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ATPS法分离纯化Aspergillus sp.F044脂肪酶 被引量：6
1
作者 闫云君 陈晖 +1 位作者 杨江科 刘曼西 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期92-95,共4页
研究了Aspergillussp.F044脂肪酶在双水相(ATPS)中的分配平衡,考察了PEG相对分子质量、PEG/磷酸盐质量分数、pH值和NaCl质量分数等5个重要因素对分配平衡的影响.发现PEG相对分子质量越小疏水作用越强,越有利于F044脂肪酶向上相分配,并... 研究了Aspergillussp.F044脂肪酶在双水相(ATPS)中的分配平衡,考察了PEG相对分子质量、PEG/磷酸盐质量分数、pH值和NaCl质量分数等5个重要因素对分配平衡的影响.发现PEG相对分子质量越小疏水作用越强,越有利于F044脂肪酶向上相分配,并且两相间电势差、氢键作用等对分配平衡有较大影响.试验得到的最优纯化条件为:PEG相对分子质量为600,质量分数为17.5%,磷酸盐质量分数为12.5%,w(NaCl)=0.5%,pH值为7.0,在此条件下脂肪酶分配系数达到7.1,纯化系数达到4.7,回收率达到91%.直线放大试验结果表明:该系统能够用于大量分离纯化Aspergillussp.F044脂肪酶,具有工业应用价值. 展开更多
关键词 双水相(atps) 脂肪酶 分离纯化
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玉米ST和ATPS部分cDNA序列克隆及分析 被引量：3
2
作者 朱超 王保莉 曲东 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1742-1746,共5页
硫酸盐转运蛋白(ST)和ATP硫酸化酶(ATPS)是根系吸收硫酸盐和植物体内硫酸盐同化过程的关键蛋白和酶,在硫酸盐的生物转运过程中具有重要作用.以水培玉米农大108根系为材料,并根据已报道的玉米的硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶基因保守序列... 硫酸盐转运蛋白(ST)和ATP硫酸化酶(ATPS)是根系吸收硫酸盐和植物体内硫酸盐同化过程的关键蛋白和酶,在硫酸盐的生物转运过程中具有重要作用.以水培玉米农大108根系为材料,并根据已报道的玉米的硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶基因保守序列分别设计PCR引物对,采用RT-PCR方法克隆到783 bp和820 bp的部分硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶cDNA片段,分别命名为ST_ND108和ATPS_ND108.序列分析和比对结果显示,ST_ND108与已报道的玉米和水稻的高亲和型硫酸盐转运蛋白基因同源性分别为99%和85%;而ATPS_ND108与已报道的玉米ATP硫酸化酶基因同源性达到97%,进化树聚类分析和预测氨基酸的BLAST结果证实ST_ND108为高亲和性硫酸盐转运蛋白基因片段,ATPS_ND108为质体ATP硫酸化酶基因片段. 展开更多
关键词 玉米根系 硫酸盐转运蛋白 ATP硫酸化酶 cDNA基因克隆 序列分析
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褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的克隆与功能分析 被引量：1
3
作者 冯娅琳 郝培应 +3 位作者 俞飞飞 陆潮峰 朱家骏 俞晓平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期519-526,共8页
【目的】克隆褐飞虱Nilaparvata lugens ATP合酶b亚基基因全长cDNA序列,并通过RNA干扰技术对该基因的功能进行研究,探讨其在褐飞虱防治中的潜在价值。【方法】根据本实验室获得的褐飞虱转录组测序数据提供的ATP合酶b亚基基因部分核心序... 【目的】克隆褐飞虱Nilaparvata lugens ATP合酶b亚基基因全长cDNA序列,并通过RNA干扰技术对该基因的功能进行研究,探讨其在褐飞虱防治中的潜在价值。【方法】根据本实验室获得的褐飞虱转录组测序数据提供的ATP合酶b亚基基因部分核心序列信息,以水稻品种TN1饲养的褐飞虱为材料,应用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长cDNA;通过实时荧光定量PCR技术研究其在褐飞虱不同发育阶段和5龄若虫不同组织中的表达谱;并利用褐飞虱2龄若虫通过饲喂法对该基因进行RNAi实验。【结果】成功克隆了褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的全长cDNA序列(Gen Bank登录号:MF973493)。该序列包含一个843 bp的完整开放阅读框,编码280个氨基酸。荧光定量PCR表明,ATPSb基因的mRNA水平在褐飞虱不同发育阶段以1-2龄若虫期为高,随着龄期增大呈下降趋势,在雌成虫中也随着羽化时间增加而下降,在雄成虫中的表达量高于雌成虫。在5龄若虫不同组织中的表达量以胸部中为最高,头部、中肠、卵巢和脂肪体中相对表达量较低。从靶向ATPSb基因的RNA干扰第6天起,处理组中靶标基因的mRNA水平降低,并且RNA干扰对褐飞虱若虫具有显著致死效果;在RNA干扰后第18天时,对照组个体存活率仍保持在约80%的较高水平,而饲喂ds ATPSb的RNA干扰组基本无个体存活。【结论】本研究结果显示,ATPSb基因对褐飞虱的生存具有重要作用,靶向ATPSb基因的RNA干扰对褐飞虱具有显著的抑制效果,ATPSb基因可以作为褐飞虱防治的潜在靶标进行深入研究。 展开更多
关键词 褐飞虱 ATP合酶 atpsb RNA干扰 存活率
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2份野桑蚕材料线粒体ATPsynthase F0 subunit 6基因的克隆及遗传进化分析
4
作者 楚渠 孟刚 彭云武 《陕西农业科学》 2017年第8期38-41,共4页
本研究对2份野桑蚕材料(ws-aksq和ws-akhb)线粒体atp6基因进行了克隆和序列分析。克隆结果表明,2株野桑蚕atp6基因ORF框全长678bp,编码225个氨基酸残基。序列联配比对结果表明2株野桑蚕atp6基因之间存在6处碱基的差异。ws-aksq野桑蚕atp... 本研究对2份野桑蚕材料(ws-aksq和ws-akhb)线粒体atp6基因进行了克隆和序列分析。克隆结果表明,2株野桑蚕atp6基因ORF框全长678bp,编码225个氨基酸残基。序列联配比对结果表明2株野桑蚕atp6基因之间存在6处碱基的差异。ws-aksq野桑蚕atp6基因与家蚕c108、野桑蚕Qingzhou系、野桑蚕日本系的相似度分别为0.9926、0.9912和0.9690;ws-akhb野桑蚕与上述3者的相似度分别为0.9926、1.0000、0.9676。系统发生分析表明,鳞翅目下7个亚科的昆虫atp6基因分别聚为7枝,2份野桑蚕atp6基因与中国系野桑蚕亲缘关系较为接近,与日本株较远。本研究为深入利用线粒体基因组开展野桑蚕分类及与其它昆虫的遗传进化研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 野桑蚕 线粒体 ATP6 克隆 进化
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辣椒ATP硫酸化酶基因(CaATPS1)的克隆与逆境表达
5
作者 朱磊 杨路明 +1 位作者 孙守如 李严曼 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1040-1047,共8页
采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因... 采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因与Gen Bank中登录的茄科植物烟草、马铃薯及其它物种中的ATPS1氨基酸序列具有较高的同源性;进化树分析表明,辣椒Ca ATPS1与同为茄科属的烟草、马铃薯和胡麻属的芝麻处于同一进化分枝上,而与十字花科植物进化关系较远;荧光定量PCR分析显示,Ca ATPS1能被低温、干旱、高盐、机械损伤、过氧化氢、水杨酸、乙烯利以及DC3000侵染等各种胁迫和信号分子诱导。 展开更多
关键词 ATP硫酸化酶 辣椒 基因克隆与表达特性 胁迫应答
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3例K_(ATP)通道基因突变致新生儿糖尿病的基因及治疗分析
6
作者 熊婷 杨利 +1 位作者 余珍 杨玉 《药品评价》 CAS 2024年第4期466-469,共4页
目的提高临床医生对新生儿糖尿病(neonatal diabetes mellitus,NDM)的认识和诊治能力。方法分析3例NDM患儿,对其临床特点、基因及治疗结果进行分析总结并随访预后。结果3例患儿均考虑K_(ATP)通道基因突变,从胰岛素治疗成功过渡到格列本... 目的提高临床医生对新生儿糖尿病(neonatal diabetes mellitus,NDM)的认识和诊治能力。方法分析3例NDM患儿,对其临床特点、基因及治疗结果进行分析总结并随访预后。结果3例患儿均考虑K_(ATP)通道基因突变,从胰岛素治疗成功过渡到格列本脲口服治疗。2例患儿目前仍在口服格列本脲,考虑为永久性新生儿糖尿病(PNDM),1例患儿治疗半年后停药,考虑为暂时性新生儿糖尿病(TNDM)。3例患儿现均无明显不良反应。结论K_(ATP)通道突变NDM患儿可从胰岛素过渡到格列本脲治疗,尽早完善基因检测,予磺脲类药物治疗可降低治疗成本,增加依从性,改善神经系统预后。 展开更多
关键词 新生儿糖尿病 K_(ATP)通道 磺脲类药物
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智力障碍儿童遗传学病因筛查与分析
7
作者 李翠 王晓岩 +4 位作者 刘小刚 赵明刚 李萍萍 李旭 薛梅 《中国妇幼健康研究》 2024年第3期58-63,共6页
目的分析智力发育障碍(ID)患儿遗传学病因,为ID疾病临床诊疗及家系遗传咨询提供依据。方法选取2020年1月至2021年1月在西安交通大学第一附属医院诊断为ID的5例患儿为研究对象。通过染色体核型分析对5例ID患儿进行初步分类,染色体分析结... 目的分析智力发育障碍(ID)患儿遗传学病因,为ID疾病临床诊疗及家系遗传咨询提供依据。方法选取2020年1月至2021年1月在西安交通大学第一附属医院诊断为ID的5例患儿为研究对象。通过染色体核型分析对5例ID患儿进行初步分类,染色体分析结果正常患儿进行全外显子组测序分析。Sanger测序及生物信息学分析软件等对全外显子组测序筛选出的可能致病性变异位点进行验证及功能分析。结果染色体核型分析发现P1患儿核型为46,XY,del(18)(q22q23),其余4例患儿染色体核型正常。全外显子组测序结果显示两例患儿ATP2C2基因均存在c.2096G>A(p.Ser699Asn)和c.2644_2655del(p.Ser882_Gly885del)复合杂合变异。家系验证结果显示P2患儿及P3患儿母亲为ATP2C2基因c.2096G>A(p.Ser699Asn)杂合变异携带者,父亲为ATP2C2基因c.2644_2655del(p.Ser882_Gly885del)杂合变异携带者。ATP2C2基因c.2096G>A(p.Ser699Asn)变异位点在神州基因组数据1000 Genome、ExAC和gnomAD等数据库未发现。生物信息学分析变异(c.2096G>A和c.2644_2655del)编码的氨基酸在不同物种中高度保守,且均可导致蛋白质结构发生改变。结论ATP2C2基因c.2096G>A(p.Ser699Asn)和c.2644_2655del(p.Ser882_Gly885del)为新发现的变异位点,可能是ID的致病原因。 展开更多
关键词 智力发育障碍 全外显子组测序 致病基因 ATP2C2基因
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猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶的免疫保护效果评价
8
作者 张小玲 李日顺 +3 位作者 樊擎莹 王海堃 王瑜欣 汪洋 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期53-59,共7页
猪链球菌(S.suis)是一种重要的人畜共患病原菌,给养猪业造成重大的经济损失。为了评估猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶蛋白的免疫保护效果,本研究构建了猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶原核表达载体进行蛋白的重组表达,纯化并制备该重组蛋白的... 猪链球菌(S.suis)是一种重要的人畜共患病原菌,给养猪业造成重大的经济损失。为了评估猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶蛋白的免疫保护效果,本研究构建了猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶原核表达载体进行蛋白的重组表达,纯化并制备该重组蛋白的亚单位疫苗,加强免疫接种后两周,检测其血清抗体效价、免疫保护率、各脏器载菌量以及炎性因子表达情况。结果显示,该蛋白经大肠杆菌表达后主要以可溶形式存在。ELISA检测表明该蛋白可以诱发小鼠产生高水平IgG抗体,免疫组小鼠抗体水平显著高于对照组,该重组蛋白对小鼠感染2型猪链球菌(S.suis serotype 2,S.suis 2)的保护率达到60%,显著降低了小鼠大脑、心脏及肺脏的载菌量,免疫组小鼠细胞因子IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达显著上调。研究表明猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶蛋白具有较强的免疫原性,是猪链球菌病潜在的亚单位疫苗候选蛋白。 展开更多
关键词 猪链球菌 亚单位疫苗 磷酸ABC转运体ATP酶 免疫保护
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铜稳态失调在肌萎缩侧索硬化发病机制中的研究进展
9
作者 张莹 色瑶(综述) 姜宏佺(审校) 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2024年第4期381-384,共4页
铜对维持细胞的正常代谢功能至关重要,参与细胞中多种生理过程,包括细胞呼吸、神经肽加工和铁运输等,维持铜稳态具有重要意义。在中枢神经系统中,铜稳态参与突触功能调节及髓鞘形成过程等,铜稳态失调与多种神经退行性疾病的发生密切相关... 铜对维持细胞的正常代谢功能至关重要,参与细胞中多种生理过程,包括细胞呼吸、神经肽加工和铁运输等,维持铜稳态具有重要意义。在中枢神经系统中,铜稳态参与突触功能调节及髓鞘形成过程等,铜稳态失调与多种神经退行性疾病的发生密切相关,近年研究表明,铜转运ATP酶α(ATP7A)突变后导致的铜稳态失调,可能导致了肌萎缩侧索硬化(ALS)的发生发展。本文通过综述铜稳态失调在ALS发病机制的研究进展,提出了维持铜稳态可能为ALS治疗提供新靶点的展望。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 铜稳态 铜转运ATP酶α
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水稻对恶苗病菌侵染响应的转录组分析
10
作者 李鹏 《种子》 北大核心 2024年第6期1-11,20,共12页
水稻是主要的粮食作物,而恶苗病的发生对水稻生产构成了巨大威胁,造成一些品种严重减产。转录组测序技术已逐渐应用到水稻恶苗病的品种抗性研究中,使用高抗和高感水稻品种,经接种、取样和测序分析,明确水稻恶苗病在转录水平上的抗性机... 水稻是主要的粮食作物,而恶苗病的发生对水稻生产构成了巨大威胁,造成一些品种严重减产。转录组测序技术已逐渐应用到水稻恶苗病的品种抗性研究中,使用高抗和高感水稻品种,经接种、取样和测序分析,明确水稻恶苗病在转录水平上的抗性机制。利用Illumina NovaSeQ6000平台构建了12个真核普通转录组文库并测序,以|log 2(FoldChange)|≥1及p≤0.05为标准,筛选出抗病品种比较组合(KDI vSKDCK)1482个差异基因,感病品种比较组合(LJI vSLJCK)2293个差异基因。通过共表达韦恩图展示,抗病比较组合(KDI vSKDCK)差异基因和感病比较组合(LJI vSLJCK)差异基因共表达328个,其中抗病比较组合(KDI vSKDCK)差异基因中唯一表达1154个,感病比较组合(LJI vSLJCK)差异基因中唯一表达1965个。进一步通过共表达韦恩图展示,抗病比较组合(KDI vSKDCK)上调表达差异基因和感病比较组合(LJI vSLJCK)上调表达差异基因共表达31个,抗病比较组合(KDI vSKDCK)上调表达差异基因中唯一表达272个,感病比较组合(LJI vSLJCK)上调表达差异基因中唯一表达825个。将抗病比较组合(KDI vSKDCK)上调表达差异基因中唯一表达的272个基因进行GO功能富集分析后,得到264个GO Term,其中,显著富集GO Term有1个生物过程(BP)和6个分子功能(MF),均与病原菌感染响应的氧化应激反应(GO:0006979)、过氧化物酶活性(GO:0004601)、氧化还原酶活性和作用于作为受体的过氧化物(GO:0016684)、抗氧化活性(GO:0016209)有关,显示抗病品种水稻芽在恶苗病菌侵染时参与氧化应激反应生物过程基因显著上调表达,ATP酶活性显著增加,促进物质跨膜转运,有效提高了抗病性。 展开更多
关键词 恶苗病 转录组 氧化应激反应 ATP酶活性 跨膜转运
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《生化分析》专辑序言——助力疾病的临床诊断
11
作者 张书圣 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-2,共2页
疾病的发生、发展与患者体内不正常生理活动产生的生化分子异常表达密切相关,例如,正常人体内三磷酸腺苷(ATP)浓度通常小于0.4 mmol/L,而恶性肿瘤细胞的ATP浓度可达1.5~15 mmol/L;又如血浆中组氨酸水平异常可能与癫痫、精神分裂症和肝... 疾病的发生、发展与患者体内不正常生理活动产生的生化分子异常表达密切相关,例如,正常人体内三磷酸腺苷(ATP)浓度通常小于0.4 mmol/L,而恶性肿瘤细胞的ATP浓度可达1.5~15 mmol/L;又如血浆中组氨酸水平异常可能与癫痫、精神分裂症和肝硬化等多种疾病相关。多种疾病相关的生化分子已成为临床诊断的理想生物标志物,为疾病的早期诊断和及时治疗提供有力工具。然而,某些生化分子相对较低的丰度以及高度的相似性为其准确定量带来了巨大挑战,因此,发展出更快速、更灵敏和特异性高的生化分析方法,将疾病相关分子以光、电等多种信号形式呈现出来具有重要意义。 展开更多
关键词 生化分析 临床诊断 正常生理活动 生物标志物 ATP浓度 精神分裂症 准确定量 早期诊断
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lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制
12
作者 董亮亮 徐露露 +1 位作者 刘冰 李敏敏 《山东医药》 CAS 2024年第25期21-25,共5页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 长链非编码RNA细胞骨架调节因子RNA 微小RNA-139-5p 性别决定区Y框蛋白8 ATP结合盒转运蛋白G2
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血清lncRNA ATP1A1-AS1对胰腺癌的诊断价值及其对细胞增殖、凋亡和端粒酶活性的影响
13
作者 崔巍 周威 +1 位作者 刘智化 刘成栋 《空军军医大学学报》 CAS 2024年第5期567-571,共5页
目的探讨血清长链非编码RNA Na+/K+ATP酶A1亚基的反义RNA1(ATP1A1-AS1)对胰腺癌的诊断价值及其对胰腺癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性的影响。方法选取2020年4月至2023年10月在安徽省宣城市人民医院就诊的65例胰腺癌患者为研究对象,并选... 目的探讨血清长链非编码RNA Na+/K+ATP酶A1亚基的反义RNA1(ATP1A1-AS1)对胰腺癌的诊断价值及其对胰腺癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性的影响。方法选取2020年4月至2023年10月在安徽省宣城市人民医院就诊的65例胰腺癌患者为研究对象,并选取同时期60例健康体检者作为对照,qRT-PCR检测两组患者血清中ATP1A1-AS1表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ATP1A1-AS1对胰腺癌的诊断价值。体外培养胰腺癌细胞PANC-1,通过转染ATP1A1-AS1过表达载体上调PANC-1细胞中ATP1A1-AS1表达,MTT检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞增殖的影响,流式细胞术检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blotting检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞增殖抗原Ki-67、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤2相关蛋白(Bax)蛋白表达的影响,端粒酶重复序列扩增法检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞端粒酶活性的影响。结果与对照组比较,胰腺癌患者血清中ATP1A1-AS1的表达水平显著降低(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清ATP1A1-AS1诊断胰腺癌的灵敏度为83.08%,特异度为86.67%,ROC曲线下面积为0.900。ATP1A1-AS1表达上调,PANC-1细胞增殖能力、端粒酶活性及细胞CyclinD1、Ki-67、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论ATP1A1-AS1在胰腺癌患者血清中呈低表达,可能是胰腺癌诊断的潜在生物学标志物。上调ATP1A1-AS1表达可抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这可能与调控CyclinD1、Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达及抑制细胞端粒酶活性有关。 展开更多
关键词 胰腺癌 ATP1A1-AS1 细胞增殖 细胞凋亡 端粒酶活性
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ATP5J通过TOMM20调节线粒体功能并促进人肝细胞癌细胞转移 被引量：1
14
作者 冷君志 王根旺 +3 位作者 刘迪 柳科军 王琦 惠永峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期431-437,共7页
目的:探讨ATP合成酶H+转运线粒体F0复合体亚基F6(ATP5J)通过调节肝癌细胞线粒体功能介导细胞骨架重塑影响肝癌细胞转移的作用及其机制。方法:培养人肝细胞癌Li-7细胞株,基因修饰ATP5J表达(过表达和敲减)。使用JC-1染色检测每组细胞线粒... 目的:探讨ATP合成酶H+转运线粒体F0复合体亚基F6(ATP5J)通过调节肝癌细胞线粒体功能介导细胞骨架重塑影响肝癌细胞转移的作用及其机制。方法:培养人肝细胞癌Li-7细胞株,基因修饰ATP5J表达(过表达和敲减)。使用JC-1染色检测每组细胞线粒体膜电位情况;利用DCFH-DA荧光探针检测Li-7细胞的活性氧(ROS)含量;线粒体ATP荧光探针检测线粒体功能;微丝绿色荧光探针(Actin-Tracker Green-488)检测细胞骨架重塑情况;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测ATP5J和线粒体外膜转位酶20(TOMM20)的表达水平。结果:过表达ATP5J可上调线粒体膜电位水平和线粒体ATP荧光强度、诱导细胞骨架重塑、促进细胞侵袭和TOMM20蛋白表达,抑制ROS生成(P<0.01)。相反,敲减ATP5J显著降低线粒体膜电位和线粒体ATP荧光强度,显著降低细胞侵袭能力和TOMM20表达,促进ROS产生,阻断细胞骨架重塑(P<0.01)。结论:ATP5J可调节肝癌细胞线粒体能量转化,其通过TOMM20调节线粒体膜电位水平和线粒体ATP产生介导细胞骨架重塑影响肝癌细胞转移。 展开更多
关键词 肝细胞癌 线粒体功能 ATP5J蛋白 细胞骨架
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质膜ATP酶作为新型杀真菌剂靶标的发现与应用 被引量：1
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作者 武洛宇 侯毅平 周明国 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期278-289,共12页
质膜H+-三磷酸腺苷酶(plasma membrane H+-ATPase,PMA),简称质膜ATP酶,属于质子泵家族蛋白,广泛存在于植物和真菌的质膜上;它们的主要作用是维持细胞营养摄取所需的跨膜电化学质子梯度和调控pH值。质膜ATP酶是真菌生命活动所必须的,该... 质膜H+-三磷酸腺苷酶(plasma membrane H+-ATPase,PMA),简称质膜ATP酶,属于质子泵家族蛋白,广泛存在于植物和真菌的质膜上;它们的主要作用是维持细胞营养摄取所需的跨膜电化学质子梯度和调控pH值。质膜ATP酶是真菌生命活动所必须的,该酶缺失后,突变体的生长出现明显缺陷甚至无法生长,这使其具有作为杀真菌剂靶标的潜力;另外,由于真菌和植物的质膜ATP酶同源性较低,故以质膜ATP酶为靶标开发的杀真菌剂具有生物安全性。最近明确的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和粗糙脉孢霉Neurospora crassa质膜ATP酶的冷冻电镜结构揭示了其六聚体的状态,阐明了质膜ATP酶的作用机制,为基于结构的药物设计提供了理论基础。本文主要对真菌中质膜ATP酶的结构和功能进行系统阐述,并对质膜ATP酶作为新型杀真菌剂靶标的研究现状进行综述,旨在为新型杀真菌剂的发现和应用提供理论依据。 展开更多
关键词 质膜ATP酶 杀菌剂靶标 抑制剂
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钙离子转运ATP酶B2杂合突变导致小鼠渐进性前庭功能障碍 被引量：1
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作者 刘祎晴 金晨曦 +6 位作者 冯宝怡 成桢哲 孙怡琳 郑晓飞 董庭婷 吴皓 陶永 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期723-732,共10页
目的·研究不同月龄钙离子转运ATP酶B2(ATPase plasma membrane Ca^(2+)transporting 2,ATP2B2)Oblivion杂合突变小鼠前庭毛细胞结构和前庭功能的变化。方法·选取2月龄及8月龄Atp2b2 Oblivion杂合突变雄性小鼠各10只,以同龄C57... 目的·研究不同月龄钙离子转运ATP酶B2(ATPase plasma membrane Ca^(2+)transporting 2,ATP2B2)Oblivion杂合突变小鼠前庭毛细胞结构和前庭功能的变化。方法·选取2月龄及8月龄Atp2b2 Oblivion杂合突变雄性小鼠各10只,以同龄C57BL/6J野生型雄性小鼠作为对照。通过免疫荧光实验观察不同月龄2组小鼠前庭毛细胞ATP2B2表达情况,并对微纹区及纹外区毛细胞数量进行统计;通过扫描电子显微镜(电镜)观察小鼠前庭毛细胞纤毛形态;通过透射电镜观察小鼠前庭毛细胞带状突触和线粒体;采用前庭诱发电位(vestibular evoked potential,VsEP)、前庭肌源性诱发电位(vestibular evoked myogenic potential,VEMP),及转棒、平衡木实验检测小鼠的前庭功能。结果·2组小鼠ATP2B2均主要表达于前庭毛细胞纤毛,2月龄及8月龄Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠微纹区及纹外区毛细胞数量与野生型小鼠均无明显差异。扫描电镜下,2月龄及8月龄杂合突变小鼠椭圆囊毛细胞纤毛无明显结构异常。透射电镜下,2月龄杂合突变小鼠前庭毛细胞表皮板与神经连接部位附近的线粒体结构无异常,突触结构无异常;8月龄杂合突变小鼠前庭毛细胞表皮板附近线粒体出现空泡样变性,神经连接部位附近的线粒体及突触结构无异常。2月龄及8月龄杂合突变小鼠VsEP及VEMP阈值均较野生型小鼠显著上升,VsEP波形分析显示杂合突变小鼠P1潜伏期延长,P1N1波幅降低(均P<0.05)。2月龄杂合突变小鼠转棒、平衡木实验结果未见明显改变,但8月龄杂合突变小鼠完成转棒、平衡木能力较野生型小鼠显著下降(均P<0.05)。结论·Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠2月龄时前庭电生理功能下降,8月龄时出现前庭相关行为学异常,Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠呈渐进性前庭功能障碍。 展开更多
关键词 钙离子转运ATP酶B2 前庭功能障碍 前庭毛细胞 纤毛
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lncRNA CTD-2182N23.1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量：1
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作者 黎思毅 肖雄升 +3 位作者 陈卓婷 杨雪 郑昌蔚 张智 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第1期1-7,共7页
目的:分析长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)CTD-2182N23.1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平与患者临床病理特征的关系,探究CTD-2182N23.1通过靶向miR-200c-3p对甲状腺乳头状癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用TCGA数据库分... 目的:分析长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)CTD-2182N23.1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平与患者临床病理特征的关系,探究CTD-2182N23.1通过靶向miR-200c-3p对甲状腺乳头状癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用TCGA数据库分析CTD-2182N23.1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其与患者临床分期、预后的关系。收集2019年05月至2022年03月本院手术切除的50例甲状腺乳头状癌患者癌组织和癌旁组织,采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测甲状腺乳头状癌组织中CTD-2182N23.1的表达,分析其与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系。qPCR检测人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1和人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1、MDA-T32、TT、SW579、B-CPAP中CTD-2182N23.1的表达。体外培养MDA-T32细胞,实验分为NC组和CTD-2182N23.1组。细胞克隆形成实验和Transwell实验分别检测转染后MDA-T32细胞增殖能力和侵袭能力。双荧光素酶基因报告实验验证CTD-2182N23.1与miR-200c-3p之间的靶向关系。qPCR检测转染后MDA-T32细胞中miR-200c-3p和ATP2A2 mRNA的表达。采用TCGA数据库分析CTD-2182N23.1与ATP2A2 mRNA表达的相关性。Western blot法分别检测ATP2A2、CDK1、Cyclin B、Twist、Slug蛋白水平。结果:TCGA数据库显示甲状腺乳头状癌组织中CTD-2182N23.1呈低表达(P<0.01),其与患者临床分期、无病生存期均呈正相关(均P<0.05)。qPCR显示甲状腺乳头状癌组织和细胞系中CTD-2182N23.1均呈低表达(均P<0.05)。CTD-2182N23.1表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移有关联(均P<0.01)。上调CTD-2182N23.1后MDA-T32细胞克隆形成数目和细胞侵袭数目均明显减少(均P<0.01)。CTD-2182N23.1能够靶向且负调控miR-200c-3p的表达(P<0.01)。上调CTD-2182N23.1后MDA-T32细胞中ATP2A2基因表达显著升高(P<0.01)。CTD-2182N23.1与ATP2A2 mRNA表达呈正相关。上调CTD-2182N23.1后MDA-T32细胞中CDK1、Cyclin B、Twist、Slug蛋白水平均显著降低(均P<0.01)。结论:CTD-2182N23.1在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中呈低表达,上调CTD-2182N23.1通过调控miR-200c-3p/ATP2A2表达显著抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭,CTD-2182N23.1可能是甲状腺乳头状癌治疗的潜在分子靶标。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 甲状腺乳头状癌 miR-200c-3p ATP2A2 增殖 侵袭
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ATP含量与外源酶添加对罗非鱼肌原纤维蛋白磷酸化水平的影响
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作者 喻叶 魏涯 +8 位作者 陈胜军 黄卉 岑剑伟 潘创 李春生 王迪 王悦齐 冯阳 赵永强 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期35-45,共11页
蛋白质磷酸化修饰可影响肌肉品质,为探究外源酶添加对罗非鱼肌原纤维蛋白蛋白质磷酸化水平的影响,在向罗非鱼肌原纤维蛋白溶液中分别加入蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)后进行体外孵育,通过十... 蛋白质磷酸化修饰可影响肌肉品质,为探究外源酶添加对罗非鱼肌原纤维蛋白蛋白质磷酸化水平的影响,在向罗非鱼肌原纤维蛋白溶液中分别加入蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)后进行体外孵育,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光染色测定不同时间段内的磷酸化水平变化。并通过将罗非鱼肌肉浸泡在不同浓度ATP溶液中测定肌原纤维蛋白的蛋白磷酸化水平以探究ATP对其的影响。结果显示,在0~72 h,PKA组磷酸化水平均显著高于对照组和AP组,PKA组整体磷酸化水平从0 h的0.35±0.01上升至12 h的0.37±0.01,而后下降至72 h的0.29±0.01,呈先上升后下降的趋势,其中,肌球蛋白重链磷酸化水平和肌动蛋白磷酸化水平分别从0 h的0.73±0.01、0.86±0.01下降至72 h的0.58±0.02和0.68±0.01。当孵育时间为0、4、24和48 h时,3组磷酸化水平均具有显著差异。在外源添加0.3 mol/L ATP后,结果显示肌原纤维蛋白整体磷酸化水平(0.46±0.00)显著高于对照组(0.42±0.01)。PKA可促进罗非鱼肌原纤维蛋白磷酸化修饰,AP则使其去磷酸化。研究表明,宰杀后罗非鱼肌肉中的ATP含量、PKA及AP活性水平是影响蛋白质磷酸化水平的关键因素。本研究可为探明罗非鱼品质变化机制与调控策略提供理论依据。 展开更多
关键词 罗非鱼 肌原纤维蛋白 蛋白质磷酸化 蛋白激酶A 碱性磷酸酶 ATP
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病原菌侵染下细胞外ATP对光系统Ⅱ光化学反应的调节作用
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作者 曹璐璐 金昱杉 +6 位作者 张悦婧 王涵琦 邓雅欣 孙坤 张继 贾凌云 冯汉青 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期593-598,共6页
以野生型Col-0和细胞外ATP(e ATP)受体突变型dorn1-3拟南芥为实验材料,探究e ATP在两种丁香假单胞菌(毒性Pst DC3000和非毒性Pstavr B)侵染下的水平变化以及对其光化学反应的调节作用.结果表明,Pst DC3000和Pstavr B侵染均导致拟南芥叶... 以野生型Col-0和细胞外ATP(e ATP)受体突变型dorn1-3拟南芥为实验材料,探究e ATP在两种丁香假单胞菌(毒性Pst DC3000和非毒性Pstavr B)侵染下的水平变化以及对其光化学反应的调节作用.结果表明,Pst DC3000和Pstavr B侵染均导致拟南芥叶片中e ATP水平、光适应下叶片的最大光化学量子产率(F_(v)′/F_(m)′)、光适应下PSⅡ实际光化学效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递速率(ETR)降低而非调节性能量耗散的量子产额Y(NO)升高.Pst DC3000侵染下,dorn1-3拟南芥植株F_(v)′/F_(m)′、Y(Ⅱ)、ETR略低于野生型,Y(NO)略高于野生型,但均未达显著性差异;在Pstavr B侵染下,dorn1-3拟南芥植株F_(v)′/F_(m)′、Y(Ⅱ)、ETR显著低于野生型植株,Y(NO)显著高于野生型.在病原菌侵染下,e ATP受体的突变会增强病原菌对PSⅡ的抑制作用,且在非毒性病原菌侵染下该效应更为明显.在非毒性病原菌侵染对植物光化学反应影响的过程中e ATP具有重要的调控作用. 展开更多
关键词 拟南芥 丁香假单胞菌 胞外ATP 叶绿素荧光参数
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ATP1B3在神经胶质瘤中表达及其对细胞增殖和迁移的影响
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作者 严其康 扈清云 +2 位作者 孙权 王彩霞 朱金玲 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第6期435-441,共7页
目的:探讨ATP1B3在神经胶质瘤细胞(U87MG)中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响。方法:利用在线数据库CGGA及TCGA分析ATP1B3在不同级别神经胶质瘤细胞中差异表达,及其与患者生存、预后的关系;利用siRNA干扰技术瞬时敲减神经胶质瘤细胞系U... 目的:探讨ATP1B3在神经胶质瘤细胞(U87MG)中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响。方法:利用在线数据库CGGA及TCGA分析ATP1B3在不同级别神经胶质瘤细胞中差异表达,及其与患者生存、预后的关系;利用siRNA干扰技术瞬时敲减神经胶质瘤细胞系U87MG中ATP1B3的表达水平,通过RT-qPCR和western blot方法检测敲减效率;用CCK-8、transwell实验检测敲减ATP1B3后神经胶质瘤细胞增殖及迁移能力变化;western blot实验检测敲减ATP1B3后P-MTOR、MTOR蛋白的表达变化。结果:数据库分析表明ATP1B3的表达量与恶神经胶质瘤恶性程度成正相关,且与患者的预后生存成负相关。敲减ATP1B3后其mRNA和蛋白表达水平后明显降低,敲减组细胞增殖及迁移能力显著低于对照组(P<0.01);敲减ATP1B3影响P-MTOR的表达水平,P-MTOR/MTOR比值降低。结论:ATP1B3高表达与胶质瘤恶性程度相关且不利于患者的生存预后。在神经胶质瘤细胞内ATP1B3可调控MTOR细胞增殖生长信号通路,敲减ATP1B3基因能有效抑制神经胶质瘤细胞的增殖和迁移,因此ATP1B3基因可能是一个潜在神经肿瘤标志物和治疗的分子靶点。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 ATP1B3 细胞增殖 细胞迁移
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