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Ad36感染对维吾尔族肥胖患者progranulin表达的调节作用 被引量：1
1
作者 常曦 焦谊 +2 位作者 陆剑飞 努尔比耶.努尔麦麦提 关亚群 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期219-224,共6页
目的探讨腺病毒36型(Ad36)感染对维吾尔族肥胖患者颗粒蛋白前体(progranulin)表达的调节作用。方法根据肥胖诊断标准将维吾尔族人群样本分为肥胖组(115)与非肥胖组(117),收集血清标本232份,脂肪标本102份。血清中和反应法检测样本血清中... 目的探讨腺病毒36型(Ad36)感染对维吾尔族肥胖患者颗粒蛋白前体(progranulin)表达的调节作用。方法根据肥胖诊断标准将维吾尔族人群样本分为肥胖组(115)与非肥胖组(117),收集血清标本232份,脂肪标本102份。血清中和反应法检测样本血清中的Ad36抗体。采用实时荧光定量PCR(real time quantitative-PCR)方法检测研究对象大网膜和皮下的脂肪组织progranulin的mRNA表达水平,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清progranulin的蛋白表达水平。免疫组化方法检测脂肪组织巨噬细胞CD68蛋白表达,了解巨噬细胞浸润情况。结果 1肥胖患者Ad36感染率(54/115,47.0%)明显高于非肥胖者(38/117,32.5%),差异有统计学意义(P<0.05)。2Ad36感染的肥胖组血清progranulin的蛋白表达水平(408.45±156.92)显著高于非肥胖组(326.11±158.60),差异有统计学意义(P<0.05);两组的腹部大网膜、皮下脂肪组织progranulin mRNA表达水平差异无统计学意义(P均>0.05)。3Ad36感染的肥胖组巨噬细胞浸润(14 730.16±2 227.39)明显高于非肥胖组(10 786.50±2 772.80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ad36感染可能与维吾尔族肥胖发生有关,其机制可能为通过调节血清progranulin的蛋白表达水平而实现。 展开更多
关键词 腺病毒36型 肥胖 颗粒蛋白前体(progranulin) 实时荧光定量一聚合酶链反应(real time quantitative—PCR) 巨噬细胞 维吾尔族
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LncRNAROR对Ad36诱导人脂肪源性干细胞棕色化的作用 被引量：3
2
作者 刘玲 焦谊 +8 位作者 梁小弟 陆剑飞 张丹 张树文 努尔比耶·努尔买买提 孟轩羽 刘杰 胡婷婷 关亚群 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期318-324,共7页
目的探讨LncRNA ROR在腺病毒36型（Ad36）诱导的人脂肪源性干细胞棕色化过程中的作用。方法对鸡尾酒法诱导组和Ad36诱导组第2、4、6、8天细胞进行油红O染色，观察人脂肪源性干细胞（hADSC）成脂情况，采用实时定量PCR方法检测2组LncRNA ... 目的探讨LncRNA ROR在腺病毒36型（Ad36）诱导的人脂肪源性干细胞棕色化过程中的作用。方法对鸡尾酒法诱导组和Ad36诱导组第2、4、6、8天细胞进行油红O染色，观察人脂肪源性干细胞（hADSC）成脂情况，采用实时定量PCR方法检测2组LncRNA ROR、解耦联蛋白1（UCP1）及PRDM16的mRNA表达水平，Western印迹法检测UCP1及PRDM16的蛋白表达水平。siRNA干扰LncRNA ROR后，实时定量PCR和Western印迹法分别检测Ad36诱导脂肪细胞分化过程中干扰组与对照组UCP1及PRDM16的mRNA和蛋白表达水平。结果油红O染色结果显示，鸡尾酒诱导组的脂肪细胞中脂滴较大，而Ad36诱导组则为颗粒状较小脂滴。与鸡尾酒法诱导组相比，Ad36诱导组LncRNA ROR、UCP1及PRDMl6的mRNA表达水平及UCP1和PRDM16蛋白表达水平显著升高（P〈0．05）。与对照组相比，LncRNA ROR干扰组UCP1及PRDMl6的mRNA及蛋白表达水平显著降低（P〈0．05）。结论Ad36诱导hADSC分化过程中．上调的LncRNA ROR可能通过正向调控UCP1及PRDM16表达，从而促进hADSC的棕色化。 展开更多
关键词 人脂肪源性干细胞 棕色化 鸡尾酒法 腺病毒36型 长链非编码RNA
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36型人腺病毒腺病毒基因早期转录区4可读框基因1(E4ORF1)的原核表达及多克隆抗体制备
3
作者 徐尤宗胜 梁小弟 +5 位作者 陈哲 焦谊 高佳乐 王冰丽 刘迪晖 关亚群 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期839-843,共5页
目的利用分子克隆技术构建36型腺病毒(Ad36)腺病毒基因早期转录区4可读框基因1(E4ORF1)重组原核表达质粒pET30a-E4ORF1,经诱导表达后,制备并纯化获得E4ORF1抗原,经免疫兔后获得多克隆抗体。方法根据NCBI数据库中人Ad36基因组全序列,设... 目的利用分子克隆技术构建36型腺病毒(Ad36)腺病毒基因早期转录区4可读框基因1(E4ORF1)重组原核表达质粒pET30a-E4ORF1,经诱导表达后,制备并纯化获得E4ORF1抗原,经免疫兔后获得多克隆抗体。方法根据NCBI数据库中人Ad36基因组全序列,设计引物、PCR扩增其中的E4ORF1基因全长并将其克隆至原核表达载体中、测序。将测序正确的原核表达质粒pET30a-E4ORF1转化至E.coliBL21(DE3)菌株中,通过探索E4ORF1蛋白的最佳诱导条件后,对重组蛋白进行大量诱导表达和纯化。将纯化获得的重组蛋白免疫新西兰白兔,在5次免疫后分离血清,ELISA检测抗体效价。抗原亲和纯化出E4ORF1多克隆抗体,Western blot法检测抗体的特异性。结果成功扩增E4ORF1基因,经测序比对与GenBank序列一致,大小为408 bp,证明成功构建原核重组表达质粒。经鉴定重组蛋白的相对分子质量(M_(r))约14000,ELISA检测5次免疫后兔血清抗体效价达1∶320000。Western blot法证明该抗体具较高的特异性。结论成功表达E4ORF1蛋白,并制备了高特异性的兔抗E4ORF1多克隆抗体。 展开更多
关键词 36型人腺病毒(ad36) E4可读框基因1(E4ORF1) 原核表达 抗体
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