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兔抗人DR5分子多克隆抗体的制备与初步应用 被引量：10
1
作者 白慧玲 裴景堂 +3 位作者 杜耀武 李淑莲 刘广超 马远方 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期634-637,共4页
目的获得兔抗人DR5的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行初步鉴定。方法皮下注射DR5免疫日本大耳白兔,加强免疫得到抗血清,应用蛋白G纯化获得多克隆抗体。对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、细胞凋亡活性等初步鉴定。结果经纯化后的抗体效价... 目的获得兔抗人DR5的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行初步鉴定。方法皮下注射DR5免疫日本大耳白兔,加强免疫得到抗血清,应用蛋白G纯化获得多克隆抗体。对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、细胞凋亡活性等初步鉴定。结果经纯化后的抗体效价为1∶32000;Western blot分析该抗体能够识别相对分子质量26000的sDR5;可以明显导致肿瘤细胞Jurkat凋亡,Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少,Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和诱导肿瘤细胞凋亡活性及机制等实验,为确定DR5分子的组织及细胞分布和定位等提供了有力的工具。 展开更多
关键词 dr5 多克隆抗体 凋亡
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抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量：11
2
作者 白慧玲 赵粤萍 +1 位作者 刘广超 马远方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期514-516,520,共4页
目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jur... 目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用。以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果：获得4株可分泌抗DR5 mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1；腹水mAb效价为1×10^-4-5×10^-6；亲和常数为1×10^9水平，4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论：获得4株抗DR5的mAb，为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。 展开更多
关键词 dr5 单克隆抗体 特性鉴定 亲和常数
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交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究 被引量：6
3
作者 白慧玲 杜耀武 +4 位作者 王雪垠 李淑莲 王靖 刘广超 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期789-792,797,共5页
目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MT... 目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。 展开更多
关键词 交联 JURKAT细胞 抗dr5抗体 凋亡 流式细胞术 免疫印迹
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食管癌细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系 被引量：4
4
作者 刘广超 都景芳 +4 位作者 马远方 王秀英 高荣 高萍 刘世贵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期817-821,共5页
目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细... 目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,但在细胞核没有DR5分布,而且在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达高于铺展者。悬浮的食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性高于铺展者。结论:食管癌细胞表面DR5的表达与细胞铺展状态具有密切的关系,细胞铺展状态的变化直接影响细胞表面DR5的表达分布以及对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。 展开更多
关键词 dr5 功能性抗体 TRAIL 细胞凋亡
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抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用 被引量：8
5
作者 张军 马远方 +1 位作者 刘广超 李淑莲 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期65-68,共4页
探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系HepG2致凋亡的作用。常规培养人肝癌细胞系HepG2,流式细胞术定量分析检测HepG2细胞表面DR5的表达。MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双色标记HepG2细胞,流式细胞术定量分... 探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系HepG2致凋亡的作用。常规培养人肝癌细胞系HepG2,流式细胞术定量分析检测HepG2细胞表面DR5的表达。MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双色标记HepG2细胞,流式细胞术定量分析检测细胞凋亡率;在荧光显微镜下观察mDRA-6对HepG2细胞形态变化的影响。结果显示,HepG2细胞表面有DR5表达,其平均表达百分率为40%。MTT法检测显示在40 mg/L mDRA-6浓度下可杀伤42%的细胞;Hoechst33258染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的经流式细胞术检测显示,3 mg/L的mDRA-6作用HepG2细胞6 h导致24.61%的细胞发生凋亡;在荧光显微镜下可观察到mDRA-6诱导导致HepG2细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征。上述结果表明,mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡。 展开更多
关键词 dr5 单克隆抗体 细胞凋亡
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Caspase-8和DR5在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用 被引量：4
6
作者 佟海侠 张继红 +2 位作者 马力 陆春伟 张锦华 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2006年第4期327-330,共4页
目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无诱导凋亡作用。大多数神经母细胞瘤细胞株对TRAIL的诱导凋亡作用耐受与其Caspase8表达缺失有关,也与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。该文主要探讨Cas... 目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无诱导凋亡作用。大多数神经母细胞瘤细胞株对TRAIL的诱导凋亡作用耐受与其Caspase8表达缺失有关,也与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。该文主要探讨Caspase8及TRAIL受体DR5的表达在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞株SKNDZ凋亡中的作用及其发生机制。方法应用RTPCR方法检测IFNγ作用前后SKNDZ细胞Caspase8的表达;应用WesternBlot方法检测化疗药作用前后SKNDZ细胞DR5的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、IFNγ+TRAIL、化疗药+TRAIL及化疗药+IFNγ+TRAIL对SKNDZ细胞生长及凋亡的影响。结果SKNDZ细胞不表达Caspase8,IFNγ作用后的SKNDZ细胞Caspase8表达明显增加。对照组未检测到DR5蛋白表达,而阿霉素和依托泊苷处理后检测到DR5蛋白表达。表达Caspase8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感,而同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感。阿霉素/依托泊苷+IFNγ+TRAIL组早期凋亡率为:(17.9±3.6)%、(14.8±3.3)%,与IFNγ+TRAIL组(3.9±1.2)%比较,差异有显著性(F=26.233,P<0.01)。结论同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞恢复了对TRAIL的敏感性,Caspase8和DR5在TRAIL诱导SKNDZ细胞凋亡中起着十分关键的作用。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 凋亡 TRAIL CASPASE-8 dr5
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死亡受体5在肝癌细胞系及肝细胞系表面的表达 被引量：5
7
作者 张军 马远方 +1 位作者 刘广超 吴雄文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期287-289,共3页
目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR... 目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体DR5在肝癌细胞系及肝细胞表面的表达情况。结果:不同细胞表面DR5的表达水平分别为:人肝癌SMMC7721细胞95%、人肝细胞癌HepG2细胞40%,人正常肝细胞HL-770220.3%。结论:抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在人肝癌SMMC7721细胞高水平表达,人肝细胞癌HepG2细胞中度表达,人正常肝细胞HL-7702细胞低表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。 展开更多
关键词 死亡受体5 单克隆抗体 表达
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DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用 被引量：10
8
作者 马远方 杨东亮 +1 位作者 陆士新 陈有海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期332-334,共3页
目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆... 目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0～ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 凋亡 抗dr5单克隆抗体
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吉西他滨作用于肝癌HepG2细胞后对DR5、caspase-8、caspase-9和caspase-3表达的影响 被引量：9
9
作者 聂艳丽 阮之平 南克俊 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期134-137,共4页
目的研究吉西他滨作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达,以期探讨吉西他滨诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究吉西他滨对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及Western blot法,观... 目的研究吉西他滨作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达,以期探讨吉西他滨诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究吉西他滨对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及Western blot法,观察吉西他滨作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达情况。结果吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖性;吉西他滨作用于HepG2细胞24h后,细胞表面DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达均增强。结论吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其能够上调DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达有关。 展开更多
关键词 吉西他滨 HepG2细胞 dr5 CASPASE-8 CASPASE-9 caspase-3
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抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应 被引量：5
10
作者 张军 马远方 +2 位作者 刘广超 李淑莲 卢锋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期133-136,共4页
目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用... 目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用;流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:(1)mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,在1.89μg/m l浓度下可杀伤36%的细胞,增加mDRA-6浓度,凋亡作用无明显增加;(2)SMMC-7721细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性;(3)阿霉素与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用,2μg/m l的mDRA-6与40 ng/m l的阿霉素联合杀伤60%SMMC-7721,Hoechst 33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。 展开更多
关键词 抗人dr5单克隆抗体(mDRA-6) 阿霉素 协同杀伤作用 细胞凋亡
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抗人死亡受体5单链抗体特性分析 被引量：3
11
作者 程小峰 张佳锴 +3 位作者 孟庆宇 黄小平 范鑫 庄国洪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期70-72,共3页
目的探究抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(aDR5ScFv)的特异性。方法 ELISA检测aDR5ScFv的效价、亲和力和表位分析。Western blotting检测单链抗体的特异性。MTT检测aDR5ScFv对结肠癌细胞SW480的生长抑制。结果 ELISA显示抗人死亡受体5单链... 目的探究抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(aDR5ScFv)的特异性。方法 ELISA检测aDR5ScFv的效价、亲和力和表位分析。Western blotting检测单链抗体的特异性。MTT检测aDR5ScFv对结肠癌细胞SW480的生长抑制。结果 ELISA显示抗人死亡受体5单链抗体抗体效价为1.2×104。通过间接ELISA证实aDR5ScFv与aDR5mAb识别DR5胞外段(eDR5,系本实验室自己构建)的同一个位点。aDR5ScFv的亲和力常数为2.12×10-2。eDR5与aDR5ScFv能够特异结合。MTT检测结果显示,aDR5ScFv抑制SW480细胞生长呈剂量依赖性,aDR5ScFv终质量浓度分别为0.225 mg/ml、0.45 mg/ml、0.9 mg/ml、1.2 mg/ml。200μl时,SW480细胞的存活率分别为97.7%,70.9%、70.1%、23.6%。结论 aDR5ScFv能与eDR5特异性结合,并有较强的活性。 展开更多
关键词 dr5 单链抗体 特异性 SW480
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盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其死亡受体DR4、DR5表达的变化 被引量：7
12
作者 张俊 卢桂芳 +5 位作者 任牡丹 卢新兰 曹瑞琪 闫红林 王新 和水祥 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2016年第8期873-876,共4页
目的观察人肝癌细胞SMMC-7721凋亡过程中死亡受体DR4、DR5的表达,探讨盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色荧光显微镜观察细... 目的观察人肝癌细胞SMMC-7721凋亡过程中死亡受体DR4、DR5的表达,探讨盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡;用Western blotting方法检测人肝癌细胞DR4、DR5的表达。结果盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Hoechst33258染色可见凋亡细胞皱缩,核碎裂,也可见典型凋亡小体;在蛋白水平,盐酸青藤碱处理后SMMC-7721细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内死亡受体DR4和DR5表达上调有关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 SMMC-7721 死亡受体DR4/dr5 盐酸青藤碱 凋亡
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心力衰竭患者血浆sTRAIL和sDR5的水平及培哚普利对其影响 被引量：3
13
作者 洪燕 李源 +5 位作者 王晓明 刘雪松 李影娜 欧阳为明 陈长生 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期366-368,共3页
目的 :探讨充血性心力衰竭 (CHF)患者血浆可溶型TNF相关的凋亡诱导配体 (sTRAIL)和死亡受体DR5水平的变化及与培哚普利对心脏保护的关系。方法 :用ELISA法检测治疗前后 30例服用培哚普利的CHF患者、2 8例常规治疗的CHF患者及 2 0例健康... 目的 :探讨充血性心力衰竭 (CHF)患者血浆可溶型TNF相关的凋亡诱导配体 (sTRAIL)和死亡受体DR5水平的变化及与培哚普利对心脏保护的关系。方法 :用ELISA法检测治疗前后 30例服用培哚普利的CHF患者、2 8例常规治疗的CHF患者及 2 0例健康人对照血浆中sTRAIL及sDR5的水平。结果 :① 5 8例CHF患者血浆sTRAIL的平均含量为 (1.4 3± 0 .4 7)μg/L ,健康人为 (0 .93± 0 .12 ) μg/L ,两者无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;sTRAIL水平与心功能损害程度亦无明显关系。CHF患者血浆sDR5的平均含量为 (39.6 7± 6 .78)ng/L ,较健康人 (<6ng/L)明显升高 ,且随着心功能损害程度的加重而升高。②培哚普利组与常规心衰治疗组治疗后 ,血浆中sTRAIL的水平均有所降低 ,但无显著性差异。治疗前后培哚普利组血浆sDR5的平均水平 ,分别为 (31.2 3± 10 .16 )ng/L和 (8.5 0± 2 .14 )ng/L(P <0 .0 5 ) ;常规治疗组分别为 (48.81± 8.74 )ng/L和 (2 6 .6 4± 6 .2 7)ng/L(P <0 .0 5 )。培哚普利组与常规治疗组相比较 ,前者降低更明显 (分别下降 72 .7%和 4 5 .4 % )。③与其他病因所致CHF患者相比较 ,高血压心脏病所致CHF患者血浆sDR5的水平明显升高。结论 :sDR5可能在CHF患者心肌细胞凋亡的发生、发展中起着重要作用。 展开更多
关键词 充血性心力衰竭 培哚普利 凋亡 夹心ELISA TRAIL dr5
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抗人DR5单链抗体诱导HepG2细胞凋亡的实验研究 被引量：3
14
作者 孟庆宇 程小峰 +2 位作者 张佳锴 黄小平 庄国洪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期585-588,593,共5页
目的探究抗人DR5单链抗体(scFv)ZF1对肝癌细胞株HepG-2的凋亡作用及机制。方法 MTT法检测ZF1对HepG-2的细胞毒效应;流式细胞术检测ZF1诱导HepG2的凋亡率;荧光显微镜观察经ANNEXIN-V/PI双染的HepG-2细胞;DNA Ladder检测HepG-2细胞的DNA特... 目的探究抗人DR5单链抗体(scFv)ZF1对肝癌细胞株HepG-2的凋亡作用及机制。方法 MTT法检测ZF1对HepG-2的细胞毒效应;流式细胞术检测ZF1诱导HepG2的凋亡率;荧光显微镜观察经ANNEXIN-V/PI双染的HepG-2细胞;DNA Ladder检测HepG-2细胞的DNA特点;Western blotting检测Bcl-2、PARP蛋白的表达。结果 MTT结果显示ZF1抑制HepG-2细胞生长呈剂量依赖性,ZF1终浓度分别为0.225、0.45、0.9mg/ml、1.2mg/ml200μl时,HepG-2细胞的生长抑制率分别为28.8%、52.3%、65.3%、89.8%;流式细胞仪检测结果显示,终浓度分别为0.225、0.45、1.2mg/ml2ml作用HepG-2细胞4h,凋亡率分别为32.9%、56%、83.2%;荧光显微镜下可见早期凋亡细胞,细胞膜呈绿色荧光,细胞内有凋亡小体的形成,伴有核结构的变化;DNALadder出现明显的彗星尾状条带;Western blotting检测到ZF1诱导凋亡的细胞内Bcl-2、PARP蛋白表达上调。结论 ZF1可诱导HepG2细胞株凋亡,这种作用与HepG2细胞株表达Bcl-2、PARP蛋白蛋白表达上调相关。 展开更多
关键词 dr5 单链抗体 HEPG2细胞株 凋亡
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5′UTR序列对DR5::GUS基因瞬时表达的影响 被引量：4
15
作者 王亚红 赵燕 +2 位作者 彭彦 刘晓柱 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期146-149,共4页
利用生长素响应原件(DR5)构建了DR5::GUS报告基因表达载体,并在载体构建时,对GUS的5′UTR序列进行2种设计:一种是利用载体GUS基因原有的5′UTR构建成pBI121-DR5::GUS;另一种采用植物增强表达的常用原件烟草花叶病毒(TMV)的5′端序列(Ω... 利用生长素响应原件(DR5)构建了DR5::GUS报告基因表达载体,并在载体构建时,对GUS的5′UTR序列进行2种设计:一种是利用载体GUS基因原有的5′UTR构建成pBI121-DR5::GUS;另一种采用植物增强表达的常用原件烟草花叶病毒(TMV)的5′端序列(Ω′)替换GUS基因原有的5′UTR序列,构建成pBI121-DR5(Ω′)::GUS。将2种载体转化根癌农杆菌后,采用烟草叶片注射浸染的瞬时表达检测法对2个载体的植物表达效果进行检测,2种载体分别转化烟草叶片2 d后,对浸染的叶盘进行GUS染色分析,pBI121-DR5::GUS的转化叶片有明显的GUS反应,而pBI121-DR5(Ω′)::GUS的转化叶片则无GUS反应。分离注射浸染部位叶盘RNA后,对GUS特异引物进行RT-PCR分析,2种转化的基因都已有效转录出RNA,但前者能翻译出相应的Ω-葡萄糖苷酸酶,后者则不能完成翻译过程,说明Ω′序列的引入并未有效提高GUS基因的表达,反而抑制了mRNA的翻译。 展开更多
关键词 5′非编码区 生长素基因报告系统 瞬时表达
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抗人死亡受体5单链抗体ZF1对鼠H22肝癌细胞的作用分析 被引量：3
16
作者 孟庆宇 程晓峰 +1 位作者 张佳锴 庄国洪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期801-805,809,共6页
目的:研究抗人死亡受体5单链抗体ZF1对H22肝癌细胞体内外抑制增殖作用。方法:MTT法检测ZF1对H22肝癌细胞体外杀伤作用,流式细胞术检测ZF1诱导H22的凋亡率,建立H22移植瘤模型,随机分为PBS组、ZF1组、EPI组和ZF1/EPI联合组四组。观察肿瘤... 目的:研究抗人死亡受体5单链抗体ZF1对H22肝癌细胞体内外抑制增殖作用。方法:MTT法检测ZF1对H22肝癌细胞体外杀伤作用,流式细胞术检测ZF1诱导H22的凋亡率,建立H22移植瘤模型,随机分为PBS组、ZF1组、EPI组和ZF1/EPI联合组四组。观察肿瘤生长和小鼠体重变化情况。治疗13天后分离肿瘤组织,进行HE染色检查、TUNNEL法检测细胞凋亡。结果:体外实验显示:ZF1可抑制H22细胞的增殖,呈剂量依赖性,抑制率最高为84.5%。体内实验结果显示单独应用ZF1或联合应用ZF1/EPI时,肿瘤增长受到明显抑制。HE染色和TUNNEL分析结果表明ZF1可有效诱导肝癌肿瘤凋亡,ZF1/EPI联合组效果更明显,而对正常肝细胞无毒性。结论:单链抗体ZF1具有良好抑制H22细胞增殖的作用。ZF1和EPI联合应用效果更明显。 展开更多
关键词 dr5 单链抗体 凋亡 H22
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子宫内膜癌中TRAIL受体DR5、DcR1及P-gp的表达及意义 被引量：5
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作者 主改侠 曲群 +3 位作者 陈青娟 王桂贤 马玉琴 杜稳侠 《山西医科大学学报》 CAS 2006年第8期800-803,共4页
目的探讨TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)受体DR5、DcR1及多药耐药基因MDR1产物P-gp在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化Elivision TMplus法检测DR5、DcR1、P-gp蛋白在子宫内膜癌中表达。结果在子宫内... 目的探讨TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)受体DR5、DcR1及多药耐药基因MDR1产物P-gp在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化Elivision TMplus法检测DR5、DcR1、P-gp蛋白在子宫内膜癌中表达。结果在子宫内膜癌中,DR5、DcR1、P-gp阳性表达率为85.71%,45.24%,52.38%。DR5的阳性表达与病理分级及肌层浸润有关,P-gp的阳性表达率与临床分期成正比,子宫内膜癌中P-gp与DR5的阳性表达呈负相关,P-gp与DcR1的阳性表达呈正相关。结论子宫内膜癌中DR5的高表达是TRAIL用于子宫内膜癌治疗的依据;晚期子宫内膜癌中P-gp高表达可能导致其对化疗耐药性增加;凋亡调节基因与耐药基因之间可能存在着某种内在的关系。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 dr5 DCR1 P-糖蛋白 抗药性 多药 细胞凋亡
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抗人DR5单抗致白血病U937细胞凋亡的作用机制 被引量：3
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作者 王靖 丁春生 赵学礼 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期598-601,共4页
目的探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937凋亡诱导作用及机制。方法 MTT法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对U937细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,Western blotting检测caspase8、10、3、9及Cytochome C在U937... 目的探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937凋亡诱导作用及机制。方法 MTT法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对U937细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,Western blotting检测caspase8、10、3、9及Cytochome C在U937细胞凋亡过程中的表达及激活情况;选用caspase8、10、3抑制剂预处理U937细胞,观察是否抑制mDRA-6对U937细胞的凋亡诱导作用。结果MTT结果显示:10mg/L的mDRA-6作用U937细胞24h,细胞死亡率为61.09%,呈时间、浓度依赖性;流式细胞仪检测显示mDRA-6作用4h,细胞凋亡率为69.03%;Western blotting结果显示caspase10、3、9及Cytochome C均有活性片断表达,而caspase8无明显激活;caspase10和caspase3抑制剂部分抑制mDRA-6的凋亡诱导作用,caspase8抑制剂作用不明显。结论抗人DR5单克隆抗体mDRA-6通过死亡受体和线粒体途径诱导白血病U937细胞凋亡。 展开更多
关键词 dr5 单克隆抗体 白血病细胞 细胞凋亡 CASPASE
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硫利达嗪通过内质网应激介导DR5表达上调增敏TRAIL对肺癌PC9细胞的促凋亡效应 被引量：2
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作者 李娟 汪毅 +2 位作者 刘柳 袁媛 鲍扬漪 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期80-87,共8页
背景与目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducting ligand,TRAIL)可诱导肿瘤细胞发生凋亡,然而相当数量的肿瘤细胞可耐受TRAIL诱导的凋亡而得以存活。本实验观察硫利达嗪(thioridazine,THZ)... 背景与目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducting ligand,TRAIL)可诱导肿瘤细胞发生凋亡,然而相当数量的肿瘤细胞可耐受TRAIL诱导的凋亡而得以存活。本实验观察硫利达嗪(thioridazine,THZ)通过诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)介导的死亡受体5(death receptor 5,DR5)表达上调,继而增敏TRAIL对肺腺癌细胞PC9的生长抑制及凋亡诱导效应,探讨其机制。方法不同浓度硫利达嗪及TRAIL单独或联合处理PC9细胞,MTT法检测细胞活性变化,流式细胞术检测细胞表面DR5表达及细胞凋亡率,Western blotting检测内质网应激相关蛋白GRP78(glucose regulated protein 78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、p-PERK(PKR-like ER kinase)、p-e IF2α(eukaryotic initiation factor-2α,e IF2α)、ATF4(activating transcription factor 4,ATF4)及凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8、PARP、DR5表达变化。结果硫利达嗪对PC9细胞的增殖抑制效应呈浓度依赖性(P<0.05),硫利达嗪可增加TRAIL对PC9细胞的抑制作用及凋亡诱导作用且可上调PC9细胞表面DR5表达水平,流式细胞术结果显示:TRAIL联合硫利达嗪组细胞凋亡率较单独TRAIL组显著增加(P<0.05),Western blotting结果显示:TRAIL联合硫利达嗪组细胞Cleaved-caspase-8、Cleaved-PARP、DR5表达水平较单独TRAIL组明显上调。DR5表达上调及促凋亡效应是通过诱导内质网应激发生,并伴随着GRP78及CHOP表达上调发生的,且该效应可被4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)可抑制(P<0.05)。结论硫利达嗪增敏TRAIL对PC9细胞的增殖抑制效应显著,其机制可能与硫利达嗪内质网应激介导的DR5上调有关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 硫利达嗪 TRAIL 内质网应激 死亡受体5
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多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞中DR5、DcR2的表达变化 被引量：3
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作者 张娟 王立群 +3 位作者 周月希 刁波 周蓉 解迪 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期33-39,共7页
目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观... 目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观察并比较DR5、DcR2在PCOS组和对照组大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果免疫组织化学结果显示,在PCOS组大鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞中,DR5的表达较对照组均显著增强(P<0.05),在PCOS组大鼠卵巢窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞中,DcR2的表达较对照组同级别卵泡显著增强(P<0.05),在始基卵泡颗粒细胞的表达差异无显著性(P>0.05)。RT-q PCR分析显示,DR5 mRNA和DcR2 mRNA在两组中都有表达,且二者在PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞中的表达较正常对照组均明显增强(P<0.05)。结论DR5和DcR2在颗粒细胞中的异常表达可能对PCOS大鼠卵泡的异常发育起到了一定作用,它们可能是通过参与颗粒细胞凋亡过程而对卵泡的发育造成了一定影响。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 大鼠 颗粒细胞 dr5 DcR2
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