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非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析
1
作者
户鑫兵
王轩莹
+6 位作者
宋昱庆
田占成
关贵全
苟惠天
罗建勋
殷宏
独军政
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期350-356,共7页
非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列...
非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。
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关键词
非洲马瘟病毒
ahsv
ns1
蛋白
昆虫细胞表达
抗原性
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题名
非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析
1
作者
户鑫兵
王轩莹
宋昱庆
田占成
关贵全
苟惠天
罗建勋
殷宏
独军政
机构
中国农业科学院
甘肃农业大学动物医学院
江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
甘肃省病原生物学基础学科研究中心
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期350-356,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFD1800500)
中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(1610312021014)
+2 种基金
甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024)
甘肃省科技厅项目(22CX8NA011)
农业科技创新工程项目(CAASASTIP-2016-LVRI)。
文摘
非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。
关键词
非洲马瘟病毒
ahsv
ns1
蛋白
昆虫细胞表达
抗原性
Keywords
African horse sickness virus
ahsv ns1 protein
insect cell expression
antigenicity
分类号
S852.659.4 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析
户鑫兵
王轩莹
宋昱庆
田占成
关贵全
苟惠天
罗建勋
殷宏
独军政
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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