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强筋小麦龙麦26Glu-A3d基因遗传效应初步研究
1
作者 宋维富 杨雪峰 +5 位作者 赵丽娟 刘东军 宋庆杰 白光宇 张春利 辛文利 《黑龙江农业科学》 2023年第2期6-10,共5页
龙麦26是东北春麦区强筋小麦育种的核心亲本,为进一步提高该品种品质潜力,拓宽其遗传基础,利用分子标记和6次选择性回交相结合的手段,将Glu-A3位点最优基因Glu-A3d导入龙麦26遗传背景之中,利用BC5F1、BC6F1群体和龙麦26的Glu-A3位点近... 龙麦26是东北春麦区强筋小麦育种的核心亲本,为进一步提高该品种品质潜力,拓宽其遗传基础,利用分子标记和6次选择性回交相结合的手段,将Glu-A3位点最优基因Glu-A3d导入龙麦26遗传背景之中,利用BC5F1、BC6F1群体和龙麦26的Glu-A3位点近等基因系为试材进行Glu-A3d基因遗传效应评价。结果表明,在强筋小麦品种龙麦26遗传背景下,导入Glu-A3d基因使籽粒蛋白、干面筋、面筋指数、吸水率、形成时间和稳定时间等指标3年平均分别提高0.07%、-2.13%、10.73%、0.13%、1.57%和4.97%。Zeleny沉降值和粉质仪的断裂时间2年平均分别提高3.05%和12.65%。以上结果表明,导入Glu-A3d基因使龙麦26品质性状均有不同程度提高。 展开更多
关键词 强筋小麦 品质 低分子量麦谷蛋白亚基 Glu-A3d基因
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2012年猪嵴病毒流行病学调查及3D基因的遗传变异分析 被引量：11
2
作者 张莎 石达 +7 位作者 陈建飞 时红艳 张鑫 刘孝珍 刘随新 王璐 陈洪岩 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期95-98,共4页
为了解猪嵴病毒(PKV)的流行及变异情况,本研究根据PKV的3D基因保守区域核苷酸序列设计一对特异性引物,并利用RT-PCR方法对2012年来自24个省市84个猪场的病料样品共计236份进行3D基因的检测。结果显示:在236份病料中,共有63份为PKV阳性,... 为了解猪嵴病毒(PKV)的流行及变异情况,本研究根据PKV的3D基因保守区域核苷酸序列设计一对特异性引物,并利用RT-PCR方法对2012年来自24个省市84个猪场的病料样品共计236份进行3D基因的检测。结果显示:在236份病料中,共有63份为PKV阳性,阳性率为36.69%;而在检测的84个猪场中,共有36个猪场显示PKV阳性,猪场阳性率为42.85%。此外,对2012年分离的9个PKV部分3D基因进行测序分析,并与GenBank中登录的人、牛、猪以及鼠等嵴病毒株相关序列进行遗传变异分析。结果表明9个PKV 3D基因与国内外其他PKV株无论是在核苷酸水平上还是在氨基端水平上均具有较高的同源性,表明PKV的3D基因具有较高的保守性,可以作为病原检测的靶基因。 展开更多
关键词 猪嵴病毒 流行病学调查 3d基因 遗传变异
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I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：8
3
作者 孔留五 罗玉均 +5 位作者 张桂红 陈建红 徐小芹 廖明 康艳梅 何逸民 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1068-1071,共4页
根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转... 根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因 3d基因 克隆表达
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口蹄疫病毒3D基因在重组杆状病毒中的表达及检测 被引量：6
4
作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 韩松 郑敏 尹革芬 张洪勇 葛淑敏 金扩世 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期175-178,共4页
利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒3D基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了3D基因片段,将pMD18_3D质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用EcoRⅠ及XbaⅠ酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac_3D;再将该重组质粒... 利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒3D基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了3D基因片段,将pMD18_3D质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用EcoRⅠ及XbaⅠ酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac_3D;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid_3D;将Bacmid_3D转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测。经SDS_PAGE和West ernblot检测,结果表明,3D蛋白在重组杆状病毒中获得表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3d基因 杆状病毒 表达
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猪嵴病毒福建株3D基因的克隆及遗传进化分析 被引量：8
5
作者 陈如敬 吴学敏 +6 位作者 车勇良 王隆柏 魏宏 庄向生 刘玉涛 严山 周伦江 《福建农业学报》 CAS 2012年第9期941-944,共4页
根据GenBank中登录的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)3D基因序列特征设计特异性引物,采用RT-PCR方法从福建省某猪场采集腹泻粪便样品和小肠组织混合物中扩增猪嵴病毒3D基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。结果表明,所扩增的... 根据GenBank中登录的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)3D基因序列特征设计特异性引物,采用RT-PCR方法从福建省某猪场采集腹泻粪便样品和小肠组织混合物中扩增猪嵴病毒3D基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。结果表明,所扩增的目的片段编码有完整的3D开放阅读框,全长为1 407bp,编码有468个氨基酸。运用生物信息学软件,将获得3D基因序列和GenBank的猪嵴病毒株3D基因序列进行分析比较,该毒株的3D基因序列和SH-W-CHN/2010/China毒株的核苷酸同源性最高,为93.6%,与WH1株核苷酸同源性最低,为92%。从遗传进化上看,猪嵴病毒和其他中国株在遗传进化上处在一个同一分支,匈牙利分离株处在另一分支,表明猪嵴病毒可能在欧亚大陆上各自独立进化。 展开更多
关键词 猪嵴病毒 3d基因 遗传进化分析
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口蹄疫病毒3D基因的克隆及其编码蛋白的结构和功能预测 被引量：4
6
作者 杜平 尚佑军 +2 位作者 贺延玉 孙晓林 马军武 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期20-25,共6页
采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及... 采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及多个酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸位点,并存在一个单股正链RNA病毒依赖RNA多聚酶的催化区;结构特点显示3D蛋白为口蹄疫病毒复制所需的多聚酶. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3d基因 生物信息学 结构分析
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口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因在毕赤酵母中的表达 被引量：4
7
作者 张腾国 刘在新 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第1期8-11,共4页
以口蹄疫病毒 (Foot and mouthdiseasevirus ,FMDV)RNA聚合酶基因 3D为研究对象 ,对其部分碱基进行定点诱变 ,替换成在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。改造后的目的片段用NotⅠ和AvrⅡ内切酶双酶切 ,然... 以口蹄疫病毒 (Foot and mouthdiseasevirus ,FMDV)RNA聚合酶基因 3D为研究对象 ,对其部分碱基进行定点诱变 ,替换成在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。改造后的目的片段用NotⅠ和AvrⅡ内切酶双酶切 ,然后与相应内切酶双酶切的穿梭载体pPIC9K相连接 ,构建重组表达载体 pPIC9K/ 3D ,转化大肠埃希氏菌JM 10 9,筛选阳性克隆pPIC9K/ 3D。经测序表明 ,插入位置、突变碱基、片段大小和读码框均正确。重组质粒用SacⅠ内切酶线化 ,电转化毕赤酵母SMD116 8,采用G4 18抗性梯度法筛选 ,获得高拷贝整合重组菌株SMD116 8/ pPIC9K/ 3DHIS+MUT+,利用甲醇进行诱导分泌表达 ,经SDS PAGE和Westernblot ting鉴定 ,3D基因在毕赤酵母中表达成功 ,目的蛋白分子质量大小为 5 2ku ,与预期的大小吻合 ,并能够被FMDV阳性血清所识别 ,表达量占总分泌蛋白量的 36 %。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 RNA聚合酶 3d基因 毕赤酵母 表达 碱基 诱变 重组表达载体 甲醇 蛋白 基因克隆
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羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达 被引量：2
8
作者 于琳琳 贾红 +4 位作者 侯绍华 刘丹 丁敏 郭晓宇 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期44-50,共7页
本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d... 本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d基因串联,插入pTarget载体,获得重组质粒pTarget-EG95-(C3d)3,利用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切位点将目的基因EG95-(C3d)3克隆至Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBac-Hta中,获得pFastBacHta-EG95-(C3d)3重组质粒,将该重组质粒转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中进行转座重组,获得携带3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组转座子rBacmid-EG95-(C3d)3,转染Sf9昆虫细胞后获得EG95-(C3d)3重组杆状病毒,并表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行重组蛋白的鉴定。同时利用昆虫细胞表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体进行检测。结果表明,获得了EG95-(C3d)3重组杆状病毒,且EG95-(C3d)3重组融合蛋白在Sf9昆虫细胞得到了正确表达,大小约为132ku,Western blotting鉴定结果显示表达的EG95-(C3d)3重组融合蛋白能与细粒棘球蚴阳性血清产生特异性反应,表明EG95-(C3d)3基因表达产物具有免疫活性。同时表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体有良好的敏感性。EG95-(C3d)3基因在昆虫细胞获得表达,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较,及细粒棘球蚴病的高效检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 包虫病 EG95s基因 C3d基因 重组杆状病毒
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鸭甲型肝炎病毒-Ⅰ型3D基因在昆虫细胞中的表达及抗原检测 被引量：1
9
作者 吴植 夏文龙 +2 位作者 朱善元 顾玲玲 王安平 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2018年第1期16-19,24,共5页
通过高保真PCR方法扩增出鸭甲型肝炎病毒-Ⅰ型(DHAV-Ⅰ)RNA依赖的RNA聚合酶3 D基因,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1中,构建重组杆状病毒转移载体pFB-3D,将其转化感受态细胞DH10Bac,获得重组杆粒rBacmid-3D,转染昆虫细胞Sf9,收获重组... 通过高保真PCR方法扩增出鸭甲型肝炎病毒-Ⅰ型(DHAV-Ⅰ)RNA依赖的RNA聚合酶3 D基因,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1中,构建重组杆状病毒转移载体pFB-3D,将其转化感受态细胞DH10Bac,获得重组杆粒rBacmid-3D,转染昆虫细胞Sf9,收获重组杆状病毒rBac-3D,通过间接免疫荧光、Western blot对重组蛋白的表达水平进行检测。结果表明:间接免疫荧光数据显示表达的重组蛋白能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性结合,Western blot表达的重组蛋白分子量约为51ku,与理论值相符。这一研究说明3D蛋白在昆虫细胞中获得成功表达,为DHAV-Ⅰ型ELISA检测试剂盒的研制提供了技术基础。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒-Ⅰ型 3d基因 昆虫细胞 表达
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逆转录病毒载体介导的稳定表达口蹄疫病毒3D基因的BHK21细胞系的建立 被引量：1
10
作者 毕研丽 沈小燕 +3 位作者 丛国正 刘湘涛 常惠芸 才学鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1115-1120,共6页
【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1... 【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1-3D。用pBPSTR1-3D和pVSV-G双质粒瞬时转染GP2-293包装细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染BHK-21细胞,嘌呤霉素持续筛选12d后获得阳性克隆,并用有限稀释法挑选单个阳性细胞克隆。【结果】应用PCR、RT-PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞中扩增到3D基因,证实目的外源基因能转录并被稳定整合进宿主细胞基因组中。经SDS-PAGE、Westernblot、间接免疫荧光检测到在不同代次的阳性细胞中有目的蛋白表达。【结论】本试验利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将外源基因插入到靶细胞的基因组中,构建了稳定表达口蹄疫病毒RNA聚合酶的包装细胞系,为研究3D基因表达及其蛋白定位提供了方便,也为下一步研究RNA聚合酶生物学功能和疫苗研制提供了科学依据。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3d基因 逆转录病毒载体pBPSTR1 BHK-21细胞系
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1型鸭甲型肝炎病毒3D基因的原核表达与多抗制备 被引量：1
11
作者 王安平 朱善元 吴双 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期536-539,共4页
根据血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)SH株3D基因序列设计并合成1对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增3D基因,将其克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导培养下重组蛋白获得了成功表达。SDS-PAGE显示重组蛋白的分... 根据血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)SH株3D基因序列设计并合成1对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增3D基因,将其克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导培养下重组蛋白获得了成功表达。SDS-PAGE显示重组蛋白的分子量约为68 k D,Western blot分析显示该重组蛋白能与多聚组氨酸标签单抗发生特异性反应。将切胶后纯化的目的蛋白免疫ICR小鼠,制备针对重组蛋白的多抗血清,Western blot结果显示制备的抗血清能够与DHAV-1感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,3D基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于3D蛋白的检测,为3D蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒 3d基因 原核表达 抗血清
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鼠脑心肌炎病毒(TMEV)3D基因的序列保守性分析 被引量：1
12
作者 杨鹏华 倪凤娥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期38-40,共3页
为了探索RNA依赖RNA聚合酶基因(3D基因)的抗病机理,试验比较了小RNA病毒科所有病毒3D基因的序列,分析了3D基因的序列特征。结果表明:小RNA病毒科病毒3D基因的核酸同源性为50.91%,其中最保守的位点有37个,且均有1个异常保守的TAYGGNGAYGA... 为了探索RNA依赖RNA聚合酶基因(3D基因)的抗病机理,试验比较了小RNA病毒科所有病毒3D基因的序列,分析了3D基因的序列特征。结果表明:小RNA病毒科病毒3D基因的核酸同源性为50.91%,其中最保守的位点有37个,且均有1个异常保守的TAYGGNGAYGAY基序,它编码的氨基酸为YGDD;3D基因的氨基酸同源性为42.22%,保守的基序有KDE、PSG、YGDD和PLKR。 展开更多
关键词 鼠脑心肌炎病毒(TMEV) RNA依赖RNA聚合酶基因(3d基因) 抗病机理 转基因育种
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对Ⅰ型鸭肝炎病毒3D基因克隆及其原核表达的研究 被引量：3
13
作者 孔留五 康艳梅 +3 位作者 何逸民 罗玉均 潘全会 张桂红 《四川畜牧兽医》 2009年第2期25-27,共3页
根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌Rosseta... 根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌RossetaⅡ(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导4 h后表达量达到最高,表达产物大小约为70 Ku,表达蛋白能与I型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒(dHV) 3d基因 诱导表达
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携带I型鸭肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒的构建 被引量：3
14
作者 张婧 董嘉文 郭霄峰 《广东畜牧兽医科技》 2011年第1期32-34,38,共4页
为构建含有I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒,本研究将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP)进行改造,在其荧光表达盒内插入I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,将重组后的转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D)转染已感染鸭... 为构建含有I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒,本研究将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP)进行改造,在其荧光表达盒内插入I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,将重组后的转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞,转染细胞盲传2代后仍能观察到绿色荧光。表明本研究已成功构建携带I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D),此研究为研制鸭瘟-鸭肝炎二联苗奠定了基础。 展开更多
关键词 I型鸭肝炎病毒 鸭瘟病毒 3d基因 重组
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番鸭1型病毒性肝炎病毒ZJX株分离鉴定及其3D基因序列分析
15
作者 陈峰 招丽婵 +5 位作者 张祥斌 操胜 雷雯 刘闯 覃健萍 李海燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期586-588,共3页
本研究从广东某养鸭场发病雏番鸭肝脏中分离到1株病毒。利用RT-PCR、基因序列分析、病毒中和试验及动物回归等鉴定为1型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-1)。3D基因序列分析显示,该毒株与2011年分离自黑龙江的1型DHV Du/CH/LGD/111238和Du/CH/LGD/... 本研究从广东某养鸭场发病雏番鸭肝脏中分离到1株病毒。利用RT-PCR、基因序列分析、病毒中和试验及动物回归等鉴定为1型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-1)。3D基因序列分析显示,该毒株与2011年分离自黑龙江的1型DHV Du/CH/LGD/111238和Du/CH/LGD/111239分离株核苷酸同源性最高,达99.6%。分离株F3代尿囊液病毒价为105.5ELD50/0.2 mL,能够被DHV-1阳性血清中和。接种病料研磨上清的鸭胚在接种后3 d～5 d内全部死亡,胚体充血萎缩侏儒。该分离株人工感染3日龄雏番鸭表现为角弓反张和肝脏肿大出血等与临床病症。结果表明该分离株具有较强的致病性。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒 分离鉴定 3d基因 序列分析
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猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析 被引量：6
16
作者 陈进喜 施开创 +4 位作者 黄胜斌 陆文俊 屈素洁 郑敏 李军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期81-88,共8页
采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR... 采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR方法扩增GXLC株的3D基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的3D基因序列进行分析。序列分析结果表明,GXLC株3D基因全长1380 nt,编码460个氨基酸,含有7个抗原表位。同源性分析结果表明,GXLC株与国内外其它EMCV分离株3D基因核苷酸序列的同源性在84.7%~99.7%之间,氨基酸序列的同源性在96.1%~99.6%之间。遗传进化分析结果表明,基于3D基因核苷酸序列绘制的系统进化树可将所有EMCV分离株分成2个群：Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,而鼠源EMCV分布在Ⅰ群,人源EMCV分布在Ⅱ群;GXLC株与其它中国分离株均属于Ⅰa亚群。 展开更多
关键词 猪 脑心肌炎病毒 分离 3d基因 分子特征
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HIST1H3D基因在宫颈癌中的表达及其临床意义 被引量：2
17
作者 周滑雪 杜丹丽 叶国柳 《实用癌症杂志》 2020年第12期1969-1972,共4页
目的检测HIST1H3D基因在宫颈癌的表达情况,进一步分析HIST1H3D基因在宫颈癌组织中的表达情况与临床病理特征、盆腔转移的关系。方法应用免疫组织化学法,检测HIST1H3D基因在正常宫颈、低度宫颈上皮内病变、高度宫颈上皮内病变、宫颈癌组... 目的检测HIST1H3D基因在宫颈癌的表达情况,进一步分析HIST1H3D基因在宫颈癌组织中的表达情况与临床病理特征、盆腔转移的关系。方法应用免疫组织化学法,检测HIST1H3D基因在正常宫颈、低度宫颈上皮内病变、高度宫颈上皮内病变、宫颈癌组织中的表达情况及差异,统计收集患者的标本及临床资料,分析HIST1H3D基因的表达与宫颈癌临床病理特征、盆腔转移的关系。结果HIST1H3D基因在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈、低度宫颈上皮内病变和高度宫颈上皮内病变中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。HIST1H3D基因在宫颈癌中的表达与FIGO分期、病理分级、淋巴结转移有相关性(P<0.05)。但与患者年龄、病理分型、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论HIST1H3D基因在宫颈癌中的表达增加,且表达量随恶性程度增加而增加,提示其过表达与宫颈癌的发生发展有一定的关系,可作为宫颈癌发生发展及淋巴转移的参考指标。 展开更多
关键词 HIST1H3d基因 宫颈癌 免疫组化技术
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鸭甲型肝炎病毒1型3D基因克隆与表达 被引量：1
18
作者 吴朝军 刘金凤 +1 位作者 冯涛 马秀丽 《家禽科学》 2013年第9期7-10,共4页
提取鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)RNA作为模板,进行RT-PCR扩增,得到714bp的3D基因,将纯化的3D基因片段与pMD18-T载体进行连接,构建DHAV-13D基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选获得原核表达载体pET-32a-3D。经ITPG诱... 提取鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)RNA作为模板,进行RT-PCR扩增,得到714bp的3D基因,将纯化的3D基因片段与pMD18-T载体进行连接,构建DHAV-13D基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选获得原核表达载体pET-32a-3D。经ITPG诱导,SDS-PAGE分析表明,3D基因得到正确表达,融合蛋白分子量为71.4kDa。Western blotting结果表明纯化的融合蛋白与DHAV-1阳性血清具有反应性。 展开更多
关键词 dHAV-1 3d基因 克隆 表达
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鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
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作者 马建平 马雪云 裴宗飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期44-46,共3页
为了提取鸭补体C3d基因,并对其进行克隆鉴定,试验采用微量提取法提取了鸭肝脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出补体C3d基因的cDNA,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定后克隆到pMD18-T载体上,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定... 为了提取鸭补体C3d基因,并对其进行克隆鉴定,试验采用微量提取法提取了鸭肝脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出补体C3d基因的cDNA,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定后克隆到pMD18-T载体上,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。结果表明:鸭补体C3d基因序列与原鸡和AA肉鸡的相似性较大,其同源性分别为87.6%和87.5%;而与人、猴、猪、牛、羊、鼠等哺乳动物差异性较大,同源性分别为46.9%、46.9%4、8.7%4、9.1%4、9.1%4、7.5%。其主要变化发生在与CR2受体结合的区域。鸭该区为29个氨基酸,与鸡相同,但比哺乳动物多1个氨基酸,说明补体C3d结构具有种属特异性。 展开更多
关键词 鸭补体C3d基因 RT-PCR CR2结合区 序列分析
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CD3D基因与卵巢癌免疫浸润的相关性及其预后价值
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作者 张韶华 王艺璇 王赞宏 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2023年第5期481-487,共7页
目的探讨CD3D基因在卵巢癌(OC)组织中的表达,对卵巢癌肿瘤微环境中免疫浸润的影响及其预后价值。方法利用GEPIA数据库分析CD3D基因在包括卵巢癌在内的多种肿瘤中的表达情况;收集2011年1月至2017年12月山西白求恩医院治疗的卵巢癌患者22... 目的探讨CD3D基因在卵巢癌(OC)组织中的表达,对卵巢癌肿瘤微环境中免疫浸润的影响及其预后价值。方法利用GEPIA数据库分析CD3D基因在包括卵巢癌在内的多种肿瘤中的表达情况;收集2011年1月至2017年12月山西白求恩医院治疗的卵巢癌患者223例及因子宫平滑肌瘤切除全子宫+双侧附件的患者25例,采用免疫组化SP法检测卵巢癌及正常卵巢组织中CD3D基因的蛋白表达,比较CD3D基因表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系;cBioportal数据库分析CD3D基因的共表达基因;DAVID数据库分析CD3D基因及其共表达基因KEGG功能富集通路;Kaplan Meier plotter数据库分析CD3D基因的预后价值;TIMER2.0数据库分析CD3D基因表达与卵巢癌中主要免疫细胞的免疫浸润关系。结果与正常卵巢组织相比,CD3D蛋白在卵巢癌组织中高表达(P<0.05),且在卵巢癌不同FIGO分期、残留病灶是否达R0间的表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier-Plotter预后分析提示CD3D基因高表达的患者具有更高的生存率(P<0.05)。表达基因的富集分析提示,该组基因主要富集于Th1与Th2细胞分化通路、T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、原发性免疫缺陷通路、PD-L1和PD-1免疫检查点通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性通路等。Timer数据库分析发现CD3D基因与肿瘤微环境中B细胞、CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和树突状细胞的浸润程度呈正相关(均P<0.05)。结论 CD3D基因在卵巢癌组织中高表达,其可能通过调整免疫相关通路影响肿瘤微环境中免疫细胞的浸润而改变患者预后。 展开更多
关键词 Cd3d基因 卵巢癌 免疫浸润 肿瘤微环境
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