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应用免疫捕获RT-PCR检测槟榔APV1病毒
1
作者 张怀文 赵雪 +2 位作者 王颢 王洪星 黄惜 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第15期5037-5042,共6页
槟榔黄化病的蔓延已经严重威胁海南的槟榔种植业,其病原被鉴定为APV1 (Areca palm velarivirus1)病毒。为了提高APV1病毒检测的效率及灵敏度,本研究拟采用免疫捕获RT-PCR (IC-RT-PCR)对APV1病毒进行检测。首先制备APV1病毒外壳蛋白的单... 槟榔黄化病的蔓延已经严重威胁海南的槟榔种植业,其病原被鉴定为APV1 (Areca palm velarivirus1)病毒。为了提高APV1病毒检测的效率及灵敏度,本研究拟采用免疫捕获RT-PCR (IC-RT-PCR)对APV1病毒进行检测。首先制备APV1病毒外壳蛋白的单克隆抗体,然后将抗体包被PCR管,加入槟榔黄化叶片或者与APV1病毒虫媒粗提取液进行免疫捕获,最后进行RT-PCR检测。研究结果显示,IC-RT-PCR对槟榔黄化病叶片样品中APV1病毒的检测灵敏度比普通RT-PCR高2 500倍,对粉蚧样品中APV1病毒的检测灵敏度比普通RT-PCR高125倍。IC-RT-PCR避免了RNA提取的环节,检测效率提高,且检测灵敏度更高,对检测的浓度样品具有巨大技术优势。本研究结果为APV1病毒的检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 槟榔 apv1病毒 免疫捕获RT-PCR 检测技术
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槟榔苗对APV1病毒的生理响应
2
作者 张丛 翟金玲 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第19期6516-6522,共7页
本研究以‘热研一号’槟榔苗作为实验材料,探究在海南大肆传播的由槟榔隐症病毒1(areca palm velarivirus 1,APV1)引起的槟榔黄化病致病机理。通过接种带APV1病毒粉蚧的方式获得携带病毒的槟榔苗,同时以健康槟榔苗(CK)作对照,在其他条... 本研究以‘热研一号’槟榔苗作为实验材料,探究在海南大肆传播的由槟榔隐症病毒1(areca palm velarivirus 1,APV1)引起的槟榔黄化病致病机理。通过接种带APV1病毒粉蚧的方式获得携带病毒的槟榔苗,同时以健康槟榔苗(CK)作对照,在其他条件不变的基础上进行各项生理指标的测定和叶片显微结构的观察。研究结果表明,APV1病毒的侵染会导致槟榔苗叶肉变黄但是叶脉保持绿色,叶肉细胞密度、叶绿素a、叶绿素b和超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著下降,叶绿体数量、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、脯氨酸含量、丙二醛含量则显著升高,叶片表皮厚度无显著变化。同时实验分高中低(L1,L2,L3)三个叶位进行对比测定。本研究对于以后防治槟榔黄化病具有一定的价值和意义。 展开更多
关键词 槟榔苗 apv1 黄化病 生理指标
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槟榔APV1病毒多克隆抗体制备及酶联免疫检测 被引量：1
3
作者 陈阳 王洪星 黄惜 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第2期518-523,共6页
槟榔是海南重要的经济作物,APV1 (areca palm velarivirus 1)病毒引起的槟榔黄化病严重危害槟榔产业的健康发展。研发快速精准的APV1病毒检测技术对于防控槟榔黄化病具有重要意义。本研究利用RT-PCR扩增APV1病毒的外壳蛋白(CP)基因序列... 槟榔是海南重要的经济作物,APV1 (areca palm velarivirus 1)病毒引起的槟榔黄化病严重危害槟榔产业的健康发展。研发快速精准的APV1病毒检测技术对于防控槟榔黄化病具有重要意义。本研究利用RT-PCR扩增APV1病毒的外壳蛋白(CP)基因序列,构建原核表达载体pET30a-APV1-CP并转化至大肠杆菌,经诱导表达和蛋白纯化获得APV1-CP蛋白。通过注射兔子获得多克隆抗体,经检测其效价为102 400。采用ELISA和RT-PCR分别对槟榔APV1病毒检测,发现两种检测方法大部分的检测结果基本一致。APV1病毒ELISA检测技术对槟榔种苗的检测及槟榔黄化病的防控具有重要的实用价值。 展开更多
关键词 槟榔黄化病 apv1病毒 多克隆抗体 酶联免疫检测
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多重PCR快速检测槟榔黄化植原体和槟榔隐症病毒1体系的建立
4
作者 彭春霖 黄丽云 +4 位作者 朱辉 魏红宇 郑馨 赵正武 刘立云 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第5期772-776,共5页
由槟榔黄化植原体(areca palm yellow leaf phytoplasma,AYLP)引起的黄化病和槟榔隐症病毒1(Areca palm velarivirus 1,APV1)引起的黄叶病毒病是危害槟榔树最严重的两种病害,对海南槟榔产业造成了巨大的经济损失,建立快速的检测技术对... 由槟榔黄化植原体(areca palm yellow leaf phytoplasma,AYLP)引起的黄化病和槟榔隐症病毒1(Areca palm velarivirus 1,APV1)引起的黄叶病毒病是危害槟榔树最严重的两种病害,对海南槟榔产业造成了巨大的经济损失,建立快速的检测技术对于两种病害的预警防控具有重要意义。利用多重PCR(Multiplex PCR)技术同时检测AYLP和APV1,即AYLP巢式PCR第一轮结束后,再使用一次多重PCR对两种病原同时进行扩增,最后进行电泳观察结果。结果显示,通过对多重PCR浓度体系和退火温度进行优化,在一个体系中成功扩增出AYLP和APV1,得到525和311 bp两条特异性大小条带。多重PCR检测与单一PCR检测结果完全一致,并且与单一PCR检测方法比较,多重PCR方法精简了操作步骤,提高了检测效率,显著降低了检测成本,为槟榔黄化病和黄叶病毒病的常规诊断提供了新方法。因此,该技术在AYLP和APV1常规检测中具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 槟榔黄化病 植原体 apv1 多重PCR 新方法
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山东省3家鹦鹉养殖场多瘤病和喙羽病的病原检测与序列分析 被引量：3
5
作者 吴汝娟 李玉杰 +5 位作者 谢立香 吴明庆 马婧姣 王伟利 田夫林 邬静 《中国动物检疫》 CAS 2020年第3期103-108,共6页
2018年山东省某养殖场发生大量幼龄鹦鹉死亡事件,疑似为病毒感染。为探寻病因,开展了该场及省内另外两个鹦鹉养殖场的流行病学调查。利用PCR技术对临床样品中提取的DNA或RNA进行检测,结果发现新城疫与禽流感病毒均呈阴性,而禽多瘤病毒(A... 2018年山东省某养殖场发生大量幼龄鹦鹉死亡事件,疑似为病毒感染。为探寻病因,开展了该场及省内另外两个鹦鹉养殖场的流行病学调查。利用PCR技术对临床样品中提取的DNA或RNA进行检测,结果发现新城疫与禽流感病毒均呈阴性,而禽多瘤病毒(APV1)与鹦鹉喙羽病病毒(PBFDV)呈现为强阳性,由此推断此3个鹦鹉养殖场存在APV1和PBFDV感染,平均病毒检出率分别为67.9%与71.4%,共感染检出率率为58.0%。对阳性样品进化全基因分析发现:区域内的PBFDV流行毒株同源性高,与该地区早期报道的毒株亲缘关系较为接近;APV1的VP1基因同源性较高,与欧洲分离毒株亲缘关系较为接近,说明我国流行的APV1或来源于进口鹦鹉。本研究警示,需要加强鹦鹉疾病防控,严格鹦鹉进出口检疫,并制定和健全标准的鹦鹉病检疫程序。 展开更多
关键词 禽多瘤病毒 鹦鹉喙羽病病毒 流行病学调查 进化分析 共感染
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杏衰退萎黄病病毒的siRNA高通量测序和RT-PCR鉴定 被引量：8
6
作者 陈雅寒 马强 +2 位作者 孙平平 张磊 李正男 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期725-733,共9页
为了明确引起杏衰退萎黄病的病毒种类,利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)高通量测序技术,结合生物信息寻找杏衰退萎黄样品中的病毒序列,发现存在亚洲李属病毒1(Asian prunus virus 1,APV1)和亚洲李属病毒3(Asian prunus virus... 为了明确引起杏衰退萎黄病的病毒种类,利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)高通量测序技术,结合生物信息寻找杏衰退萎黄样品中的病毒序列,发现存在亚洲李属病毒1(Asian prunus virus 1,APV1)和亚洲李属病毒3(Asian prunus virus 3,APV3)。为了验证该结果,采用RT-PCR对10个待测杏样品进行APV1、APV2和APV3检测,所有样品中未检测到APV2,检出APV1和APV3的样品数分别为3和4个。对检测到病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)进行测序和系统进化分析,分别获得了3条653 bp的APV1和4条1031 bp(或1032 bp)的APV3 CP基因片段;3条APV1 CP基因核苷酸序列一致性为99.2%~99.8%,与NCBI中已发表的26个APV1 CP基因序列一致性为44.0%~99.8%;4条APV3 CP基因序列一致性为78.5%~99.5%,与NCBI中已发表的26个APV3 CP基因序列一致性为44.7%~99.5%。 展开更多
关键词 杏 衰退萎黄病 apv1 APV3 SIRNA
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