一例鹅坦布苏病毒病的诊断与防治

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作者 张红 田秋丰 +4 位作者 陈志峰 黄宇翔 董佳强 苗艳 杨昊天 《家禽科学》 2023年第9期51-52,共2页

鹅坦布苏病毒病是由坦布苏病毒感染引起的一种急性传染病,其主要特征为脑炎样神经症状,蛋鹅卵巢出血、坏死、产蛋量下降。2010年坦布苏病毒病在我国首次发生以来,严重影响我国养鹅业健康发展。本文通过对一例鹅坦布苏病毒病的鉴别诊断... 鹅坦布苏病毒病是由坦布苏病毒感染引起的一种急性传染病,其主要特征为脑炎样神经症状,蛋鹅卵巢出血、坏死、产蛋量下降。2010年坦布苏病毒病在我国首次发生以来,严重影响我国养鹅业健康发展。本文通过对一例鹅坦布苏病毒病的鉴别诊断及其的防治措施进行概述,为鹅坦布苏病毒的进一步研究提供参考。 展开更多

关键词 神经症状 急性传染病 鹅坦布苏病毒 养鹅业 诊断与防治 蛋鹅 防治措施 坦布苏病毒病

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鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析 被引量：3

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作者 黄欣梅 赵冬敏 +3 位作者 刘宇卓 杨婧 韩凯凯 李银 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期150-154,共5页

【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入... 【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入Flag标签序列和酶切位点,采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域III基因(EIII),然后与p ET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达,并以Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】PCR扩增获得携带Flag标签序列的EIII基因片段约430 bp,将其插入p ET32a载体可成功构建重组质粒p ET32a-EIII。阳性重组菌经IPTG诱导表达5 h即可得到融合蛋白,分子质量约33.0 k Da,主要以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域Ⅲ能在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于研制GTMUV诊断抗原和亚单位疫苗。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 E蛋白 结构域Ⅲ 原核表达 免疫原性

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鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化 被引量：3

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作者 赵冬敏 黄欣梅 +5 位作者 刘宇卓 张敬峰 韩凯凯 谢星星 周晓波 李银 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期11-14,共4页

根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融... 根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融合蛋白(His-NS1),其分子质量约分别为44,58 kDa,均在诱导后6 h达到表达量高峰。分析显示,2种融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性后均可获得单一、高表达量的目的蛋白,为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS1蛋白的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 NS1蛋白 原核表达

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鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ的原核表达及免疫原性鉴定 被引量：2

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作者 赵冬敏 黄欣梅 +5 位作者 刘宇卓 韩凯凯 杨婧 谢星星 刘晓燕 李银 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2259-2263,共5页

【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4... 【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4t-1载体连接,转入大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白,并以Western blotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的E1基因片段为411 bp,将其插入p GEX-4t-1载体可构建重组表达质粒p GEX-4t-1-EI。阳性重组菌经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,融合蛋白的表达量达最高峰,且以包涵体形式存在,分子量约41.0 k Da。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于GTMUV血清学检测试剂盒的研发。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 E蛋白 结构域Ⅰ 原核表达 免疫原性

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鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达及免疫学鉴定 被引量：2

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作者 赵冬敏 黄欣梅 +5 位作者 刘宇卓 韩凯凯 杨婧 谢星星 刘晓燕 李银 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期619-623,共5页

为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。... 为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。将合成的基因片段克隆入pGEX-4t-1原核表达载体中,构建重组表达载体pGEX-EII并转化至BL21(DE3)中。通过优化表达条件获得重组蛋白质并进行免疫学鉴定。结果显示,重组蛋白质分子量约为4.4×104,Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明重组蛋白质具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 囊膜蛋白

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鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和Ⅱ在大肠杆菌中的表达及鉴定 被引量：1

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作者 赵冬敏 黄欣梅 +4 位作者 刘宇卓 韩凯凯 谢星星 刘晓燕 李银 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期590-594,共5页

为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和West... 为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示,PCR扩增得到约900 bp的目的片段,经鉴定成功构建重组表达载体pET28a-E-I/II。重组菌在IPTG诱导4 h后在37 000处出现目的蛋白质并且表达量达到高峰。经超声波破碎后SDS-PAGE分析显示,融合蛋白质以包涵体形式存在。Western-blot结果显示,重组蛋白质与FLAG单抗和E蛋白质阳性血清均可发生特异性反应。表明鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中成功表达,经鉴定重组蛋白质具有良好的免疫反应性。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 E蛋白质 结构域Ⅰ和Ⅱ 大肠杆菌 DOMAINS Ⅰ and Ⅱ

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鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析 被引量：1

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作者 韩凯凯 李银 +5 位作者 黄欣梅 赵冬敏 刘宇卓 刘青涛 谢星星 安凤娇 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1704-1709,共6页

通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5对其纯化,并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体p ET32a中,获得重组表... 通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5对其纯化,并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-NS5,经双酶切鉴定及测序正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白最终经SDS-PAGE及Western-blotting鉴定。结果显示,NS5融合蛋白分子质量约为120 ku,在诱导后5 h达到表达量高峰,融合蛋白以包涵体形式存在,Western-blotting显示原核表达的蛋白可被兔抗鹅坦布苏病毒血清特异性识别,表明以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒 NS5蛋白 原核表达

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鹅坦布苏病毒病的防控措施 被引量：1

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作者 崔哲宇 全惠兰 《中国动物保健》 2022年第3期61-62,共2页

鹅坦布苏病毒病是由黄病毒科黄病毒属的坦布苏病毒感染引发的以产蛋阶段的成年鹅产蛋量突然下降,雏鹅出现典型神经症状的一种急性病毒性传染性疾病。该类病毒能够威胁多种水禽类动物,传播速度相对较快,造成的危害较为严重。为了有效防... 鹅坦布苏病毒病是由黄病毒科黄病毒属的坦布苏病毒感染引发的以产蛋阶段的成年鹅产蛋量突然下降,雏鹅出现典型神经症状的一种急性病毒性传染性疾病。该类病毒能够威胁多种水禽类动物,传播速度相对较快,造成的危害较为严重。为了有效防范鹅坦布苏病毒病的发生,保证养殖安全,就需要加强流行病学、临床症状、解剖特征、诊断方法以及防控措施的有效总结,确保养殖场能够结合该类疾病的发生流行特征,构建针对性的防治措施,保证在短时间内控制病情,避免带来严重的经济损失。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒病 流行特点 防控措施

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鹅星状病毒鹅细小病毒和鹅坦布苏病毒三重PCR检测方法的建立与应用 被引量：7

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作者 张红 田秋丰 +13 位作者 王志强 黄宇翔 邹跃 李鑫 吕明哲 杨昊天 马志刚 霍明东 董佳强 杨坤 魏念冬 苗艳 钟鹏 陈志峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期163-169,共7页

为建立一种可同时检测鹅星状病毒(GoAstV)、鹅细小病毒(GPV)和鹅坦布苏病毒(TMUV)的方法,根据GenBank上公布的GoAstV、GPV和TMUV的保守基因序列设计3对特异性引物,通过优化反应条件和反应体系,建立了能够同时检测GoAstV、GPV和TMUV的三... 为建立一种可同时检测鹅星状病毒(GoAstV)、鹅细小病毒(GPV)和鹅坦布苏病毒(TMUV)的方法,根据GenBank上公布的GoAstV、GPV和TMUV的保守基因序列设计3对特异性引物,通过优化反应条件和反应体系,建立了能够同时检测GoAstV、GPV和TMUV的三重PCR方法,并初步应用于临床。结果显示:所建立的三重PCR检测方法能特异性扩增GoAstV、GPV和TMUV三种病毒的目的片段,对鹅副黏病毒、禽流感病毒、禽腺病毒和鹅圆环病毒的检测结果均为阴性,对GoAstV、GPV和TMUV的最低检出浓度分别为1.26×10^(5)、1.26×10^(3)和1.26×10^(5)copies/μL。利用三重PCR和单项PCR方法同时对黑龙江省部分鹅场的32份临床样品进行检测,3种病毒的阳性检出率分别为56.25%、6.25%和6.25%,2种方法的检测结果一致。结果表明,本试验中建立的三重PCR检测方法快捷、敏感、特异,能够用于GoAstV、GPV和TMUV的流行病学调查和临床检测。 展开更多

关键词 鹅星状病毒 鹅细小病毒 鹅坦布苏病毒 三重PCR

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鹅星状病毒和鹅坦布苏病毒双重nano-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

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作者 苗艳 朱庆贺 +10 位作者 陈亮 兰世捷 李丹 冯万宇 沈思思 张蕾 钟鹏 史同瑞 金振华 张红 刘秋瑾 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期952-956,共5页

为快速鉴别诊断鹅星状病毒(GoAstV)和鹅坦布苏病毒(TMUV),本研究根据GenBank上公布的GoAstV和TMUV基因保守区设计了2对特异性引物,结合金纳米材料,通过对反应条件的优化,建立了一种可同时检测这两种病毒的双重nano-PCR诊断方法。结果显... 为快速鉴别诊断鹅星状病毒(GoAstV)和鹅坦布苏病毒(TMUV),本研究根据GenBank上公布的GoAstV和TMUV基因保守区设计了2对特异性引物,结合金纳米材料,通过对反应条件的优化,建立了一种可同时检测这两种病毒的双重nano-PCR诊断方法。结果显示,该方法对鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)、新城疫病毒(NDV)和禽腺病毒(FAdV)这4种鹅常见病毒的扩增结果均为阴性。该方法对GoAstV和TMUV的最低检测浓度分别为1.21×10^(1) copies/μL和1.21×10^(3) copies/μL,敏感性较普通PCR分别高100倍和10倍。对42份临床样品的检测结果显示,共检出GoAstV 13份,TMUV 1份。上述结果表明,本研究建立的双重nano-PCR方法快速、特异、敏感,可用于鹅星状病毒和鹅坦布苏病毒的临床检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 鹅星状病毒 鹅坦布苏病毒 双重nano-PCR

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鹅坦布苏病毒病的诊断与防治 被引量：2

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作者 任国柱 《当代畜牧》 2022年第7期99-100,共2页

鹅坦布苏病毒病是一种新型的病毒性传染病,临床上主要以患病鹅体温显著升高,采食量逐渐下降,严重瘫痪,产蛋率降低为主要特征。该传染病根据临床特征又被称为出血性卵巢炎或者脑炎-卵巢炎综合征。2011年,中国畜牧兽医学会第1届水禽疫病... 鹅坦布苏病毒病是一种新型的病毒性传染病,临床上主要以患病鹅体温显著升高,采食量逐渐下降,严重瘫痪,产蛋率降低为主要特征。该传染病根据临床特征又被称为出血性卵巢炎或者脑炎-卵巢炎综合征。2011年,中国畜牧兽医学会第1届水禽疫病防治研讨会上,我国将该种疾病命名为坦布苏病毒病。笔者结合某养殖场的发病现状,探讨了鹅坦布苏病毒病的诊断与防治过程,希望对广大同行防治该病提供帮助。 展开更多

关键词 鹅坦布苏病毒病 诊断 防治

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