为0.4,相对增重率为97.80%,综合抗球虫指数(AC I)达到192.8。抗球虫效果良好,明显的优于其他试验组。 展开更多

关键词 鸡il-2 球虫病

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鸡IL-2基因的克隆与序列分析 被引量：1

9

作者 舒秀伟 宣华 卫广森 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期555-560,共6页

根据GenBank上登录的鸡IL2基因序列设计合成了1对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RTPCR。结果显示,扩增出一450bp的目的片段,将该基因片段克隆到pBluescriptⅡKS(+)载体上,经酶切鉴定及序列测定证实为鸡IL2基... 根据GenBank上登录的鸡IL2基因序列设计合成了1对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RTPCR。结果显示,扩增出一450bp的目的片段,将该基因片段克隆到pBluescriptⅡKS(+)载体上,经酶切鉴定及序列测定证实为鸡IL2基因,与GenBank上已知的鸡IL2基因相比,其在编码氨基酸的第49位有一个氨基酸的缺失,序列分析表明,该基因是目前发现的在该位置唯一有氨基酸缺失的鸡IL2基因。另外,它与Broiler、SC和Xiaoshan鸡在编码的氨基酸上完全一致,具有较近的亲缘关系,而与Kestrel来航鸡、来航SPF鸡、Obese、Silky、Chenren和Xianju鸡在编码的氨基酸上有1～4个氨基酸的差异。 展开更多

关键词 鸡il-2基因 反转录聚合酶链反应 克隆 序列分析

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鸡IL-2全基因和去信号肽基因的酵母表达研究 被引量：1

10

作者 龚婷 李银聚 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2009年第3期1-6,共6页

根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计三条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429bp的ChIL-2全长基因cDNA和363bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA。分别克隆到酵母表达载体pPICZαA中,并分别转化巴斯... 根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计三条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429bp的ChIL-2全长基因cDNA和363bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA。分别克隆到酵母表达载体pPICZαA中,并分别转化巴斯德毕赤酵母X-33中,经甲醇诱导,SDS-PAGE检测,在28kD和24kD处有两条清晰的蛋白带,相同条件下pPICZαA-△SIL-2表达量较高。RNAstructure软件分析表明,pPICZαA-IL-2的序列形成了较为稳定的二级结构,不利于翻译,证明信号肽序列的存在对ChIL-2基因在酵母细胞中的表达有一定的影响。 展开更多

关键词 鸡il-2 信号肽 酵母表达 MRNA二级结构

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鸡IL-2/NDV-F蛋白抗原表位融合基因的表达及免疫性初探

11

作者 许发芝 吴胜国 余为一 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第2期230-235,共6页

研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建... 研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建成ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因并克隆入PET-32a载体,经测序鉴定后,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,Ni2^+亲和柱纯化,表达产物经SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA检测和鉴定。结果表明,实验成功构建并克隆了ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因,嵌合基因在大肠杆菌中表达的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白分子量约为48kD,表达量约占菌体蛋白总量的45%,纯化后的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白能与感染NDV的鸡血清发生反应。上述结果证明ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有较强的特异性和免疫原性。 展开更多

关键词 鸡il-2基因 NDV-F蛋白 多抗原表位 融合蛋白

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鸡IL-2在禽病防治中的应用研究进展

12

作者 王衡 李广兴 《甘肃畜牧兽医》 2007年第2期38-41,共4页

关键词 鸡il-2 禽病防治 脾淋巴细胞 应用 禽白血病病毒 生物活性 白细胞介素2 细胞因子

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鸡IL-2受体α亚基成熟蛋白基因的克隆及其胞外段的原核表达

13

作者 涂真珍 李祥瑞 +1 位作者 徐立新 严若峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期524-528,共5页

以鸡脾淋巴细胞总RNA为模板，采用RT—PCR方法克隆了鸡白细胞介素-2受体α亚基（ChIL-2Rα）编码区基因。将ChIL-2Rα胞外段基因克隆到pET-32a（＋）中，获得重组质粒pET32a—exChIL-2Rα，转化宿主菌E．coli Rosseta^TM（DE3）后，经I... 以鸡脾淋巴细胞总RNA为模板，采用RT—PCR方法克隆了鸡白细胞介素-2受体α亚基（ChIL-2Rα）编码区基因。将ChIL-2Rα胞外段基因克隆到pET-32a（＋）中，获得重组质粒pET32a—exChIL-2Rα，转化宿主菌E．coli Rosseta^TM（DE3）后，经IPTG诱导表达的融合蛋白大小约为34ku。序列分析发现，鸡IL-2Rα编码区基因与GenBank上已登录序列的核苷酸同源性为99．2％，氨基酸同源性为99．5％。ChIL-2Rα与其他哺乳动物IL-2Rα在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为29．6％～54．5％和18．8％～28．0％。表明，禽类IL-2Rα与哺乳类的差异较大。 展开更多

关键词 鸡il-2Rα 克隆 胞外段 原核表达

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鸡IL-2和IL-15基因核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用

14

作者 胡慧琼 王红宁 袁斌 《中国家禽》 北大核心 2006年第24期60-60,共1页

根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物，采用RT—PCIL法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因，与pcDNA3．1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15，研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显... 根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物，采用RT—PCIL法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因，与pcDNA3．1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15，研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示，免疫后第10d，pDNAIL-15＋AI灭活疫苗组和pDNAIL-2＋AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组（P〈O．05）。免疫后第10d，pDNAIL-15＋AI灭活疫苗组CD4＋淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2＋AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组（P〈0．05）；免疫后第23d，pDNAIL-2＋AI灭活疫苗组CD4＋淋巴细胞百分率显著高于pDNAIL-15＋AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组（P〈0.05）。证实pDNAIL-2和pDNAIL-15能提高禽流感灭活疫苗的免疫效果． 展开更多

关键词 免疫增强作用 真核表达质粒 鸡il-2 禽流感疫苗 禽流感灭活疫苗 基因 外周血淋巴细胞

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鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响 被引量：20

15

作者 杨发龙 岳华 贾文祥 《中国家禽》 北大核心 2005年第19期17-20,共4页

为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使... 为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响;③人工感染法氏囊病的防治试验。在攻毒前后注射IL-2,均可明显降低发病率和死亡率。本研究结果表明,鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力,与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。 展开更多

关键词 鸡白细胞介素2 体液免疫 细胞免疫 巨噬细胞 传染性法氏囊病 白细胞介素 免疫功能 雏鸡 鸡il-2 腹腔巨噬细胞

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共表达鸡IBDV VP2和IL-2基因的重组毕赤酵母的构建及免疫原性

16

作者 丁轲 余祖华 +3 位作者 张春杰 程相朝 刘一尘 王臣 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期74-78,共5页

通过重叠延伸PCR扩增IL2-VP2串联基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆正向插入到毕赤酵母表达质粒pPICZαA中,经PCR和双酶切鉴定表明成功构建了酵母重组表达载体pPICZαA-IL2-VP2。将该重组质粒线性化后电击转化入感受态毕赤酵母X-33菌株,... 通过重叠延伸PCR扩增IL2-VP2串联基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆正向插入到毕赤酵母表达质粒pPICZαA中,经PCR和双酶切鉴定表明成功构建了酵母重组表达载体pPICZαA-IL2-VP2。将该重组质粒线性化后电击转化入感受态毕赤酵母X-33菌株,构建成分泌型表达IL2-VP2的酵母工程菌株。经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE、Western-blot活性检测分析表明IL2-VP2基因长度为1.85kb,包含缺失了TAA终止密码子的IL-2基因和缺失了ATG起始密码子的VP2基因,两个基因之间以高度柔韧性的(Gly-Gly-Gly-Ser)编码核苷酸相连接,并在该体系中得到分泌表达,分子量约为50kD,且表达产物对传染性法囊病毒具有较好的反应原性。 展开更多

关键词 重叠延伸PCR 鸡il-2 IBDV VP2 融合表达 毕赤酵母

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鸡新城疫病毒F基因与鸡白介素-2（IL-2）基因在真核载体中串连表达及免疫原性

17

《中国畜牧兽医文摘》 2014年第1期100-100,共1页

为了探索鸡白介素-2（IL-2）对鸡新城疫病毒（NDV）F蛋白免疫效果的增强作用，本研究通过重叠延伸PCR技术（SOE—PCR）利用连接子（G2SG3S）将鸡IL-2基因和鸡NOVF基因串连，

关键词 新城疫病毒F基因 鸡新城疫病毒 白介素 免疫原性 真核载体 鸡il-2基因 PCR技术 增强作用

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鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达 被引量：11

18

作者 许健 樊拥军 +3 位作者 李龙 万旺军 李建荣 于涟 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期339-342,共4页

目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕... 目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果　SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论　表明重组鸡IL 展开更多

关键词 鸡il-2 pPIC9 毕赤酵母 免疫增强剂

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鸡白细胞介素-2的研究进展及应用前景 被引量：2

19

作者 闫峰宾 康相涛 王彦彬 《广东农业科学》 CAS CSCD 2005年第4期74-77,共4页

鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,是鸡体内一类重要的细胞因子,在机体的免疫应答中起重要作用。近年来,随着鸡的IL-2基因克隆成功,使鸡的IL-2研究及应用得到了一定的发展,同时作为免疫增强剂和构建新型基因工程疫... 鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,是鸡体内一类重要的细胞因子,在机体的免疫应答中起重要作用。近年来,随着鸡的IL-2基因克隆成功,使鸡的IL-2研究及应用得到了一定的发展,同时作为免疫增强剂和构建新型基因工程疫苗呈现出一定的应用前景。 展开更多

关键词 鸡il-2 研究进展 基因克隆 生物活性

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鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展 被引量：1

20

作者 李杏媛 王海富 张惠清 《中国家禽》 北大核心 2010年第13期41-43,共3页

白细胞介素-2(IL-2)是鸡体内一类重要的细胞因子,参与机体的各项免疫应答作用。近年来,随着鸡IL-2基因克隆的成功,其分子生物学和疾病防治应用等方面的研究也进一步加深。文章对其分子生物学特性和疾病防治应用研究进行了综述。

关键词 分子生物学特性 白细胞介素-2 鸡il-2 疾病防治 应用 细胞因子 免疫应答 基因克隆

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