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根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化 被引量：18
1
作者 何业华 熊兴华 +4 位作者 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期33-36,共4页
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产... 以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达. 展开更多
关键词 枣树 acc合成酶反义基因 转化
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柿果实ACC合成酶cDNA的克隆及其序列分析 被引量：13
2
作者 饶景萍 童斌 +1 位作者 中野龙平 稻叶昭次 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第5期819-825,共7页
根据其它植物 ACC合成酶 ( 1 - aminocyclopropane- 1 - carboxylic acid synthase,ACS)氨基酸保守区 ,设计 1组简并引物 ,用 RT- PCR法 ,从柿 ( Diospyros kaki Thunb.)果实扩增出3个约 1 kb左右的 c DNA片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体... 根据其它植物 ACC合成酶 ( 1 - aminocyclopropane- 1 - carboxylic acid synthase,ACS)氨基酸保守区 ,设计 1组简并引物 ,用 RT- PCR法 ,从柿 ( Diospyros kaki Thunb.)果实扩增出3个约 1 kb左右的 c DNA片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体上 ,对这些重组克隆进行序列测定和氨基酸序列推导 ,DK- ACS1由 1 1 0 1个碱基组成 ,编码 364个氨基酸 ;DK- ACS2是 1 0 86个碱基 ,编码 35 9个氨基酸 ;DK- ACS3为 1 0 89个碱基 ,编码 363个氨基酸。它们均具有其它植物 ACS合成酶中存在的 7个保守区和 1 1个不变氨基酸残基 ,且在多肽水平上有较高的同源性。与番茄 L E- ACS2的同源性 DK- ACS1是 60 .5 % ,DK- ACS2是 70 .7% ,DK- ACS3为66.9% ;与甜瓜 CM- ACS1的同源性依次分别是 60 .4% ,72 .1 %和 64.4%。 展开更多
关键词 柿果 acc合成酶 基因克隆 序列分析 果实 成熟软化
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环境胁迫和激素诱导甘蔗ACC合成酶基因家族三个成员的表达 被引量：7
3
作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期734-737,共4页
ACC合成酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。在克隆到甘蔗ACC合成酶基因家族3个成员Sc-ACS1、Sc-ACS2和Sc-ACS3的基础上,分别以它们作为探针,检测了激素诱导和环境胁迫对甘蔗苗期该3成员表达的影响。结果表明,乙烯利诱导Sc-A... ACC合成酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。在克隆到甘蔗ACC合成酶基因家族3个成员Sc-ACS1、Sc-ACS2和Sc-ACS3的基础上,分别以它们作为探针,检测了激素诱导和环境胁迫对甘蔗苗期该3成员表达的影响。结果表明,乙烯利诱导Sc-ACS1在叶中表达,在根中不表达;Sc-ACS2在根、叶中表达;Sc-ACS3主要在根部表达,在叶中不表达。在甘蔗叶片中,Sc-ACS1对冷胁迫、暗培养和LiCl胁迫均有应答,并受植物生长激素IAA诱导而表达;Sc-ACS2无论是在生长激素诱导还是环境胁迫下,其mRNA均维持较低水平。 展开更多
关键词 甘蔗 acc合成酶 基因家族 表达
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番茄ACC合成酶基因的反义RNA-核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转化 被引量：11
4
作者 张晓海 扈廷茂 +2 位作者 海燕 李丽莉 王永胜 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期74-78,共5页
将克隆的番茄 ACC合成酶基因的反义 RNA-核酶嵌合的 DNA序列用 Hind 和 Kpn I切割后重组于植物表达载体 p GA643中 ,用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,采用叶盘法转化番茄子叶 ,诱导出再生小植株 ,获得了卡那霉素的抗性植株 .提取... 将克隆的番茄 ACC合成酶基因的反义 RNA-核酶嵌合的 DNA序列用 Hind 和 Kpn I切割后重组于植物表达载体 p GA643中 ,用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,采用叶盘法转化番茄子叶 ,诱导出再生小植株 ,获得了卡那霉素的抗性植株 .提取植物总 DNA,用p GA643作探针 ,通过斑点杂交 ,已筛选出整合有外源基因的工程植株 .为进一步研究该嵌合基因对 ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础 . 展开更多
关键词 转基因番茄 acc合成酶 反义RNA 核酶 转化
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香蕉ACC合成酶cDNA的PCR扩增及序列测定 被引量：14
5
作者 金志强 彭世清 +2 位作者 邵寒霜 孔德骞 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1998年第1期48-51,共4页
从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保... 从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保守区中的7个，并且包括该酶的活性中心。 展开更多
关键词 香蕉 acc合成酶 PCR CONA 序列测定
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由ACC合成酶反义基因转化所得枣树其RNA表达量的测定 被引量：7
6
作者 何业华 林顺权 +2 位作者 林良斌 熊兴华 今石浩正 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-114,共3页
利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA... 利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA起始浓度两者之间呈线性相关(R2=0.9929);转化体中anti ACSGRNA表达量约为4500～10300拷贝/g组织. 展开更多
关键词 REAL-TIMEPCR RT-PCR 反义-ACSG RNA 定量分析 枣树 acc合成酶 反义基因
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ACC合成酶基因及其反义基因对西瓜的遗传转化 被引量：39
7
作者 王春霞 简志英 +3 位作者 刘愚 邹琦 白永延 毛慧珠 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第5期445-450,共6页
以2日龄西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld)无菌苗子叶为外植体,通过与根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行叶盘共培养建立了西瓜的遗传转化系统。所用根癌农杆菌中含有改建后分别携带嵌合NPTⅡ基因和番茄的ACC合成酶基因... 以2日龄西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld)无菌苗子叶为外植体,通过与根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行叶盘共培养建立了西瓜的遗传转化系统。所用根癌农杆菌中含有改建后分别携带嵌合NPTⅡ基因和番茄的ACC合成酶基因及其反义基因的质粒。外植体在MSA培养基(MS盐类、B_5维生素、1.0mg/L BA、0.2mg/L IAA)上预培养3～4d后,与根癌农杆菌共培养4d,随后转移外植体至附加100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的MSA培养基上筛选转化芽。将带芽外植体移入含有100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的伸长培养基(MS+0.2mg/L KT)上进行芽伸长,切取2～3cm高的伸长芽移入生根培养基(1/2MS+0.1mg/L NAA)生根。Southern blot结果证明获得转基因植株,乙烯释放指标表明转入的正义和反义ACC合成酶基因得到不同程度的表达。 展开更多
关键词 西瓜 转基因西瓜 acc合成酶基因 反义基因
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富有柿果ACC合成酶基因RNA干扰植物表达载体的构建 被引量：7
8
作者 唐霞 周志平 +2 位作者 赵丛枝 马俊莲 张子德 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第1期73-77,共5页
分析克隆的柿果ACC合成酶基因的序列,根据其与表达载体pSMAK311上的酶切位点设计2对带酶切位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增柿果ACC合成酶基因片段。双酶切PCR回收产物以及表达载体,将酶切产物定向连接构建成反义表达载体;在... 分析克隆的柿果ACC合成酶基因的序列,根据其与表达载体pSMAK311上的酶切位点设计2对带酶切位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增柿果ACC合成酶基因片段。双酶切PCR回收产物以及表达载体,将酶切产物定向连接构建成反义表达载体;在此基础上构建该酶基因的shRNA表达载体,由此转录的mRNA因两端序列反向互补而成发夹式RNA,因此,可应用于RNA干扰研究。将所构建好的载体转化农杆菌EHA101用于后续的遗传转化研究。 展开更多
关键词 柿果 acc合成酶 RNA干扰 植物表达载体
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香蕉ACC合成酶反义基因转化香蕉的研究 被引量：13
9
作者 吴静 李瑞珍 +1 位作者 徐碧玉 金志强 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第4期497-501,共5页
香蕉是重要的热带、亚热带地区作物,典型的呼吸跃变型果实,不耐贮藏。传统的保鲜方法存在诸多弊端,利用现代生物技术培育耐贮藏新品种,已经成为我们解决香蕉保鲜问题的重要课题。本研究利用果实特异性ACC合成酶基因反义植物表达载体,采... 香蕉是重要的热带、亚热带地区作物,典型的呼吸跃变型果实,不耐贮藏。传统的保鲜方法存在诸多弊端,利用现代生物技术培育耐贮藏新品种,已经成为我们解决香蕉保鲜问题的重要课题。本研究利用果实特异性ACC合成酶基因反义植物表达载体,采用基因枪和农杆菌介导法转化海南主栽的巴西香蕉及红香蕉,并比较了不同转化方法及不同栽培品种的转化效果。结果表明农杆菌侵染法好于基因枪法,在农杆菌侵染方法中,对红香蕉的转化效果好于巴西香蕉。经PCR检测获得了9株转化植株,进一步采用Southern blot分析的方法,其中4株杂交信号较强,确认ACC合成酶反义基因已经整合进香蕉基因组中。本研究为香蕉的转基因研究和耐储藏新品种的培育奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 香蕉 acc合成酶基因 反义植物表达载体 转化
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丝瓜ACC合成酶的原核表达、分离纯化及性质鉴定 被引量：4
10
作者 高波 曾庆银 +1 位作者 陆海 付学奇 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期622-624,共3页
将构建成功的丝瓜ACC合成酶cDNA的重组质粒,转化为大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后得到特异性高效表达,表达蛋白以包涵体形式存在.包涵体经洗涤和Zn2+螯合柱层析,得到纯化蛋白.SDS PAGE显示纯化蛋白分子量为55000... 将构建成功的丝瓜ACC合成酶cDNA的重组质粒,转化为大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后得到特异性高效表达,表达蛋白以包涵体形式存在.包涵体经洗涤和Zn2+螯合柱层析,得到纯化蛋白.SDS PAGE显示纯化蛋白分子量为55000的单一蛋白带.经活性分析,该酶最适pH值为8.5,米氏常数(Km)为44.2μmol/L. 展开更多
关键词 白带 原核表达 半乳糖 活性分析 糖苷 诱导 重组质粒 acc合成酶 丝瓜 鉴定
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柿果ACC合成酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：6
11
作者 唐霞 马俊莲 +1 位作者 刘月英 王国英 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期172-174,共3页
以柿果组织中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.1 kb的富有柿果ACC合成酶(Fuyu-ACS)的 基因片段,将此片段克隆到pGEMR-T easy vector上,经测序分析与Genbank中平核无柿果的DK-ACS1基因核苷酸 序列的同源性为99％。设计了2对带限制... 以柿果组织中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.1 kb的富有柿果ACC合成酶(Fuyu-ACS)的 基因片段,将此片段克隆到pGEMR-T easy vector上,经测序分析与Genbank中平核无柿果的DK-ACS1基因核苷酸 序列的同源性为99％。设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ACS- Fuyu片段。2个片段经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pBI121的35 S启动子和NOS终止 子之间,构建成Fuyu-ACS基因的植物表达载体。 展开更多
关键词 柿果 acc合成酶 植物表达载体
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河套蜜瓜ACC合成酶cDNA片段的克隆和序列分析 被引量：9
12
作者 尹俊 哈斯阿古拉 方天祺 《生物技术》 CAS CSCD 1997年第3期10-13,共4页
1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）合成酶是高等植物中乙烯生物合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜（CucumismeloL．cvHetau）果实的RNA为模板，经反转录和PCR扩增得到预期大小的DNA片段，插入到pUC19的SmaⅠ位点后转化E.coliJM109，筛选出重组子pH... 1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）合成酶是高等植物中乙烯生物合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜（CucumismeloL．cvHetau）果实的RNA为模板，经反转录和PCR扩增得到预期大小的DNA片段，插入到pUC19的SmaⅠ位点后转化E.coliJM109，筛选出重组子pHMAS1。序列分析表明获得了长627bp的ACC合成酶cDNA片段。与已报道的ACC合成酶基因相应序列比较有很高的同源性． 展开更多
关键词 河套蜜瓜 acc合成酶 CDNA 克隆 序列分析
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全雌系苦瓜ACC合成酶基因cDNA克隆及序列分析 被引量：4
13
作者 王日升 张曼 +4 位作者 方锋学 黄如葵 刘文君 杨丽涛 李杨瑞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期54-58,共5页
以全雌系苦瓜‘X-Hei-d-d’花蕾为材料,根据已报道ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)保守氨基酸序列设计简并引物,采用RT-PCR技术及序列拼接,获得了全雌系苦瓜ACS基因cDNA序列,命名为Mc-ACS4(GenBank登录... 以全雌系苦瓜‘X-Hei-d-d’花蕾为材料,根据已报道ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)保守氨基酸序列设计简并引物,采用RT-PCR技术及序列拼接,获得了全雌系苦瓜ACS基因cDNA序列,命名为Mc-ACS4(GenBank登录号:FJ459814)。该序列包含一个1 455 bp的完整开放阅读框,编码484个氨基酸,具有7个保守区;系统进化上与普通苦瓜ACS基因首先聚类,同源性达99%,二者仅有2个氨基酸差异,推测可能与全雌系苦瓜性别分化有关。 展开更多
关键词 苦瓜 全雌系 acc合成酶 基因克隆 序列分析
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病菌侵染对番茄果实乙烯生成,ACC合成酶和脂氧合酶活性的影响(英文) 被引量：4
14
作者 田世平 罗云波 +1 位作者 宫钦钦 刘红 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期159-164,共6页
本文以红熟期的番茄 (Lycopersicon esculentum Mill.)果实为材料 ,主要研究病菌侵染与果实中乙烯生成 ,ACC合成酶和脂氧合酶 (L OX)的关系 ,以及不同乙烯处理对感病果实 ACC合成酶和脂氧合酶 (L OX)活性的影响。结果表明 :用葡萄孢菌 (... 本文以红熟期的番茄 (Lycopersicon esculentum Mill.)果实为材料 ,主要研究病菌侵染与果实中乙烯生成 ,ACC合成酶和脂氧合酶 (L OX)的关系 ,以及不同乙烯处理对感病果实 ACC合成酶和脂氧合酶 (L OX)活性的影响。结果表明 :用葡萄孢菌 (Botrytis cinerea)接种采后番茄果实在 2 5℃下存放7d后 ,感病果实的乙烯释放量显著增加 ,ACC合成酶和脂氧合酶 (LOX)活性也明显提高。在贮藏环境中增加乙烯吸收剂可明显地延缓葡萄孢菌的发病 ,而且 ACC合成酶和 L OX酶的活性也相对较低。由此证明病菌侵染与果实乙烯释放量 ,以及与 ACC合成酶和 L 展开更多
关键词 采后腐烂 病菌侵染 番茄果实 乙烯生成 acc合成酶 脂氧合酶活性
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茶树ACC合成酶基因全长cDNA的克隆及其生物信息学分析 被引量：5
15
作者 张亚丽 乔小燕 陈亮 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期235-241,共7页
乙烯是一种重要的植物激素,参与植物许多生理过程。ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)合成酶(ACS)是植物乙烯合成过程中的限速酶,对乙烯的合成具有重要的调控作用。利用其它植物ACS基因的保守序列设计兼并引物,采用RACE(Rapid Amplificationc DN... 乙烯是一种重要的植物激素,参与植物许多生理过程。ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)合成酶(ACS)是植物乙烯合成过程中的限速酶,对乙烯的合成具有重要的调控作用。利用其它植物ACS基因的保守序列设计兼并引物,采用RACE(Rapid Amplificationc DNA Ends)和RT-PCR等技术,克隆得到编码茶树ACS基因的全长cDNA序列,长1579bp,编码478个氨基酸,预测分子量约为53.7kD,等电点8.039,GenBank登录为EF205149。以Neighbor-Joining法构建进化树,发现茶树ACS基因与柿树中的同类基因亲缘关系最近。茶树ACS基因的克隆为从分子水平认识乙烯在茶树上的生理作用奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 乙烯 acc合成酶 克隆 生物信息学
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蝴蝶兰ACC氧化酶和ACC合成酶融合反义表达载体的构建 被引量：4
16
作者 王宇腾 崔波 +3 位作者 蒋素华 武思 牛苏燕 叶永忠 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期115-117,121,共4页
为了获得具有超常花期的蝴蝶兰新品系,根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶(ACS)基因和ACC氧化酶(ACO)基因的序列,设计引物从蝴蝶兰总RNA中克隆出ACS保守区的461 bp片段和ACO的333 bp片段,完成2个基因的克隆和测序后,将ACS基因片段和ACO基因片... 为了获得具有超常花期的蝴蝶兰新品系,根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶(ACS)基因和ACC氧化酶(ACO)基因的序列,设计引物从蝴蝶兰总RNA中克隆出ACS保守区的461 bp片段和ACO的333 bp片段,完成2个基因的克隆和测序后,将ACS基因片段和ACO基因片段以反义的方向插入到中间载体pBI221 CaMV启动子的下游,酶切后获得含有CaMV启动子的ACS和ACO基因的反义融合片段。将此包含启动子的反义融合片段连接到植物表达载体pCAM-BIA3301中,获得ACC合成酶基因和ACC氧化酶基因融合的反义表达载体,将构建好的植物表达载体转化农杆菌LBA4404,用于侵染蝴蝶兰原球茎。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 acc氧化酶 acc合成酶 融合反义基因 根癌农杆菌
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果实特异启动子调控薄皮甜瓜ACC合成酶反义基因植物表达载体的构建 被引量：6
17
作者 郭庆勋 秦智伟 +1 位作者 丁国华 周秀艳 《中国农学通报》 CSCD 2006年第1期34-37,共4页
从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约0.5kb的ACC合成酶基因的片段,将其克隆到质粒载体pMD18-T中,测序表明,该基因为583bp,编码194个氨基酸;从番茄(东农706)叶片组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约2.2kb的E8基... 从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约0.5kb的ACC合成酶基因的片段,将其克隆到质粒载体pMD18-T中,测序表明,该基因为583bp,编码194个氨基酸;从番茄(东农706)叶片组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约2.2kb的E8基因片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为2192bp;以pCAM2301为起始植物表达载体,pCAM-GT为中间载体,成功构建了果实特异启动子(E8)调控薄皮甜瓜ACC合成酶反义基因植物表达载体,采用冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多
关键词 薄皮甜瓜 番茄 反义acc合成酶基因 特异启动子 植物表达载体
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薄皮甜瓜果实ACC合成酶cDNA克隆及反义表达载体的构建 被引量：4
18
作者 郭庆勋 秦智伟 +1 位作者 丁国华 李景鹏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期22-27,共6页
从成熟的薄皮甜瓜(Cucumis melo cv.Qitian I)果肉组织中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到0.7 kb的cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。测序表明,该基因为777 bp,编码258个氨基酸,与Gen-Bank中甜瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocy... 从成熟的薄皮甜瓜(Cucumis melo cv.Qitian I)果肉组织中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到0.7 kb的cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。测序表明,该基因为777 bp,编码258个氨基酸,与Gen-Bank中甜瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase,ACS)基因比对,核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为98%。克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pCAM2301的E8启动子和NOS终止子之间,构建成E8调控下ACS基因反义表达载体。通过冻融法将携带反义cDNA的植物表达载体质粒转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多
关键词 薄皮甜瓜 acc合成酶基因 反义基因 反义表达载体
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无花果ACC合成酶基因克隆及序列分析 被引量：3
19
作者 张帅 张明 +3 位作者 寇天舒 马俊莲 唐霞 张子德 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期34-37,共4页
为进一步利用基因工程手段调控无花果乙烯的合成,以无花果果肉为材料提取基因组DNA,根据已报道的无花果ACC合成酶基因序列设计引物,采用PCR技术扩增得到一条约600 bp的特异片段,将该片段克隆到pGM-Teasy vector上经PCR、酶切和测序鉴定... 为进一步利用基因工程手段调控无花果乙烯的合成,以无花果果肉为材料提取基因组DNA,根据已报道的无花果ACC合成酶基因序列设计引物,采用PCR技术扩增得到一条约600 bp的特异片段,将该片段克隆到pGM-Teasy vector上经PCR、酶切和测序鉴定。序列分析结果表明,基因全长590 bp,编码196个氨基酸,该序列与GenBank上已登陆的Masui Dauphine-ACS1的cDNA序列同源性达99%,氨基酸同源性达98%。结果表明,成功克隆到了无花果ACS基因片段。 展开更多
关键词 无花果 acc合成酶 基因克隆 序列分析
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植物ACC合成酶在大肠杆菌中高效表达及表达产物活性测定 被引量：2
20
作者 朱青松 刘中华 +2 位作者 陈雪梅 蒋湘宁 李凝 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期15-17,共3页
丝瓜ACC合成酶cDNA在T7启动子的作用下 ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌中高效表达 ,表达外源蛋白可占菌体总蛋白的 45 2 % .表达的ACC合成酶一部分以可溶的形式存在 ,具有与天然ACC合成酶相似的酶活性 ,将反应底物S 腺苷蛋氨酸 (SAM)转化为 1... 丝瓜ACC合成酶cDNA在T7启动子的作用下 ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌中高效表达 ,表达外源蛋白可占菌体总蛋白的 45 2 % .表达的ACC合成酶一部分以可溶的形式存在 ,具有与天然ACC合成酶相似的酶活性 ,将反应底物S 腺苷蛋氨酸 (SAM)转化为 1 氨基环丙烷 1 羧酸 (ACC)并在细菌培养基中积累 ,另一部分则以无活性的包涵体形式存在于菌体中 . 展开更多
关键词 acc合成酶 高效表达 乙烯 植物
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