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HIV－1外膜（env）基因在重组痘苗病毒中的高效表达 被引量：12
1
作者 金宁一 志田寿利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期327-333,共7页
应用重组痘苗病毒作载体，在ＡＴＩ、Ｐ７．５突变型早期启动子控制下，高效表达了（经定点突变去除一处早期终止信号的）ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证明，晚期启动子活性强的ｐＳＦＪ２－３８能更高效地表达ｅｎ... 应用重组痘苗病毒作载体，在ＡＴＩ、Ｐ７．５突变型早期启动子控制下，高效表达了（经定点突变去除一处早期终止信号的）ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证明，晚期启动子活性强的ｐＳＦＪ２－３８能更高效地表达ｅｎｖ基因。经Ｌｅｎｔｉｌ－Ｌｅｃｔｉｎ提取以及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后的激光扫描测定结果，在１０７个感染细胞中可产生５０－７０μｇ的Ｅｎｖ蛋白。 展开更多
关键词 外膜基因 高效表达 痘苗病毒 艾滋病毒
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基于Dim env-YOLO算法的昏暗场景车辆多目标检测 被引量：9
2
作者 郭克友 王苏东 +1 位作者 李雪 张沫 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期312-320,共9页
低照度的夜间路况复杂,现有夜间车辆识别相关研究较少,且存在识别方法实时性不高、过多占用硬件资源等不足。针对夜间场景车辆识别干扰因素较多、检测效果不佳的问题,提出一种基于YOLOv4的Dim env-YOLO车辆目标检测算法。利用MobileNetV... 低照度的夜间路况复杂,现有夜间车辆识别相关研究较少,且存在识别方法实时性不高、过多占用硬件资源等不足。针对夜间场景车辆识别干扰因素较多、检测效果不佳的问题,提出一种基于YOLOv4的Dim env-YOLO车辆目标检测算法。利用MobileNetV3网络替换原始YOLOv4中的主干网络,以减少模型参数量。在改进的YOLOv4模型上使用图像暗光增强方法,提高车辆目标在昏暗环境中的可识别性。在此基础上,引入注意力机制加强特征信息选择,同时利用深度可分离卷积降低网络计算量。选取北京部分道路的夜间场景图片自制数据集并进行实验验证,结果表明,在存在高斯噪声、模糊扰动、雨雾夜晚等情况下,Dim env-YOLO算法的测试结果较稳定,对于照度低于30 lx的昏暗条件下的车流,其检测mAP值达到90.49%,对于最常见的轿车类别,mAP值达到96%以上,优于Faster-RCNN、YOLOv3、YOLOv4等网络模型在昏暗光照条件下的检测效果。 展开更多
关键词 昏暗场景 车辆检测 深度可分离卷积 Dim env-YOLO算法 MobileNetV3网络
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1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析 被引量：1
3
作者 陈玫婷 郑从森 +6 位作者 梁泽贤 林巧儿 常传哲 周俊 冯军 李林林 覃丽梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1785-1795,共11页
【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行... 【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%~94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个的B细胞线性表位。该env蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大,为38.29%。【结论】env基因是导致ALV遗传变异的关键基因,其编码的囊膜蛋白env具有不稳定性,存在多个蛋白修饰位点和抗原表位。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) J亚群 env基因 生物信息学
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贵州地区威宁鸡禽白血病病毒分离鉴定及env基因遗传进化分析
4
作者 李婷 徐景峨 +7 位作者 余波 杨莉 韩雪 吴仙 赵滨 蒲龄 潘永 王璇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期76-80,137,共6页
为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELIS... 为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELISA检测和病毒PCR鉴定,进一步对分离株的env基因进行克隆、测序,与GenBank收录的其他ALV参考株进行序列比对分析,并构建遗传进化树。结果表明:剖检可见病死鸡腹腔中及肝脏上有肿瘤结节;取病死鸡的肝脏、心脏接种于含5%新生牛血清的TSA培养基和麦康凯琼脂培养基培养24 h,未见有细菌生长;取病死鸡肝脏组织,处理后接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞,用ALV ELISA抗原检测试剂盒检测发现ALV p27抗原呈阳性;用ALV-J亚群env基因引物进行PCR检测,结果呈阳性,PCR产物大小约为924 bp;将分离毒株命名为ALV-GZ株,该毒株与国内外分离的ALV-J亚群的核苷酸相似性为97.0%~99.4%,与国内外分离的其他亚群的核苷酸相似性为50.8%~53.0%,与AHFX/16916株(GenBank登录号为MF614031.1)处于同一遗传进化分支,亲缘关系最近。说明贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡感染了ALV-J亚群,且ALV-J亚群毒株在缓慢的变异演化中向地方品系鸡蔓延传播。 展开更多
关键词 贵州地区 威宁鸡 禽白血病病毒 J亚型 env基因 遗传进化分析
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HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达 被引量：4
5
作者 金宁一 方厚华 +5 位作者 郭志儒 罗坤 古长庆 殷震 邵一鸣 王虹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期193-196,共4页
在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HI... 在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 HIV-1 env基因 gp120基因 基因表达 FPV AIDS疫
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HIV-1包膜蛋白ENV慢病毒载体的构建及表达 被引量：4
6
作者 孙丹丹 李昌 +7 位作者 李太元 朱娜 杜寿文 任大勇 刘存霞 秦艳青 李沂 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期440-443,共4页
目的:构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达。方法:通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-e... 目的:构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达。方法:通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-env,采用脂质体转染法转染HEK293T,经RT-PCR、Western blot检测目的基因表达,同时利用激光共聚焦技术对env基因的表达进行了定位。结果:成功获得了HIV-1 env基因,构建了重组慢病毒质粒pLV-env,RT-PCR、Western blot检测均表明外源基因能够表达,并具有抗原性,同时env基因表达后可以分泌到细胞膜表面膜上。结论:成功构建了含有HIV-1包膜蛋白env基因的重组慢病毒质粒,并验证了其表达,为下一步慢病毒的包装以及细胞模型和动物模型的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 env HIV-1 慢病毒载体 真核表达
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中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ+Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测 被引量：4
7
作者 张军 王颖彬 +4 位作者 徐颖潇 逄淑强 张国忠 杨海杰 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期38-42,共5页
为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2... 为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2 12个氨基酸 (aa185～aa396 )的基因 ,并在 3′端通过 (GlySer) 2 与人工合成的HTLV Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合 ,插入原核表达载体 pRSET ,在 E .coli中得到了高效表达 ,目的蛋白产量约占菌体总蛋白的 30 %。通过Triton X10 0洗涤 ,低浓度尿素逐步变性处理 ,8mol/L尿素溶解后纯度在 75 %左右 ,经电泳洗脱纯化 ,最终纯度可达 95 %左右 ,纯蛋白得率约 40 %。经Westernblotting检测 ,该蛋白对 4份HTLV Ⅰ型和 2份HTLV Ⅱ型血清均有较强反应 ,而对 4份阴性血清无反应 ,从而有可能用于研制HTLV抗体诊断试剂盒。 展开更多
关键词 人类T淋巴细胞白血病病毒 膜基因 原核表达 抗原
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量：6
8
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达 被引量：6
9
作者 洪琴 任晓峰 李广兴 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期105-108,I0002,共5页
利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质粒pVAX-env。将质粒pVAX-env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧... 利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质粒pVAX-env。将质粒pVAX-env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧光检测体内质粒表达。结果表明,成功构建了真核表达质粒pVAX-env,并证明pVAX-env在体内体外都能有效表达。研究为鸡痘病毒基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 env 真核表达
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一株猫艾滋病病毒的巢式PCR检测及亚型鉴定
10
作者 吕相彤 王璐瑶 +4 位作者 陈颖皙 王俞茜 蔡亮 王玉龙 王亚君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第17期71-74,共4页
为了进一步了解猫免疫缺陷病毒(FIV)的区域流行情况,试验采用巢式PCR方法对15份流浪猫全血样品进行FIV gag基因扩增,检测出FIV阳性样品后再通过巢式PCR扩增得到FIV env基因V3~V5高变区序列,应用DNAMAN软件对阳性样品env基因的V3~V5高变... 为了进一步了解猫免疫缺陷病毒(FIV)的区域流行情况,试验采用巢式PCR方法对15份流浪猫全血样品进行FIV gag基因扩增,检测出FIV阳性样品后再通过巢式PCR扩增得到FIV env基因V3~V5高变区序列,应用DNAMAN软件对阳性样品env基因的V3~V5高变区序列与NCBI中收录的参考毒株进行比对,使用MEGA 7.0软件构建进化树并进行遗传进化分析。结果表明:检测出1份FIV阳性样品,将FIV阳性株命名为XM07毒株,该毒株的env基因V3~V5高变区序列与NCBI中C78毒株的核苷酸序列相似性达到97.57%,与SH-2363毒株的核苷酸序列相似性达到96.83%;XM07毒株与SH-2363毒株在同一进化分支中,鉴定为A亚型。说明试验鉴定的FIV毒株未发生明显变异。 展开更多
关键词 猫免疫缺陷病毒(FIV) env基因 GAG基因 巢氏PCR 亚型鉴定
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禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白env基因的克隆和表达 被引量：9
11
作者 秦爱建 崔冶中 +1 位作者 Lucy Lee Aly Fadly 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期54-59,共6页
禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 ... 禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 7kb。将克隆出的env基因与杆状病毒pBlue Bac4表达质粒DNA连接 ,构建成转移性载体 pBac4817env ,通过与Bac N Blue杆状病毒DNA共转染 ,获得了重组病毒rBac4817env 2。该重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,能高效表达env基因产物。免疫荧光分析结果证明 ,单克隆抗体G2或多价兔抗envgp37血清能识别Sf9细胞中重组env基因表达的特异性抗原 ;Westernblotting分析结果表明 ,表达的重组基因产物的分子量大小约为 90kD～ 94kD。用这些重组基因产物免疫鸡可以诱导鸡产生出高滴度的抗ALV J特异性抗体。这一结果提示 ,这种杆状病毒表达的重组基因产物有助于ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 env基因 克隆 表达
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七彩山鸡内源性禽白血病病毒的鉴定及其env基因序列分析 被引量：3
12
作者 刘健 李凯航 +7 位作者 鞠厚斌 李鑫 葛菲菲 杨德全 杨显超 葛杰 邓波 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期71-75,共5页
为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p2... 为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p27抗原均未被检测到。对ALV p27抗原阳性细胞培养物进行env基因的扩增,最终得到了1株内源性ALV前病毒序列,其基因序列与已知的禽白血病病毒同源性为39.1%~66.7%。以上结果表明,该七彩山鸡品系中存在内源性禽白血病病毒感染。 展开更多
关键词 七彩山鸡 内源性禽白血病病毒 检测 分析
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广西凭祥斗鸡禽白血病病毒检测及分离株env基因分析 被引量：3
13
作者 何成伟 王培坤 +5 位作者 秦丽莉 毕玉彧 邹广珍 杨永立 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期23-26,共4页
为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.1... 为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.13%,血清样品病毒分离阳性率为12.97%,ALV-J和ALV-A/B抗体阳性率分别为22.39%和7.46%;对从2只斗鸡获得的病毒分离株DJ-3-18和DJ-45进行病毒囊膜蛋白基因env的扩增、序列测定及比较分析,结果显示2株病毒的gp85基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为88.2%～96.5%,gp37基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为91.4%～98.0%,其中与台湾A亚群蛋鸡源分离株TW-3577的亲缘关系最近,而与ALV其他亚群毒株的同源性则较低。结果表明,首次获得的2株斗鸡源ALV分离株属A亚群。 展开更多
关键词 斗鸡 禽白血病 流行病学调查 env基因 ALV-A亚群
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重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫 被引量：2
14
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期410-414,共5页
目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE... 目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒 ,单独或与重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白联合免疫小鼠。结果 :构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比 ,联合免疫组免疫应答显著增强 ,其中中和抗体的滴度提高5～ 9倍。结论 :含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫 ,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫应答
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HIV-1 env基因序列分析及其与长期感染不进展现象相关性研究 被引量：2
15
作者 许晶 王媛 +1 位作者 黎志东 徐志凯 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期155-156,共2页
目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-... 目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行测定和分析,所得结果与HIV-1该亚型国际标准株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果离散率和系统树分析21个毒株均为HIV-1 B亚型,毒株间基因离散率在2%左右,高于前期研究结果;未见V3环顶端四肽特征性GPGR和GRGQ,也未见前期研究曾经发现的脯氨酸向异亮氨酸的变异现象。结论HIV-1长期感染者体内毒株env基因无规律性突变。 展开更多
关键词 HIV-1 长期感染不进展者 膜蛋白(env)基因
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1
16
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 祁小乐 高玉龙 高立 邓小芸 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞... 为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 env基因 原核表达 纯化 多克隆抗体
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HIV-2 env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达 被引量：1
17
作者 王秀清 金宁一 +5 位作者 田梅 郭志儒 方厚华 顾万钧 李萍 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期216-220,共5页
将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒ... 将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白，表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００，而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定，原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析，分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 HIV-2 env蛋白 表达 大肠杆菌 痘苗病毒
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云南瑞丽县IDUs人群HIV-1感染者毒株env基因C2-V3区序列的测定 被引量：4
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作者 方荣 王斌 +2 位作者 路永波 宋旭霞 邵济钧 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第1期20-22,共3页
1目的　了解云南瑞丽县 1994年以后静脉药瘾 (IDU s)人群 HIV- 1感染者分离株的分子流行病学特征。 2方法　运用套式聚合酶链反应扩增 HIV- 1env基因 C2 - V3区 ,将扩增片段纯化后与 p EGM5 zf(+)载体连接 ,再克隆入大肠杆菌 ,提取重组... 1目的　了解云南瑞丽县 1994年以后静脉药瘾 (IDU s)人群 HIV- 1感染者分离株的分子流行病学特征。 2方法　运用套式聚合酶链反应扩增 HIV- 1env基因 C2 - V3区 ,将扩增片段纯化后与 p EGM5 zf(+)载体连接 ,再克隆入大肠杆菌 ,提取重组质粒 ,使用 DNA自动测序仪进行序列测定。 3结果　与此地区 1989年分子流行病学资料比较 ,V3区变异不显著 ,未发现新的亚型与毒株。 4结论　 5株 HIV- 1毒株进化关系非常密切 ,这一地区IDUs人群中 HIV- 1的流行毒株仍以美欧 HIV- 1SF2株为主。 展开更多
关键词 HIV-1 序列分析 DNA 艾滋病 env基因 IDUS
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绵羊肺腺瘤内、外源性env基因比较分析 被引量：2
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作者 孔汉金 张克山 +3 位作者 刘永杰 尚佑军 吴斌 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期18-26,共9页
绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV... 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV的内源性基因片段。为比较分析JSRV内、外源性env的特征,本文扩增并测定了正常绵羊肺组织的内源性env基因(Enenv),运用生物信息学技术,比较分析了其与外源性绵羊肺腺瘤病毒JSRV21(AF105220)env基因(Exenv)的遗传进化关系,二、三级蛋白结构和抗原表位。结果表明Enenv和Exenv核苷酸同源性为88.1%,推导的氨基酸同源性为92.0%,两者的主要差异位于TM区和YXXM基序。本结果为进一步研究JSRVenv基因功能提供了新线索。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤 env基因 序列分析 结构预测
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A亚群禽白血病病毒env基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 被引量：1
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作者 梅梅 胡晓田 +4 位作者 秦爱建 陆吉虎 张雪花 侯继波 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1316-1320,共5页
为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细... 为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blot)结果显示,重组蛋白可与抗ALV-A抗体发生特异性反应,重组蛋白分子大小约为90 000,与预期大小相符,表明env基因在Sf9细胞中获得了良好表达。 展开更多
关键词 A亚群禽白血病病毒 env基因 表达
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