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用7-AAD检测细胞DNA含量的流式细胞技术
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作者 户乃丽 邹林樾 徐晓雪 《继续医学教育》 2011年第2期90-92,共3页
目的:探索利用荧光染料7-AAD检测细胞DNA含量的流式细胞技术。方法:利用7-AAD和PI两种荧光染料标记小鼠胸腺T淋巴细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较2种方法测定结果。结果:通过流式细胞仪对细胞周期进行分... 目的:探索利用荧光染料7-AAD检测细胞DNA含量的流式细胞技术。方法:利用7-AAD和PI两种荧光染料标记小鼠胸腺T淋巴细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较2种方法测定结果。结果:通过流式细胞仪对细胞周期进行分析显示:用7-AAD和PI两种荧光染料标记的小鼠胸腺T淋巴细胞呈现完整的细胞周期,G0/G1期细胞含量为73.2%±1.93%、73.9%±1.79%,S期细胞含量为23.6%±1.04%、22.6%±1.50%,G2/M期细胞含量为3.2%±0.28%、3.5%±0.21%,两种标记方法测定结果基本一致。结论:本文探讨的7-AAD染色检测DNA含量法与常用的PI标记法相比较结论一致,且操作上更为简单快捷,是一种值得推广的DNA周期分析染色方法。 展开更多
关键词 流式细胞术 DNA 细胞周期 7-aad
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流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较 被引量:5
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作者 郭继强 韩亚萍 +4 位作者 李芳 赵晴 贾原 靳保利 张俊萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1691-1697,共7页
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染... 目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。 展开更多
关键词 流式细胞技术 细胞毒作用 NK细胞 CFSE annexin-v/7-aad
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一种流式细胞仪同时检测多个凋亡参数的方法 被引量:5
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作者 刘莉 张军 +2 位作者 方超平 李闻捷 沈茜 《重庆医学》 CAS CSCD 2004年第10期1562-1564,共3页
目的 建立一种同时检测多个细胞凋亡参数的方法。方法 在一个检测中 ,加入罗丹明 12 3检测细胞凋亡时线粒体膜电位的变化 ,采用PE标记的ANNEXINV检测细胞膜的对称性 ,采用 7 AAD检测死亡细胞。结果 采用该方法成功检测了低温条件下... 目的 建立一种同时检测多个细胞凋亡参数的方法。方法 在一个检测中 ,加入罗丹明 12 3检测细胞凋亡时线粒体膜电位的变化 ,采用PE标记的ANNEXINV检测细胞膜的对称性 ,采用 7 AAD检测死亡细胞。结果 采用该方法成功检测了低温条件下的淋巴细胞凋亡。结论 罗丹明 12 3、PE ANNEXINV、7 AAD同时染色是一种检测多个凋亡参数的实用方法。 展开更多
关键词 凋亡 流式细胞术 罗丹明123 ANNEXIN V 7-aad
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荧光显微镜法检测小鼠胸腺细胞凋亡的染料选择 被引量:2
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作者 苗苗 郭茜茜 +1 位作者 吴丹丹 于广 《电子显微学报》 CAS CSCD 2015年第3期272-276,共5页
目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7... 目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7-AAD双染胸腺细胞在流式细胞仪下观察。结果:采用荧光显微镜检测,PI单染后在绿色模块下能够看到阳性信号,而7-AAD单染后在绿色模块下不会出现阳性信号;三种染料中,PI与7-AAD单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号逐渐增多,Annexin V-AF488单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号稍微减弱;7-AAD与Annexin V-AF488双染胸腺细胞在荧光显微镜下检测的结果和7-AAD与Annexin V-APC双染胸腺细胞流式细胞仪检测的结果无差异。结论:采用荧光显微镜法检测胸腺细胞凋亡,7-AAD与Annexin V-AF488结合最佳。 展开更多
关键词 PI 7-aad ANNEXIN V-AF488 胸腺细胞凋亡 荧光显微镜 流式细胞仪
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mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨 被引量:5
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作者 褚莉莉 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 唐权 张爱凤 王永仿 顾宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-510,共4页
目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿... 目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。 展开更多
关键词 白细胞介素-21 瘤苗 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE) 7-氨基放线菌素D(7-aad) 干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC) 抗肿瘤机制
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快速诱导细胞凋亡方法探讨 被引量:3
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作者 朱雪梅 李艳梅 卫林 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2021年第2期80-86,共7页
[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测... [目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测细胞凋亡的流式单阳染色管快速制备.[方法](1)分别用100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融的方法处理293T细胞15 min、30 min、1 h,Annexin V-PE/7-AAD双标记流式检测293T细胞凋亡率.(2)体积分数1%乙醇、5%乙醇、10%乙醇和20%乙醇处理293T细胞、RAW264.7细胞、HeLa细胞、T细胞和B细胞1 min,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果](1)293T细胞经100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融法处理后,几乎所有细胞均处于凋亡状态.(2)293T细胞、RAW264.7细胞、T细胞和B细胞用1%乙醇处理1 min,HeLa细胞用20%乙醇处理1 min,可出现较明显的凋亡现象.[结论]细胞凋亡实验时,根据细胞的生长特性,可选择体积分数1%~20%的乙醇诱导1 min,作为制备单阳染色管的最佳方案. 展开更多
关键词 细胞凋亡 流式细胞术 Annexin V-PE/7-aad
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流式细胞术Annexin V结合PI或7-AAD双染色法进行细胞凋亡分析的原理是什么? 被引量:4
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作者 崔巍 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期143-143,共1页
关键词 流式细胞术 ANNEXINV PI 7-aad双染色法 细胞凋亡 分析 原理
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