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转染E1B55K基因提高Hep2细胞包装肠腺病毒Ad41的能力
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作者 韩炳娟 郭丽 +4 位作者 屈建国 王敏 王健伟 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期258-264,共7页
人F组腺病毒Ad40、Ad41难以在体外培养的细胞中传代,被称为难养腺病毒(Fastidious adenovirus)。本研究观察了在Hep2细胞表达Ad41 E1B55K基因对Ad41复制的促进作用。从Ad41阳性粪便标本中用PCR的方法获得E1B55K基因,构建真核表达载体,转... 人F组腺病毒Ad40、Ad41难以在体外培养的细胞中传代,被称为难养腺病毒(Fastidious adenovirus)。本研究观察了在Hep2细胞表达Ad41 E1B55K基因对Ad41复制的促进作用。从Ad41阳性粪便标本中用PCR的方法获得E1B55K基因,构建真核表达载体,转染Hep2细胞,筛选单克隆,用RT-PCR检测了E1B55K基因的表达。用引起293细胞完全CPE比较产毒量的方法对所得细胞克隆进行初步筛选,获得一株产毒相对较强的细胞Hep2-E1B#4。与对照细胞Hep2、Hep2-DNA3相比,等量Ad41接种Hep2-E1B#4产生的细胞病变效应(CPE)程度明显加深。用免疫细胞化学的方法测定产毒的感染滴度,等量Ad41接种后,Hep2-E1B#4产生的子代腺病毒滴度大于对照的9倍;半定量PCR测得Hep2-E1B#4子代病毒基因组拷贝数约为对照细胞的4倍。结果说明转染E1B55K基因促进了Ad41在Hep2细胞的复制,获得的Hep2-E1B#4细胞株可用于Ad41的分离、培养和体外扩增。 展开更多
关键词 ad41 E1B55Kgene HEP2 病毒复制
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原核表达人41型腺病毒(Ad41)蛋白V及其抗血清的制备
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作者 董流昕 邹小辉 +3 位作者 宋敬东 屈建国 鲁茁壮 洪涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期672-676,共5页
【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模... 【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体pET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析(IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达。【结果】克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1mmol/LIPTG37℃诱导4h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5mmol/LIPTG25℃诱导8h获得可溶性表达。利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于Western blot检测。等量野生型Ad41感染293或293E12细胞(一株稳定表达Ad41E1B55K基因的293细胞)后,pV在293E12细胞的表达明显高于293细胞。【结论】成功克隆了Ad41pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础。 展开更多
关键词 ad41 PROTEIN V 难养性 抗血清
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人腺病毒41型(Ad41)难养研究进展
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作者 董流昕 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期156-158,共3页
人肠腺病毒41(Human Adenovirus Type 41,Ad41)属于人腺病毒F组,是引起胃肠炎的病原之一,因而被称为肠腺病毒。由于在体外难于培养,又被称为难养性腺病毒。6%~8%的4岁以下婴幼儿腹泻由该病毒引起。Flewett等首次在电镜下观察得... 人肠腺病毒41(Human Adenovirus Type 41,Ad41)属于人腺病毒F组,是引起胃肠炎的病原之一,因而被称为肠腺病毒。由于在体外难于培养,又被称为难养性腺病毒。6%~8%的4岁以下婴幼儿腹泻由该病毒引起。Flewett等首次在电镜下观察得到Ad41,De Jung首次成功分离Ad41的病毒株,并将其命名为Tak株。 展开更多
关键词 人腺病毒 肠腺病毒 ad41 婴幼儿腹泻 镜下观察 胃肠炎 病毒株 Tak
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