1型鸭肝炎病毒R株全基因组分析与检测技术的研究 被引量：10

1

作者 罗玉均 张桂红 +5 位作者 陈建红 廖明 徐小芹 任涛 张济培 罗开健 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期2835-2842,共8页

【目的】测定1型鸭肝炎病毒(DHV1)毒株R全基因组,建立鸭肝炎病毒1型巢式PCR与实时荧光定量RT-PCR。【方法】设计特异性引物测定DHV1毒株R全基因组,以3D为靶基因序列的引物P1和P2,P3和P4进行巢式PCR,引物F和R进行实时荧光定量RT-PCR。【... 【目的】测定1型鸭肝炎病毒(DHV1)毒株R全基因组,建立鸭肝炎病毒1型巢式PCR与实时荧光定量RT-PCR。【方法】设计特异性引物测定DHV1毒株R全基因组,以3D为靶基因序列的引物P1和P2,P3和P4进行巢式PCR,引物F和R进行实时荧光定量RT-PCR。【结果】序列分析发现该毒株与其它GenBank上发表的DHV1毒株基因组核苷酸序列同源性为94.2%～99.2%,编码聚合蛋白氨基酸序列同源性为98%～98.8%,表明DHV1-R株与其它DHV1毒株之间病毒基因组一级结构有较高的同源性。基因组结构5′UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3′UTR在遗传进化关系上与副肠孤病毒属(Parechovirus)亲缘关系较近。参照鸭肝炎病毒1型基因序列设计特异性引物,分别进行巢式PCR和SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法检测鸭肝炎病毒1型,结果表明巢式PCR敏感性为6pg·ml-1。实时荧光定量RT-PCR确定特异性产物的Tm值,同时做普通RT-PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为85.6℃,最低能检测到含0.015fg·μl-1阳性质粒标准品。【结论】建立的巢式PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法显示了较好的特异性、敏感性,为鸭肝炎病毒1型的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 全基因组 巢式PCR 荧光定量RT-PCR

下载PDF 职称材料

1型鸭肝炎病毒E53株和HP-1株全基因组序列分析 被引量：4

2

作者 陈晓丹 张云 +3 位作者 王钰 郭冬春 李永锋 王君伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1057-1061,共5页

根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参... 根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.6%~99.4% HP-1株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.4%~99.6%。系统进化树分析结果表明,E53株与北京BJ株进化关系最近 HP-1株与R85952株进化关系最近。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 全基因组 序列分析

下载PDF 职称材料

1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立 被引量：2

3

作者 王永娟 朱善元 +3 位作者 王安平 吴双 洪伟鸣 左伟勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第2期116-119,共4页

为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度... 为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度;采集江苏多地的疑似DHAV-1感染病料,提取基因组进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断所建立方法的检测率。结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1 vp1基因保守区360 bp的序列,最低可检测1 fg基因组模板,对临床样品检测率为100%。表明,成功建立了特异性强、灵敏度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1感染的方法。 展开更多

关键词 鸭 1型鸭肝炎病毒 反转录PCR 检测

下载PDF 职称材料

1型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

4

作者 于可响 沙明利 +2 位作者 林树乾 姜亦飞 黄兵 《家禽科学》 2011年第10期10-13,共4页

参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的Ml... 参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的MluⅠ线性化位点均成功引入。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 RT—PCR 全长CDNA克隆

下载PDF 职称材料

1型鸭肝炎病毒E53株VP1基因在昆虫细胞中的表达及产物分析

5

作者 付培芬 刘华 +5 位作者 刘琰 母晓宇 董井泉 刘晓玫 马波 王君伟 《中国家禽》 北大核心 2012年第8期24-27,共4页

根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获... 根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。结果表明VP1蛋白在昆虫细胞中获得表达,表达产物能够与兔抗1型鸭肝炎病毒VP1蛋白多抗血清和鸭肝炎病毒阳性血清发生特异性反应。在昆虫细胞中表达VP1蛋白为VP1功能的研究及鸭肝炎病毒抗体的检测提供了物质材料。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 VP1基因 昆虫细胞 Bac—to—Bac系统

原文传递

1型鸭肝炎病毒CL株感染性分子克隆的构建 被引量：3

6

作者 于可响 马秀丽 +4 位作者 李玉峰 吴静 林树乾 姜亦飞 黄兵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1650-1654,共5页

【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的... 【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的RNA转染鸭胚肾细胞,并传至第6代,利用RT-PCR方法和间接免疫荧光试验进行鉴定。将获得的子代病毒(CL-R)在SPF鸡胚上传代,观察鸡胚死亡及胚体病变情况。通过胶体金免疫电镜观察子代病毒粒子的形态。【结果】RT-PCR、间接免疫荧光和胶体金免疫电镜均检测到了子代病毒。通过感染SPF鸡胚试验发现,子代病毒能致死鸡胚。【结论】本研究成功构建出具有感染性的DHV全长cDNA克隆,这在国内外还是首次报道,为进一步揭示DHV基因组的结构和功能提供了良好的技术平台。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 全长CDNA克隆 拯救病毒

原文传递

血清1型鸭甲型肝炎病毒实时定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：2

7

作者 孙庆歌 李晶梅 +7 位作者 朱薇 肖爱芳 赖志 薛霜 高俊锋 马慧慧 祝春花 谢红玲 《中国兽药杂志》 2014年第12期17-21,共5页

为建立一种可检测血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)的实时定量PCR方法,根据Gen Bank中DHAV-1 5’非编码区的保守区,设计合成1对引物和1条Taq Man探针,以构建的重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,并对所建立方法进行了特异性、敏感性和可重... 为建立一种可检测血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)的实时定量PCR方法,根据Gen Bank中DHAV-1 5’非编码区的保守区,设计合成1对引物和1条Taq Man探针,以构建的重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,并对所建立方法进行了特异性、敏感性和可重复性试验以及临床病料检测初步应用。结果,该方法与血清3型鸭甲型肝炎病毒、鸭瘟病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒等无交叉反应性;最低可以检测到10 copies/μL;组内和组间变异系数均小于3%;临床病料的检测结果与测序检测结果一致。结果表明,所建立的实时定量检测方法具有特异、敏感、稳定等优点,可用于DHAV-1的快速检测与定量分析。 展开更多

关键词 血清1型鸭甲型肝炎病毒:实时定量PCR TAQMAN探针

下载PDF 职称材料

鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：4

8

作者 林梦舟 吴双 +4 位作者 徐建生 谢军 吴植 姜勇 朱善元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3149-3156,共8页

旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异... 旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示:优化后标准曲线的相关系数(R2)均在0.999以上,扩增效率(E)在105%~110%,其组内变异系数(i-CV)与组间变异系数(c-CV)均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%(29份阳性病料)。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 3型鸭肝炎病毒 鸭病毒性肝炎 实时荧光定量PCR

下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒CRF98株生产用种毒的鉴定

9

作者 李来旭 潘添博 +1 位作者 初晓红 李睿 《吉林畜牧兽医》 2020年第9期4-5,共2页

将Ⅰ型鸭肝炎病毒CRF98株生产用种毒接种SPF鸡胚进行传代培养,收获鸡胚尿囊液。对其进行病毒含量、鸡胚毒力、免疫原性、特异性和纯净性进行检验,结果表明,各项检验均符合规定。试验结果为疫苗生产提供了病毒含量高、质量均一、稳定性... 将Ⅰ型鸭肝炎病毒CRF98株生产用种毒接种SPF鸡胚进行传代培养,收获鸡胚尿囊液。对其进行病毒含量、鸡胚毒力、免疫原性、特异性和纯净性进行检验,结果表明,各项检验均符合规定。试验结果为疫苗生产提供了病毒含量高、质量均一、稳定性好的生产用种毒。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 种毒 制备 鉴定

下载PDF 职称材料

山豆根多糖及其硫酸酯体外抗DHV-1感染细胞作用的比较 被引量：7

10

作者 陈云 曾玲 +4 位作者 熊文 张玲 张清 王德云 刘家国 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期117-122,共6页

为研制抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)新药成分,用水煎醇沉法提取山豆根多糖(BSRPS),并采用氯磺酸-吡啶法制备其硫酸化产物山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS),然后运用体外细胞培养法比较研究BSRPS和sBSRPS抗DHV-1感染鸭胚肝细胞的作用。采用直接荧光... 为研制抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)新药成分,用水煎醇沉法提取山豆根多糖(BSRPS),并采用氯磺酸-吡啶法制备其硫酸化产物山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS),然后运用体外细胞培养法比较研究BSRPS和sBSRPS抗DHV-1感染鸭胚肝细胞的作用。采用直接荧光免疫法比较分析BSRPS和sBSRPS对DHV-1吸附肝细胞作用的差异,并用实时荧光定量PCR法比较分析了最有效药物浓度的BSRPS和sBSRPS对DHV-1在鸭胚肝细胞上的复制、释放的影响。结果表明:BSRPS和sBSRPS都具有较好的体外抗DHV-1的作用,sBSRPS的效果优于BSRPS。sBSRPS能有效抑制DHV-1的体外复制和释放,BSRPS仅能抑制DHV-1的复制。两者对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用。结论:sBSRPS可以作为抗DVH的新药主要成分之一。 展开更多

关键词 1型鸭肝炎病毒 山豆根多糖 硫酸化修饰 抗病毒活性

下载PDF 职称材料

鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)不同时间的治疗效果评估

11

作者 刘浩 杨燚 +3 位作者 赵丽霞 张新新 吴雅清 刘艳红 《养禽与禽病防治》 2023年第7期7-11,共5页

将1型鸭甲型肝炎病毒RPVA1901-Z株、3型鸭甲型肝炎病毒RPVA1902-Z株分别人工感染4日龄健康易感雏鸭,在攻毒后4 h、8 h、12 h、18 h和24 h分别皮下注射鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)进行治疗。结果表明,攻毒后4~8 h治疗,治愈率10... 将1型鸭甲型肝炎病毒RPVA1901-Z株、3型鸭甲型肝炎病毒RPVA1902-Z株分别人工感染4日龄健康易感雏鸭,在攻毒后4 h、8 h、12 h、18 h和24 h分别皮下注射鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)进行治疗。结果表明,攻毒后4~8 h治疗,治愈率100%,攻毒后12 h治疗,治愈率70%~80%,攻毒后18h治疗,治愈率24.9%~50%,攻毒后24 h治疗,治愈率7.7%~23.5%;攻毒对照死亡率90%~100%;健康对照组100%存活。感染后越早免疫,治疗效果越佳。 展开更多

关键词 1型鸭甲型肝炎病毒 3型鸭甲型肝炎病毒 卵黄抗体

原文传递