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2020—2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析
1
作者 邹志强 马芹 +10 位作者 汪建华 王胜 孟超 许明清 赵杰 张中波 石艳红 刘子涵 魏书强 马元元 李玉峰 《中国家禽》 北大核心 2024年第7期60-66,共7页
为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况,试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料,通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定,并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示:共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒,均属于GⅠa... 为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况,试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料,通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定,并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示:共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒,均属于GⅠa分支,且分属于GⅠa分支不同小分支,其中2020年分离株(20148、20149)与2021年商品肉鸭分离株(SP21042)核苷酸相似性在98.8%~100%;2023年商品鸭分离株(SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009)核苷酸相似性在99.7%~100%;2021年种鸭分离株(21083)与2022年、2023年种鸭分离株(22443、22468、BL23028)、2023年商品鸭分离株(SP23010)核苷酸相似性在98.8%~99.4%,小分支内相似性均高于98.8%,不同小分支间相似性在96.9%~98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明,山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异,需要加以关注。 展开更多
关键词 3型鸭甲型肝炎病毒 鸭 分离鉴定 VP1基因
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3型鸭甲型肝炎病毒逆转录环介导等温扩增技术快速检测方法的建立 被引量：3
2
作者 张映 范书才 +2 位作者 张兵 陈玲 秦义娴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期963-967,共5页
为建立一种3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的快速检测方法,本研究针对DHAV-3 VP1基因序列中的8个不同区段设计了3对特异性引物,并对反应体系进行优化,通过加入羟基萘酚蓝(HNB)实现对反应结果的可视化观察,建立了检测DHAV-3的逆转录环介导等... 为建立一种3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的快速检测方法,本研究针对DHAV-3 VP1基因序列中的8个不同区段设计了3对特异性引物,并对反应体系进行优化,通过加入羟基萘酚蓝(HNB)实现对反应结果的可视化观察,建立了检测DHAV-3的逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)方法,采用已建立的方法对人工感染雏鸭的血清样品和病死鸭肝组织样品提取的核酸进行了检测。结果显示,该方法仅对DHAV-3的RNA进行扩增,而对1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)以及鸭常见的病原RNA均无扩增反应;可以检测出10拷贝/μL的DHAV-3 RNA,其敏感性为RT-PCR的1 000倍;最低能够检测到相当于1.1个DELD50的DHAV-3;能够检测到人工感染雏鸭血清和病死鸭肝组织中的DHAV-3;上述结果表明该方法能够特异、灵敏、快速地检测DHAV-3,而且使用方便。 展开更多
关键词 3型鸭甲型肝炎病毒 RT-LAMP 检测
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血清3型鸭甲型肝炎病毒TaqMan RT-qPCR检测方法的建立及初步应用 被引量：2
3
作者 范鑫 吴凤瑶 +6 位作者 卢凤英 晁锦 张敬峰 董永毅 徐正军 索郎斯珠 张小飞 《中国家禽》 北大核心 2019年第16期34-39,共6页
根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法(TaqManRT-qPCR)。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqManRT-... 根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法(TaqManRT-qPCR)。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqManRT-qPCR方法在6.39×10^8~6.39×10^0拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,R2值为0.999。该方法能特异地检测出DHAV-3,与血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)及其他常见鸭病病原无交叉反应,且组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。用普通RT-PCR方法和建立的TaqManRT-qPCR方法,对63份临床疑似鸭肝炎的肝组织样品进行检测,结果RT-PCR方法检出DHAV-3的阳性率是34.92%(22/63),TaqManRT-qPCR方法检出的阳性率是41.27%(26/63);对49份DHAV-3感染康复鸭的肛拭子样品进行检测,RT-PCR和TaqManRT-qPCR方法检出阳性率分别为22.45%(11/49)和85.71%(42/49);用TaqManRT-qPCR方法和鸡胚半数致死量法(ELD50)对DHAV-3(SD70株)鸡胚病毒含量进行检测比较,两种方法检测结果呈正相关。结果表明所建立的TaqManRT-qPCR检测方法特异性好,灵敏度高,为DHA-3快速诊断和流行病学调查提供技术手段。 展开更多
关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 TaqMan实时荧光定量PCR
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血清3型鸭甲型肝炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：5
4
作者 孙庆歌 薛霜 +7 位作者 肖爱芳 马慧慧 朱薇 漆世华 温文生 舒银辉 谢红玲 苏敬良 《中国兽药杂志》 2013年第4期1-5,共5页
通过对GenBank公布的鸭甲型肝炎病毒全序列比对,在3型鸭甲肝炎病毒(DHVA-3)5’非编码区的保守区,设计了一对检测引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的阳性重组质粒经体外转录合成的RNA作为标准品绘制标准曲线,建立了一种快速检测DHAV-3... 通过对GenBank公布的鸭甲型肝炎病毒全序列比对,在3型鸭甲肝炎病毒(DHVA-3)5’非编码区的保守区,设计了一对检测引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的阳性重组质粒经体外转录合成的RNA作为标准品绘制标准曲线,建立了一种快速检测DHAV-3的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法能特异性地检测出DHAV-3,而与血清1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)、鸭瘟病毒、新城疫病毒、禽流感病毒(H9)、呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒无交叉反应。在1.8×103～1.8×108copies/μL的检测范围内标准曲线线性关系较好,R2为0.992。敏感性试验表明,最低检测限为36拷贝数RNA。用该方法和胚半数致死量法对尿囊液中病毒含量进行检测,表明二种方法检测结果呈正相关。本研究所建立的检测方法特异性好,灵敏度高,且操作方便,可为该病毒的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。 展开更多
关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 实时荧光定量RT—PCR
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3型鸭病毒性肝炎的诊断与病毒的分离鉴定 被引量：3
5
作者 韩相敏 马晶晶 +3 位作者 高俊锋 吴碧清 张秉金 赖志 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期60-62,I0006,共4页
江苏某鸭场5日龄雏鸭发病,并在发病后很快死亡,剖检可见肝脏肿大,有出血点或出血斑,采集雏鸭肝脏进行PCR鉴定,确定为3型鸭甲型肝炎病毒引发的鸭病毒性肝炎,建议鸭场紧急接种高免卵黄抗体;同时在实验室进行病毒的分离和鉴定:将死亡雏鸭... 江苏某鸭场5日龄雏鸭发病,并在发病后很快死亡,剖检可见肝脏肿大,有出血点或出血斑,采集雏鸭肝脏进行PCR鉴定,确定为3型鸭甲型肝炎病毒引发的鸭病毒性肝炎,建议鸭场紧急接种高免卵黄抗体;同时在实验室进行病毒的分离和鉴定:将死亡雏鸭肝脏接种10日龄鸭胚,分离到1株病毒,经纯净性检验、PCR鉴定和中和试验确定为3型鸭甲型肝炎病毒,命名为DHAV-3 JS株。将DHAV-3 JS株通过人工感染雏鸭,雏鸭死亡率为70%,表明JS株毒力较强。 展开更多
关键词 3型鸭甲型肝炎病毒 诊断 分离鉴定
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一株血清3型鸭甲型肝炎病毒的鉴定及致病性分析 被引量：2
6
作者 提金凤 李志杰 毛红彦 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期24-30,共7页
为明确从山东某鸭场分离的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的致病性和遗传特征,首先对分离鉴定的毒株进行VP1基因序列测定,与GenBank中发布的基因序列比对,并进行动物试验。分离的病毒株命名为DHAV-3-SDWF,2008~2020年分离的DHAV-3毒株... 为明确从山东某鸭场分离的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的致病性和遗传特征,首先对分离鉴定的毒株进行VP1基因序列测定,与GenBank中发布的基因序列比对,并进行动物试验。分离的病毒株命名为DHAV-3-SDWF,2008~2020年分离的DHAV-3毒株主要Ⅰ和Ⅱ基因型,基因Ⅰ型又形成Ⅰa和Ⅰb两个分支,该病毒属于Ⅰa分支。DHAV-3-SDWF对雏鸭致病性强,攻毒鸭的肝脏、脾脏、肾脏等器官剖检变化和组织病变明显,这与该病毒在各组织器官中的转录水平是一致的。总之,DHAV-3的分离鉴定及致病性分析,为该病分子流行病学研究及疫苗研制提供了材料和理论支撑。 展开更多
关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 系统发育进化树分析 致病性分析 病毒载量
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鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：4
7
作者 林梦舟 吴双 +4 位作者 徐建生 谢军 吴植 姜勇 朱善元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3149-3156,共8页
旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异... 旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示:优化后标准曲线的相关系数(R2)均在0.999以上,扩增效率(E)在105%~110%,其组内变异系数(i-CV)与组间变异系数(c-CV)均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%(29份阳性病料)。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。 展开更多
关键词 1型鸭肝炎病毒 3型鸭肝炎病毒 鸭病毒性肝炎 实时荧光定量PCR
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血清3型鸭甲型肝炎病毒阳性血清的制备
8
作者 孙庆歌 肖爱芳 +6 位作者 李晶梅 祝春花 李建 朱薇 廖园园 漆世华 谢红玲 《中国兽药杂志》 2014年第9期1-3,共3页
通过使用血清3型鸭甲型肝炎疫苗免疫SPF鸡,制备了一批血清3型鸭甲型肝炎诊断用阳性血清,并对其进行了无菌、支原体和特异性检验以及中和效价测定。结果表明,该血清无菌检验合格,无支原体污染,特异性良好,无禽类常见13种外源病毒抗体,血... 通过使用血清3型鸭甲型肝炎疫苗免疫SPF鸡,制备了一批血清3型鸭甲型肝炎诊断用阳性血清,并对其进行了无菌、支原体和特异性检验以及中和效价测定。结果表明,该血清无菌检验合格,无支原体污染,特异性良好,无禽类常见13种外源病毒抗体,血清中和效价为10-2.8。本研究为鸭甲型肝炎病毒血清学鉴定及相关研究提供了重要的物质基础。 展开更多
关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 阳性血清 SPF鸡
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鸡抗血清3型鸭甲型肝炎血清的制备与初步应用 被引量：1
9
作者 孙庆歌 刘丹 +7 位作者 肖爱芳 李晶梅 祝春花 李建 朱薇 廖园园 漆世华 谢红玲 《家禽科学》 2016年第2期12-15,共4页
通过使用血清3型鸭甲型肝炎疫苗毒免疫SPF鸡,制备血清3型鸭甲型肝炎诊断用标准阳性血清,对制备血清进行无菌、支原体和特异性检验以及效价测定,并用该抗血清进行鸭病毒性肝炎治疗试验。结果表明,该血清无菌检验合格,无支原体污染,特异... 通过使用血清3型鸭甲型肝炎疫苗毒免疫SPF鸡,制备血清3型鸭甲型肝炎诊断用标准阳性血清,对制备血清进行无菌、支原体和特异性检验以及效价测定,并用该抗血清进行鸭病毒性肝炎治疗试验。结果表明,该血清无菌检验合格,无支原体污染,特异性良好,无禽类常见13种外源病毒抗体,血清中和效价为10-2.8。发病雏鸭紧急治疗保护率为91.67%,而与血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)无交叉保护。 展开更多
关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 抗血清 治疗
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鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)不同时间的治疗效果评估
10
作者 刘浩 杨燚 +3 位作者 赵丽霞 张新新 吴雅清 刘艳红 《养禽与禽病防治》 2023年第7期7-11,共5页
将1型鸭甲型肝炎病毒RPVA1901-Z株、3型鸭甲型肝炎病毒RPVA1902-Z株分别人工感染4日龄健康易感雏鸭,在攻毒后4 h、8 h、12 h、18 h和24 h分别皮下注射鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)进行治疗。结果表明,攻毒后4~8 h治疗,治愈率10... 将1型鸭甲型肝炎病毒RPVA1901-Z株、3型鸭甲型肝炎病毒RPVA1902-Z株分别人工感染4日龄健康易感雏鸭,在攻毒后4 h、8 h、12 h、18 h和24 h分别皮下注射鸭甲型肝炎病毒二价卵黄抗体(1型+3型)进行治疗。结果表明,攻毒后4~8 h治疗,治愈率100%,攻毒后12 h治疗,治愈率70%~80%,攻毒后18h治疗,治愈率24.9%~50%,攻毒后24 h治疗,治愈率7.7%~23.5%;攻毒对照死亡率90%~100%;健康对照组100%存活。感染后越早免疫,治疗效果越佳。 展开更多
关键词 1型鸭甲型肝炎病毒 3型鸭甲型肝炎病毒 卵黄抗体
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