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2015年江西省麻疹疫苗株病毒的快速鉴别 被引量：1
1
作者 龚甜 张艳妮 +2 位作者 施勇 李健雄 周珺 《实验与检验医学》 CAS 2017年第2期174-176,180,共4页
目的运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)快速鉴别2015年麻疹疫苗株病毒。方法用RT-PCR-RFLP方法检测两... 目的运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)快速鉴别2015年麻疹疫苗株病毒。方法用RT-PCR-RFLP方法检测两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本是否含有AflⅡ酶切位点鉴别麻疹疫苗株病毒,同时对标本进行N基因羧基末端450个核苷酸进行序列测定分析,在基因层面进一步证实,以验证RT-PCR-RFLP方法。结果 RT-PCR-RFLP方法鉴定的结果为两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本均能被AflⅡ酶切开,N基因序列测定结果为两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本为麻疹疫苗株病毒A基因型。结论首次为江西省麻疹疫苗株病毒提供实验室证据。 展开更多
关键词 麻疹野病毒 麻疹疫苗株病毒 逆转录多聚酶链式反应 限制性片段长度多态性分析方法
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NF-κB信号通路抑制剂与溶瘤麻疹病毒疫苗株协同抗肺癌的作用及机制 被引量：4
2
作者 夏茂 孟刚 董杰 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期245-253,共9页
背景与目的肺癌已成为我国发病率和死亡率居首位的恶性肿瘤。能自我复制、选择性杀伤肿瘤的溶瘤病毒,是治疗恶性肿瘤的有效策略,而其中溶瘤麻疹病毒疫苗株因其良好的溶瘤效果,且对正常细胞无损伤或微损伤,已进入几项临床试验。本研究旨... 背景与目的肺癌已成为我国发病率和死亡率居首位的恶性肿瘤。能自我复制、选择性杀伤肿瘤的溶瘤病毒,是治疗恶性肿瘤的有效策略,而其中溶瘤麻疹病毒疫苗株因其良好的溶瘤效果,且对正常细胞无损伤或微损伤,已进入几项临床试验。本研究旨在探讨核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路抑制剂与溶瘤麻疹病毒疫苗株协同抗肺癌的作用及机制。方法应用Western blot方法检测MV-Edm感染人肺癌细胞A549和H1299并应用细胞自噬相关的siRNA或者应用NF-кB通路抑制剂PS1145后SQSTM1、p-IκBα、IκBα、PARP及BAX的表达水平,运用流式细胞术分析各组细胞凋亡率的变化,同时采用噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromide,MTT]法检测各组细胞的存活率。结果Western blot结果显示MV-Edm感染人肺癌细胞A549和H1299后,自噬引起NF-κB通路的激活,进而抑制细胞凋亡。抑制细胞自噬可抑制NF-κB通路的激活,MV-Edm感染后p-IκBα表达水平随着感染时间有不同程度的升高,IκBα的表达水平则降低,NF-κB通路抑制剂PS1145可促进人肺癌细胞A549和H1299凋亡(P<0.01),并增强其溶瘤效果。结论NF-κB信号通路抑制剂PS1145与溶瘤麻疹病毒疫苗株联合可促进人肺癌细胞A549和H1299凋亡,并增强其溶瘤效果。 展开更多
关键词 溶瘤麻疹病毒疫苗株 细胞自噬 NF-ΚB通路 细胞凋亡
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宜春市2015年麻疹病毒野病毒感染病例的快速鉴别 被引量：2
3
作者 张红波 莫尚鹏 +4 位作者 陈玉红 罗维 熊英 龚甜 徐烨 《实验与检验医学》 CAS 2017年第2期199-201,共3页
目的引进并运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(RT-PCR-RFLP方法)快速鉴别2015年宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例。方法运用realtime RT-PCR对宜春市400例疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹... 目的引进并运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(RT-PCR-RFLP方法)快速鉴别2015年宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例。方法运用realtime RT-PCR对宜春市400例疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹病毒核酸检测,引进RT-PCR-RFLP方法对麻疹病毒核酸检测阳性咽拭子标本进行检测是否含有AflⅡ酶切位点(疫苗株病毒有,野病毒没有)鉴别疫苗相关麻疹病例。结果麻疹病毒核酸检测阳性标本为9例,阳性率为2.25%;9例麻疹病毒核酸检测阳性标本RT-PCR-RFLP方法检测的结果为均未能被AflⅡ酶切开,为麻疹野病毒感染。结论成功引进和建立宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例的RT-PCR-RFLP快速鉴别方法,并鉴别了2015年宜春市9例麻疹病例均由麻疹病毒野病毒感染引起。 展开更多
关键词 麻疹野病毒 麻疹疫苗株病毒 逆转录多聚酶链式反应 限制性片段长度多态性分析方法
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麻疹病毒疫苗株沪_(191)和宁波麻疹病毒流行株血清交叉中和试验结果分析 被引量：3
4
作者 傅燕 许国章 +4 位作者 董红军 胡逢蛟 马瑞 陆圣诞 焦素黎 《中国疫苗和免疫》 CAS 2013年第1期39-42,共4页
目的分析麻疹病毒疫苗株[上海(沪)191,Shanghai191;S191]的免疫保护性,为探讨有效预防控制麻疹的措施提供参考。方法用微量中和试验测定不同人群血清对麻疹病毒疫苗株(S191)和浙江省宁波市麻疹病毒流行株(Ningbo2008-06)的中和抗体(Neut... 目的分析麻疹病毒疫苗株[上海(沪)191,Shanghai191;S191]的免疫保护性,为探讨有效预防控制麻疹的措施提供参考。方法用微量中和试验测定不同人群血清对麻疹病毒疫苗株(S191)和浙江省宁波市麻疹病毒流行株(Ningbo2008-06)的中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)水平。结果 S191株麻疹减毒活疫苗(Measles Attenuated Live Vaccine,MV)初次免疫(初免)血清,有MV免疫史麻疹患者急性期血清,麻疹患者恢复期血清,应急接种MV前、后血清,对疫苗株的NA几何平均滴度(Geometric MeanTiter,GMT)分别为1∶35.23、1∶4.16、1∶231.74、1∶37.81、1∶61.03;对麻疹病毒流行株的NAGMT分别1∶19.04、1∶2.21、1∶596.62、1∶32.25和1∶67.54。初免血清及有免疫史麻疹患者急性期血清,对疫苗株的NAGMT分别是流行株的1.85倍(t=2.537,P<0.05)和1.88倍(t=-2.696,P<0.05);麻疹患者恢复期血清对流行株的NAGMT是疫苗株的2.57倍(t=-3.054,P<0.05);而应急接种后血清中和疫苗株和流行株的NAGMT差异无统计学意义。小月龄婴儿血清随着月龄增长对疫苗株和流行株的NAGMT均下降,6月龄和8月龄婴儿对流行株的NAGMT分别为1∶2.60和1∶1.24。结论 S191株MV能中和宁波麻疹病毒流行株,只是中和能力略有下降;应急接种能显著增加麻疹NA水平;母传麻疹抗体6月龄后几乎无保护作用;有必要对现行MV免疫策略进行调整。 展开更多
关键词 麻疹病毒疫苗株(沪191) 流行株 中和抗体
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沪_(191)麻疹病毒疫苗株的核蛋白基因分析 被引量：4
5
作者 马雷钧 徐闻青 +2 位作者 徐帆洪 王兵 陈志慧 《中国计划免疫》 2005年第3期175-180,共6页
目的研究沪191(S191)麻疹病毒疫苗株的核蛋白(N)基因.方法将S191株主代病毒(HK33HAM39CEC20)在实验室连续传递11代,从原代鸡胚细胞(CEC)20代连续传至CEC31代.除观察每代病毒培养特性外,还选其中的21、22、25、26、29、30、31代病毒及S19... 目的研究沪191(S191)麻疹病毒疫苗株的核蛋白(N)基因.方法将S191株主代病毒(HK33HAM39CEC20)在实验室连续传递11代,从原代鸡胚细胞(CEC)20代连续传至CEC31代.除观察每代病毒培养特性外,还选其中的21、22、25、26、29、30、31代病毒及S191强毒株(HK33HAM45)、Edmonston(Ed)强毒株(HK28HAM40MRC-55),以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对这些病毒标本的N基因编码区的全长以及羧基末端的450个核苷酸区域进行片段扩增.结果通过N基因的序列分析发现,S191疫苗株与强毒株在N基因上有10～13个核苷酸差异,差异率为0.63%～0.82%.S191株主代病毒在CEC上连续传递11代的过程中,有2个代次病毒的个别核苷酸出现有义突变,分别导致第22代病毒的278位氨基酸Glu→Lys,第26代病毒的341位氨基酸Val→Lys,但这一变化不存在重复性,随着继续传代又恢复到21代的序列水平.结论S191麻疹病毒疫苗株在CEC长期传代过程中,各代次之间的N基因高变区序列一致,包括N基因中与免疫功能有关的3个B细胞表位区域的序列在传代中也无改变,故不可能影响到疫苗的免疫效果. 展开更多
关键词 麻疹病毒疫苗株 核蛋白基因 核苷酸序列
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应用限制性片段长度多态性分析方法鉴别H_1基因型麻疹野病毒感染病例和麻疹疫苗相关病例 被引量：5
6
作者 李立群 余文 +1 位作者 赵智娴 丁峥嵘 《中国疫苗和免疫》 CAS 2012年第5期429-431,472,共4页
目的在云南省应用H1基因型麻疹野病毒鉴定方法,鉴别H1基因型麻疹野病毒感染病例,应用中国麻疹疫苗株病毒鉴定方法,鉴别接种麻疹疫苗后出现的麻疹样病例是否为麻疹疫苗相关病例。方法采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(R... 目的在云南省应用H1基因型麻疹野病毒鉴定方法,鉴别H1基因型麻疹野病毒感染病例,应用中国麻疹疫苗株病毒鉴定方法,鉴别接种麻疹疫苗后出现的麻疹样病例是否为麻疹疫苗相关病例。方法采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法、序列分析方法鉴别8株麻疹病毒。结果应用H1基因型麻疹野病毒RT-PCR-RFLP方法对8份标本进行鉴定,其中5份标本RT-PCR产物经SalI酶切后,被切成两个片段,分别为408个碱基对(base pair,bp)和159bp,显示5个病例是由H1基因型麻疹野病毒引起的。应用中国麻疹疫苗株病毒RT-PCR-RFLP方法对3份标本进行鉴定,其中1份标本RT-PCR产物经Af1II酶切,被切成两个片段,分别为287bp和151bp,显示该病例是由中国麻疹疫苗株病毒引起的。2份标本为非H1a基因亚型的麻疹野病毒。结论应用RT-PCR-RFLP方法对H1基因型麻疹野病毒和麻疹疫苗株病毒的鉴定结果,与麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,N)基因测序分析的结果一致,可以作为快速鉴别H1基因型麻疹野病毒和麻疹疫苗株病毒的方法。 展开更多
关键词 麻疹病毒 逆转录-聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析方法 H1基因型麻疹野病毒 麻疹疫苗株病毒
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表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定 被引量：2
7
作者 张勇侠 陈宗香 +5 位作者 高雅丽 罗心梅 丛聪 康庄 赵婷 刘兰军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期860-868,共9页
以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×... 以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 麻疹病毒沪-191疫苗株 登革病毒(DENV) 非结构蛋白NS1 重组病毒 原位免疫荧光
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