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北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达
被引量：
2
1
作者
江勇
蔡辉益
+4 位作者
刘国华
李勇
张姝
常文环
郑爱娟
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第5期71-76,共6页
本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pGEM-T载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2145bp的基因,并将北京油鸡...
本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pGEM-T载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2145bp的基因,并将北京油鸡肠肽转运载体PEPT1基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0,构建了真核表达载体pcDNA3-PEPT1。采用脂质体介导将表达质粒pcDNA3-PEPT1转染293-T细胞,同时转染pcDNA3.0-EGFP荧光蛋白进行转染体系荧光监测,流式细胞术检测转录后16、20、24h的荧光强度。分别在16、20、24、44h收集等量转染细胞,抽提转染细胞总RNA,DNAseⅠ处理残留的DNA污染,反转录合成cDNA,以构建不同稀释度的pGEM-T-PEPT1质粒为模板,建立SYBERGREEN实时荧光定量标准曲线,检测PEPT1在293-T细胞中的转录水平。结果表明,在质粒转染入293-T细胞后,在16、20、24、44h均有稳定的转录水平。从而建立了在293-T细胞表达北京油鸡PEPT1的外源模型,同时为研究该转运蛋白性质,进一步调控动物肠道肽的吸收奠定了基础。
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关键词
北京油鸡
克隆
表达
293-t细胞
模型
下载PDF
职称材料
BLV拯救及其在奶牛乳腺上皮细胞中生长曲线的构建
2
作者
李思妍
何思锐
+3 位作者
王雍
王建发
连帅
武瑞
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第17期17-20,144,共5页
为了获得单一源性的逆转录病毒毒株,并探究牛白血病病毒(Bovine leukemia virus, BLV)在奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T中的复制模式,试验通过双酶切法验证感染性克隆,通过感染293-T细胞从感染性克隆中拯救活病毒;应用Reed-Muench方法获得该...
为了获得单一源性的逆转录病毒毒株,并探究牛白血病病毒(Bovine leukemia virus, BLV)在奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T中的复制模式,试验通过双酶切法验证感染性克隆,通过感染293-T细胞从感染性克隆中拯救活病毒;应用Reed-Muench方法获得该株病毒在293-T细胞和MAC-T细胞中的病毒毒价;建立BLV、293-T、F81共培养体系对拯救毒株进行验证;建立BLV+MAC-T共培养体系,采用逆转录实时荧光定量PCR方法检测,绘制该株病毒在MAC-T中生长曲线。结果表明:从感染性克隆中成功拯救并鉴定得到一株活BLV;该株病毒在293-T细胞中的毒价为97.50 TCID50/mL,在MAC-T细胞中的毒价为58.75 TCID50/mL;该株病毒感染MAC-T细胞48 h后对数增长期结束。说明BLV感染MAC-T细胞48 h后在细胞中的复制过程趋于饱和。
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关键词
牛白血病病毒
293-t细胞
奶牛乳腺上皮
细胞
病毒拯救
生长曲线
原文传递
题名
北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达
被引量：
2
1
作者
江勇
蔡辉益
刘国华
李勇
张姝
常文环
郑爱娟
机构
中国农业科学院饲料研究所
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第5期71-76,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划项目(973)(2004CB117500)
文摘
本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pGEM-T载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2145bp的基因,并将北京油鸡肠肽转运载体PEPT1基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0,构建了真核表达载体pcDNA3-PEPT1。采用脂质体介导将表达质粒pcDNA3-PEPT1转染293-T细胞,同时转染pcDNA3.0-EGFP荧光蛋白进行转染体系荧光监测,流式细胞术检测转录后16、20、24h的荧光强度。分别在16、20、24、44h收集等量转染细胞,抽提转染细胞总RNA,DNAseⅠ处理残留的DNA污染,反转录合成cDNA,以构建不同稀释度的pGEM-T-PEPT1质粒为模板,建立SYBERGREEN实时荧光定量标准曲线,检测PEPT1在293-T细胞中的转录水平。结果表明,在质粒转染入293-T细胞后,在16、20、24、44h均有稳定的转录水平。从而建立了在293-T细胞表达北京油鸡PEPT1的外源模型,同时为研究该转运蛋白性质,进一步调控动物肠道肽的吸收奠定了基础。
关键词
北京油鸡
克隆
表达
293-t细胞
模型
Keywords
Beijing-you chicken
clone
expression
293
-t
cell
model
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
Q785 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
BLV拯救及其在奶牛乳腺上皮细胞中生长曲线的构建
2
作者
李思妍
何思锐
王雍
王建发
连帅
武瑞
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第17期17-20,144,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31972747)
国家自然科学基金青年基金项目(32002247)
黑龙江省自然科学基金项目(YQ2019C014)。
文摘
为了获得单一源性的逆转录病毒毒株,并探究牛白血病病毒(Bovine leukemia virus, BLV)在奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T中的复制模式,试验通过双酶切法验证感染性克隆,通过感染293-T细胞从感染性克隆中拯救活病毒;应用Reed-Muench方法获得该株病毒在293-T细胞和MAC-T细胞中的病毒毒价;建立BLV、293-T、F81共培养体系对拯救毒株进行验证;建立BLV+MAC-T共培养体系,采用逆转录实时荧光定量PCR方法检测,绘制该株病毒在MAC-T中生长曲线。结果表明:从感染性克隆中成功拯救并鉴定得到一株活BLV;该株病毒在293-T细胞中的毒价为97.50 TCID50/mL,在MAC-T细胞中的毒价为58.75 TCID50/mL;该株病毒感染MAC-T细胞48 h后对数增长期结束。说明BLV感染MAC-T细胞48 h后在细胞中的复制过程趋于饱和。
关键词
牛白血病病毒
293-t细胞
奶牛乳腺上皮
细胞
病毒拯救
生长曲线
Keywords
Bovine leukemia virus
293
-t
cells
bovine mammary epithelial cells
rescue of virus
growth curve
分类号
S852.659.3 [农业科学—基础兽医学]
S823 [农业科学—畜牧学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达
江勇
蔡辉益
刘国华
李勇
张姝
常文环
郑爱娟
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
2008
2
下载PDF
职称材料
2
BLV拯救及其在奶牛乳腺上皮细胞中生长曲线的构建
李思妍
何思锐
王雍
王建发
连帅
武瑞
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
0
原文传递
已选择
0
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