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人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定 被引量：5
1
作者 徐重新 张存政 +3 位作者 张霄 刘媛 黄鹰 刘贤金 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期47-52,共6页
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立... 利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明:经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg.mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg.mL-1,最低检测限(IC10)为0.025 7μg.mL-1,线性检测范围为0.5～5.0μg.mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1 mmol.L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12 h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coli HB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。 展开更多
关键词 Cry1b毒素蛋白 单链抗体 可溶性表达 抗原结合活性
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中美艰难梭菌A-B+株毒力编码区域转录及B毒素表达的研究 被引量：4
2
作者 李先平 李文革 +1 位作者 王晶 卢金星 《中国感染控制杂志》 CAS 2014年第2期65-70,共6页
目的研究中国艰难梭菌A-B+型分离株BJ08和美国艰难梭菌A-B+型暴发流行株US1的毒力编码区域PaLoc各基因转录及B毒素的表达,为预防和控制中国可能暴发的艰难梭菌感染提供理论支持。方法每隔3 h提取BJ08与US1艰难梭菌和培养上清,用荧光定... 目的研究中国艰难梭菌A-B+型分离株BJ08和美国艰难梭菌A-B+型暴发流行株US1的毒力编码区域PaLoc各基因转录及B毒素的表达,为预防和控制中国可能暴发的艰难梭菌感染提供理论支持。方法每隔3 h提取BJ08与US1艰难梭菌和培养上清,用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定各时间段两菌株毒力编码区域PaLoc各基因(tcdA、tcdB、tcdC、tcdR、tcdE)的表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BJ08和US1各时间段的细胞和培养液上清中B毒素的含量。结果 US1的生长速率稍快于BJ08,衰退速率显著快于BJ08(P<0.05);它们都不表达A毒素,但是都检测到tcdA基因的转录,而且tcdA转录没有明显差异。BJ08的tcdB、tcdC和tcdE基因的转录要比US1早3 h。B毒素在两种菌株的胞内和胞外合成或分泌没有明显差异。结论中国艰难梭菌A-B+型高分离株BJ08与美国艰难梭菌A-B+型暴发流行株US1相比,有相似的毒力表达或更强的基因调控能力,要警惕中国艰难梭菌BJ08暴发流行的可能。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒力编码区 PaLoc b毒素 抗生素相关腹泻 假膜性肠炎 医院感染
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G型产气荚膜梭菌NetB毒素研究进展 被引量：3
3
作者 宋忠锋 戚南山 +14 位作者 廖申权 尹理君 侯晓礁 李福元 吕敏娜 吴彩艳 李娟 林栩慧 蔡海明 胡俊菁 于林增 肖文婉 张健騑 孙铭飞 顾有方 《动物医学进展》 北大核心 2021年第10期80-84,共5页
G型产气荚膜梭菌可引起鸡坏死性肠炎和肠毒血症,致病力强,在自然界中广泛存在,严重危害养鸡业的发展。坏死性肠炎B样毒素(necrotic enteritis B-like toxin,NetB)是近年来发现的是一种新的β-成孔毒素(β-pore-forming toxin,β-PFT),是... G型产气荚膜梭菌可引起鸡坏死性肠炎和肠毒血症,致病力强,在自然界中广泛存在,严重危害养鸡业的发展。坏死性肠炎B样毒素(necrotic enteritis B-like toxin,NetB)是近年来发现的是一种新的β-成孔毒素(β-pore-forming toxin,β-PFT),是G型产气荚膜梭菌的主要致病性毒素和保护性抗原,深入研究该毒素的结构功能及致病机理对于鸡坏死性肠炎的防控具有重要意义,但至今尚无相关系统性综述报道。鉴于此,论文主要对国内外关于G型产气荚膜梭菌的流行概况、NetB毒素的分子结构特征、生物学特性、致病机理及其相关防治制剂等方面的研究进行综述,为进一步基于NetB毒素研制鸡坏死性肠炎的防治制剂提供参考。 展开更多
关键词 G型产气荚膜梭菌 坏死性肠炎b样毒素 生物学特性 致病机理 防治制剂
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有机硒对黄曲霉毒素B1致兔盲肠组织结构和抗氧化能力变化的干预作用
4
作者 位兰 崔敏 +4 位作者 李慧聪 张梦雨 朱雪敏 刘玉梅 张自强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第20期86-90,128,129,共7页
为了探明有机硒是否对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的家兔盲肠组织损伤具有保护作用,试验将50只35日龄健康的伊拉肉兔随机分为5组,分别为对照组、AFB1组和低剂量硒(0.2 mg/kg硒代蛋氨酸)治疗组、中剂量硒(0.4 mg/kg硒代蛋氨酸)治疗组、高剂量... 为了探明有机硒是否对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的家兔盲肠组织损伤具有保护作用,试验将50只35日龄健康的伊拉肉兔随机分为5组,分别为对照组、AFB1组和低剂量硒(0.2 mg/kg硒代蛋氨酸)治疗组、中剂量硒(0.4 mg/kg硒代蛋氨酸)治疗组、高剂量硒(0.6 mg/kg硒代蛋氨酸)治疗组,每组10个重复,每个重复1只。对照组和AFB1组饲喂正常配合饲料21 d,低、中、高剂量硒治疗组分别饲喂添加硒代蛋氨酸的配合饲料。从第17天开始,AFB1组及低、中、高剂量硒治疗组家兔每天按体重0.3 mg/kg灌喂AFB1(将AFB1溶解在橄榄油中),对照组灌喂等量橄榄油,连续5 d。试验第22天处死兔,解剖,取盲肠组织,采用苏木精-伊红(H.E.)染色、糖原(PAS)染色观察盲肠组织形态学变化,测量盲肠绒毛高度和隐窝深度,并对盲肠组织切片中杯状细胞进行计数;采用抗氧化试剂盒检测其总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。结果表明:与对照组相比,AFB1组盲肠绒毛上皮细胞肿胀、脱落,隐窝分布不均匀,肠绒毛的完整性受到破坏,杯状细胞数极显著减少(P<0.01),T-AOC和T-SOD活性极显著降低(P<0.01),MDA含量极显著升高(P<0.01)。与AFB1组相比,低、中剂量硒治疗组盲肠绒毛结构较完整,而高剂量硒治疗组变化不明显;高剂量硒治疗组杯状细胞数无显著变化(P>0.05),而低、中剂量硒治疗组杯状细胞数极显著增加(P<0.01);高剂量硒治疗组各抗氧化指标无显著变化(P>0.05),而低剂量硒治疗组T-AOC和T-SOD活性显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),MDA含量极显著降低(P<0.01)。说明在饲料中添加有机硒可以对AFB1导致的家兔盲肠组织损伤产生影响,其中添加0.2,0.4 mg/kg有机硒对家兔盲肠组织损伤均具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 硒 兔 黄曲霉毒素b1 盲肠 抗氧化能力 干预作用
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基于荧光生物传感技术检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B 被引量：2
5
作者 王美玲 胡婷 +3 位作者 李昌哲 周焕英 高志贤 罗鹏 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第1期57-64,共8页
目的利用纳米金粒子(gold nanoparticles,AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力,构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)的方法。方法以Au... 目的利用纳米金粒子(gold nanoparticles,AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力,构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)的方法。方法以AuNPs作为荧光体的能量受体(猝灭剂),荧光素-单链DNA(fluorescein-ssDNA,FAM-ssDNA)作为荧光能量供体,冷冻法制备AuNPs-SEB适配体复合物,基于AuNPsSEB适配体复合物/SEB/FAM-ssDNA的竞争性结合,构建纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测方法。对缓冲体系pH和反应时间等条件进行优化,以牛奶为代表对方法检测性能进行验证。结果在优化好的实验条件(pH 7.5、反应时间15 min和反应温度25℃)下,在10^(-1)~10^(4)ng/mL范围内,荧光强度与SEB质量浓度之间呈现良好的线性关系,其相关系数为0.995,检出限为0.062 ng/mL。应用于牛奶样品中SEB的测定,方法回收率为91.2%~108.0%,相对标准偏差在2.6%~5.2%范围之间。结论该纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测技术具有简便、灵敏和准确等优点,可为食品中污染物的检测提供一种可行的新方法。 展开更多
关键词 纳米金粒子 核酸适配体 荧光生物传感 金黄色葡萄球菌肠毒素b 牛奶
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黄曲霉毒素B1诱导大鼠肝细胞凋亡率剂量效应模型的构建 被引量：1
6
作者 黄奥迪 严佳惠 +3 位作者 张昭寰 刘海泉 赵勇 欧杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第3期61-67,共7页
通过黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导大鼠肝细胞凋亡的定量数据,从而构建AFB1诱导大鼠肝细胞凋亡率的剂量效应模型。通过拟合模型获取决定系数和进一步的数学检验表明,Gamma模型(R2=0.996 4,赤池信息量准则=37.40,贝叶斯信息准则=1... 通过黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导大鼠肝细胞凋亡的定量数据,从而构建AFB1诱导大鼠肝细胞凋亡率的剂量效应模型。通过拟合模型获取决定系数和进一步的数学检验表明,Gamma模型(R2=0.996 4,赤池信息量准则=37.40,贝叶斯信息准则=17.19)优于其他模型。建议选用Gamma模型作为大鼠急性暴露于AFB1后肝细胞凋亡率的最优剂量效应模型,用于AFB1风险评估框架中的危害特征描述。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 肝细胞凋亡 风险评估 剂量效应模型
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改性活性炭构建菌载体及其吸附玉米中黄曲霉毒素B1的工艺研究 被引量：1
7
作者 丁梓雪 常程程 +2 位作者 杨帆 王彦钦 孟宪刚 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期63-69,共7页
旨在为生物处理黄曲霉毒素污染的粮食饲料提供技术支持,以活性炭(SH)为原料进行改性制备磁性活性炭(CSH),选用能高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的芽孢杆菌属菌株WTX1与CSH载体共培养构建磁性菌载体(FCSH),脱除受污染玉米中的AFB1,对CSH进行... 旨在为生物处理黄曲霉毒素污染的粮食饲料提供技术支持,以活性炭(SH)为原料进行改性制备磁性活性炭(CSH),选用能高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的芽孢杆菌属菌株WTX1与CSH载体共培养构建磁性菌载体(FCSH),脱除受污染玉米中的AFB1,对CSH进行BET比表面积、氮吸附-脱附等温线及其对AFB1的等温吸附曲线分析,考察FCSH构建条件和FCSH吸附条件对AFB1脱除效果的影响,并利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和扫描电镜对吸附AFB1前后的FCSH进行表征。结果表明:CSH为大孔结构,其对AFB1的等温吸附符合Freundlich方程;在固定化时间16 h、固定化转速和吸附转速160 r/min、固定化温度和吸附温度35℃、吸附pH 8、振荡时间48 h条件下,FCSH对AFB1脱除率为97.45%;通过FTIR及扫描电镜证实了FCSH对AFB1的吸附作用,且FCSH对AFB1的吸附效果强于CSH。综上,所制备的FCSH能高效脱除玉米中的AFB1。 展开更多
关键词 磁性活性炭 芽孢杆菌 菌载体 黄曲霉毒素b1 生物脱除
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射频联合热风加热对玉米籽粒中黄曲霉毒素B1降解及玉米品质的影响 被引量：2
8
作者 张金方 李梅 陈伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期218-224,共7页
为研究射频-热风联合处理玉米中的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)降解效果,分析不同初始水分质量分数(19.05%、22.25%、25.55%)、射频加热温度(55、65、75、85℃)和加热持续时间(10、15、20、25 min)对玉米籽粒中AFB1降解效果及玉米... 为研究射频-热风联合处理玉米中的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)降解效果,分析不同初始水分质量分数(19.05%、22.25%、25.55%)、射频加热温度(55、65、75、85℃)和加热持续时间(10、15、20、25 min)对玉米籽粒中AFB1降解效果及玉米品质的影响。结果表明:射频-热风联合处理可有效降解AFB1,在高水分含量下,加热温度和时间一定,初始水分含量越高,AFB1残留量越高;初始水分含量一定,随温度增加和时间延长,AFB1残留量随之减少,且加热持续时间对降解效果的影响大于加热温度;射频-热风联合处理玉米籽粒过程中,对其品质有一定影响,随温度升高和时间延长,与对照组相比,蛋白质、脂肪含量无显著差异(P>0.05),黏度系数显著降低(P<0.05);低场核磁共振分析表明,射频加热过程中水分迁移效果明显,且水分迁移特性与玉米的糊化特性、蛋白质、脂肪含量显著相关(P<0.05)。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 射频-热风联合干燥 玉米品质 低场核磁共振 玉米籽粒
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基于纳米抗体-荧光素酶的黄曲霉毒素B1检测方法构建 被引量：1
9
作者 陈文星 王凤华 +3 位作者 谭晓亮 晏石娟 张军 吴绍文 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期349-360,共12页
黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析(BLEIA)方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体(NB)与纳米荧光素酶(Nluc)融合蛋白(G8-Nluc、Nluc-NB26和Nl... 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析(BLEIA)方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体(NB)与纳米荧光素酶(Nluc)融合蛋白(G8-Nluc、Nluc-NB26和Nluc-NB28)的可溶性表达、纯化情况及酶催化活性。基于3种融合蛋白分别建立BLEIA检测体系,选择Nluc-NB26用于谷物样品的分析和验证。结果表明,Nluc-NB26的可溶性表达量最高,稳定性更好,Nluc-NB28的可溶性表达量次之,而G8-Nluc基本不可溶。不同表面活性剂对G8-Nluc的促溶解性研究表明,添加N-月桂酰肌氨酸钠可显著提高其溶解度,纯化得到的3种融合蛋白均具有良好的酶活性及抗原结合活性。基于融合蛋白的BLEIA检测结果显示,Nluc-NB28-BLEIA、G8-Nluc-BLEIA和Nluc-NB26-BLEIA体系检测AFB1的IC_(50)值分别为4.213,1.697,2.169 ng/mL,表明G8-Nluc-BLEIA体系的灵敏度最高,Nluc-NB26-BLEIA与前者接近,Nluc-NB28-BLEIA最低。综合考虑融合蛋白的可溶性表达量、稳定性及检测性能,对Nluc-NB26-BLEIA开展实际样品的分析和验证,结果表明:这一方法检测谷物中AFB1的平均回收率在91.1%~104.1%之间,与商业化酶联免疫吸附测定试剂盒结果相似,而检测的时间和试剂成本明显降低。研究结果为开发快速、高灵敏的AFB1检测技术提供参考。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 纳米抗体 纳米荧光素酶 快速检测 生物发光酶联免疫分析
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白藜芦醇对黄曲霉毒素B1致兔空肠氧化损伤的保护作用
10
作者 常陈昊 张自强 +3 位作者 陈晓光 吕琼霞 丁轲 刘玉梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期19-23,共5页
为了研究白藜芦醇(Res)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的兔空肠氧化应激的保护作用,本试验取21只40日龄的健康肉兔,随机分为对照组(饲喂基础饲粮)、AFB1组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw)AFB1]和AFB1+Res组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·... 为了研究白藜芦醇(Res)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的兔空肠氧化应激的保护作用,本试验取21只40日龄的健康肉兔,随机分为对照组(饲喂基础饲粮)、AFB1组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw)AFB1]和AFB1+Res组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw)AFB1+30 mg/(kg·bw)Res]。饲喂对应饲粮21 d后,采用苏木精-伊红(H.E.)染色和过碘酸雪夫氏(PAS)染色,观察空肠形态结构的改变;使用试剂盒检测空肠组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示,AFB1组兔空肠绒毛断裂,顶端溶解;与对照组相比,AFB1组绒毛高度极显著下降(P<0.01)而隐窝深度极显著上升(P<0.01),绒毛高度与隐窝深度的比率(V/C)极显著下降(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著下降(P<0.05);与AFB1组相比,AFB1+Res组肠道绒毛结构恢复,绒毛高度极显著上升(P<0.01),隐窝深度极显著下降(P<0.01),V/C极显著上升(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著上升(P<0.05);与对照组相比,AFB1组GSH-Px和SOD活性均极显著下降(P<0.01),T-AOC显著下降(P<0.05),MDA含量极显著上升(P<0.01);与AFB1组相比,AFB1+Res组GSH-Px和SOD活性均极显著上升(P<0.01),T-AOC显著上升(P<0.05),MDA含量极显著下降(P<0.01)。结果表明,在饲粮中添加30 mg/(kg·bw)Res可提高空肠抗氧化能力,缓解AFB1诱导的兔空肠结构损伤,为临床缓解AFB1中毒提供理论依据。 展开更多
关键词 白藜芦醇 黄曲霉毒素b1 兔 空肠 氧化应激
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基于氧化应激和线粒体功能障碍的伏马毒素B1诱导线虫神经毒性机制
11
作者 叶永丽 张晓娟 +3 位作者 唐莉莉 王加生 张银志 孙秀兰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期26-35,共10页
为研究线粒体功能和氧化应激在伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)诱导神经毒性中的作用,以秀丽隐杆线虫为模型,对FB1处理后的线虫行为表型以及包括氧化应激和线粒体功能相关指标变化进行分析。结果表明,20~200μg/mL的FB1暴露24 h以剂量依... 为研究线粒体功能和氧化应激在伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)诱导神经毒性中的作用,以秀丽隐杆线虫为模型,对FB1处理后的线虫行为表型以及包括氧化应激和线粒体功能相关指标变化进行分析。结果表明,20~200μg/mL的FB1暴露24 h以剂量依赖方式诱导细胞色素氧化酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)相关基因(cyp35A2、sod-1、sod-3、ctl-2和ctl-3)的异常表达。此外,100~200μg/mL的FB1处理降低了线虫线粒体密度,并显著降低了三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平和线粒体膜电位(P<0.05)。200μg/mL的FB1处理显著抑制了线虫线粒体呼吸链复合物I和Ⅴ的表达,提高了线粒体分裂基因drp-1的表达水平。相关性分析显示,氧化应激和线粒体功能相关指标的表达与线虫行为学表型具有显著相关性。综上,FB1可能通过参与线虫氧化应激、线粒体呼吸链和线粒体动力学过程诱导神经毒性。 展开更多
关键词 伏马毒素b1 秀丽隐杆线虫 氧化应激 线粒体功能障碍 神经毒性
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猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用
12
作者 张曼 王坤丽 +4 位作者 王艳慧 李庆豪 李明 边思琦 皇甫和平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期36-43,共8页
旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)... 旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪β-防御素-2 黄曲霉毒素b1 肠道炎症 小鼠
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介质阻挡等离子体降解乙腈溶液黄曲霉毒素B1规律解析
13
作者 苏迎利 马挺军 魏朝俊 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第8期473-485,共13页
目的:花生、玉米及坚果的黄曲霉毒素B1污染是影响食品质量安全的关键因素,通过等离子体降解黄曲霉毒素B1来降低污染,并探究降解机理是当前的急迫需求。方法:利用等离子体处理技术,在放电功率200 W,放电时间5 s,放电间距0.4 cm条件下降... 目的:花生、玉米及坚果的黄曲霉毒素B1污染是影响食品质量安全的关键因素,通过等离子体降解黄曲霉毒素B1来降低污染,并探究降解机理是当前的急迫需求。方法:利用等离子体处理技术,在放电功率200 W,放电时间5 s,放电间距0.4 cm条件下降解乙腈溶液中的黄曲霉毒素B1,采用高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪和高分辨质谱进行分析,以期获得介质阻挡等离子体法降解黄曲霉毒素B1的产物和路径。结果:分析出5种降解产物的分子式及结构式,其降解途径为Criegee机理、苯环甲氧基反应和亲核反应机理。在降解率为35.8%的情况下,根据5种降解产物毒性位点损失的情况,证明介质阻挡等离子体处理之后毒性与降解率一致。结论:本研究为利用介质阻挡等离子体降解花生、玉米和坚果制品中的黄曲霉毒素B1提供理论参考,后续试验可探讨不同降解率下的产物及反应过程,可通过动物实验或细胞实验进一步探索介质阻挡等离子体降解黄曲霉毒素B1后的潜在毒性验证。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 介质阻挡等离子体 高效液相色谱-三重四级杆质谱联用 降解产物
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量子点荧光微球免疫法定量检测小麦中黄曲霉毒素B1
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作者 范雅靓 吴才章 赵志科 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第10期208-216,共9页
目的建立量子点荧光微球免疫法快速检测小麦中黄曲霉毒素B1的方法。方法采用量子点荧光微球作为荧光标记物,与黄曲霉毒素B1的单克隆抗体偶联,构建量子点荧光微球探针。优化缓冲液pH、抗体最小标记量、荧光探针用量和包被抗原浓度等实验... 目的建立量子点荧光微球免疫法快速检测小麦中黄曲霉毒素B1的方法。方法采用量子点荧光微球作为荧光标记物,与黄曲霉毒素B1的单克隆抗体偶联,构建量子点荧光微球探针。优化缓冲液pH、抗体最小标记量、荧光探针用量和包被抗原浓度等实验条件,建立检测卡上T线和C线信号峰值面积的比值与样本中黄曲霉毒素B1浓度的关系,构建定量标准曲线。针对小麦样品,将该检测方法与时间分辨荧光定量检测方法进行比较。结果本研究建立的荧光定量免疫层析检测方法最佳反应条件为:pH 7.5磷酸钠缓冲液,抗体标记量为20μg,荧光探针用量为4.0μL,抗原质量浓度使用0.40mg/mL。小麦中黄曲霉毒素B1的定量检测线性范围为0.05~25.00μg/kg,相关系数(r^(2))为0.9994,检出限为0.02μg/kg,定量限为0.05μg/kg。加标回收率为91.50%~115.00%,变异系数为1.88%~5.46%。结论本研究建立的荧光定量免疫层析方法快速、准确、稳定性好、可靠性高,适用于小麦中黄曲霉毒素B1的现场快速检测。 展开更多
关键词 量子点荧光微球 黄曲霉毒素b1 荧光免疫 小麦
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鸡骨草黄酮对黄曲霉毒素B_(1)诱导雏鸡肝损伤的缓解作用
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作者 史心茹 林森柱 司红彬 《现代畜牧兽医》 2024年第4期34-39,共6页
研究旨在探讨鸡骨草黄酮(ACE)能否减轻黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))诱导的肝毒性作用,为临床防治AFB_(1)引起的肝损伤提供新思路。选择健康三黄鸡60羽,随机分为3组,每组4个重复,每个重复5只鸡。空白对照组(NC组)饲喂基础日粮,AFB_(1)组饲... 研究旨在探讨鸡骨草黄酮(ACE)能否减轻黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))诱导的肝毒性作用,为临床防治AFB_(1)引起的肝损伤提供新思路。选择健康三黄鸡60羽,随机分为3组,每组4个重复,每个重复5只鸡。空白对照组(NC组)饲喂基础日粮,AFB_(1)组饲喂基础日粮+2.8 mg/kg AFB_(1),ACE组饲喂基础日粮+2.8 mg/kg AFB_(1)+1 g/kg ACE。试验期7 d。结果显示,与NC组相比,AFB_(1)组雏鸡14日龄体重、肝脏谷胱甘肽转移酶(GST)表达量以及肝脏过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著降低(P<0.05),雏鸡血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)活性及肝脏丙二醛(MDA)含量、肝脏细胞色素P450酶1A2 (CYP1A2)表达量显著升高(P<0.05)。与AFB_(1)组相比,ACE组雏鸡14日龄体重、肝脏GST表达量以及CAT、SOD、GSH-Px活性显著升高(P<0.05),雏鸡血清AST、ALT、ALP和GGT活性及肝脏MDA含量、肝脏CYP1A2表达量显著下降(P<0.05)。研究表明,日粮补充ACE可能通过增强抗氧化能力和抑制关键的细胞色素P450酶(CYP450)同工酶介导的AFB1对有毒产物AFB1-8,9-环氧化物(AFBO)的激活,起到协同作用,从而保护雏鸡免受AFB1诱导的肝损伤。 展开更多
关键词 鸡骨草 黄曲霉毒素b1 肝损伤 氧化应激
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艰难梭菌毒素B2型蛋白重组表达及活性分析
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作者 林兴豪 张凯 +6 位作者 王梦婕 杨鸣 顾汉阳 薛笑兰 罗永能 金大智 胡珲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期498-503,共6页
目的 构建艰难梭菌高毒力株2型毒素B(TcdB2)的枯草芽胞杆菌工程株,获得高效表达的生物活性TcdB2蛋白。方法 以ST1/RT027型菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得TcdB2全长基因片段,构建到PHT01载体中,转化枯草芽胞杆菌WB800N菌株,进行原... 目的 构建艰难梭菌高毒力株2型毒素B(TcdB2)的枯草芽胞杆菌工程株,获得高效表达的生物活性TcdB2蛋白。方法 以ST1/RT027型菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得TcdB2全长基因片段,构建到PHT01载体中,转化枯草芽胞杆菌WB800N菌株,进行原核表达获得TcdB2全长蛋白,进一步通过细胞毒性试验验证重组TcdB2的生物活性。结果 成功构建了高效表达TcdB2的枯草芽胞杆菌工程株,并获得具有细胞毒性的重组蛋白TcdB2。结论 具有生物活性的重组TcdB2蛋白,为进一步研究艰难梭菌高毒力株的致病机制和作为疫苗候选靶标等奠定了基础。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒素b 枯草芽胞杆菌 表达 细胞毒性
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乳酸菌肽聚糖对雏鸭饲粮中黄曲霉毒素B 1的脱毒效果研究
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作者 邵怡豪 王煜琦 +3 位作者 张宇豪 张广明 肖发沂 李庆梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期4339-4349,共11页
本试验旨在探究乳酸菌肽聚糖对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的吸附作用,为乳酸菌肽聚糖的制备和饲粮中AFB_(1)的脱毒提供科学依据及理论基础。试验以4种乳酸菌(嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌和植物乳杆菌)为原料提取乳酸菌肽聚糖,... 本试验旨在探究乳酸菌肽聚糖对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的吸附作用,为乳酸菌肽聚糖的制备和饲粮中AFB_(1)的脱毒提供科学依据及理论基础。试验以4种乳酸菌(嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌和植物乳杆菌)为原料提取乳酸菌肽聚糖,采用高效液相色谱法比较4种乳酸菌肽聚糖对AFB_(1)的体外吸附率,选取体外吸附效果最好的罗伊氏乳杆菌肽聚糖进行动物试验。选择1日龄健康樱桃谷鸭120只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础饲粮,AFB_(1)组在基础饲粮中添加0.10 mg/kg AFB_(1),试验组在AFB_(1)组饲粮中分别添加0.10%(Ⅰ组)、0.15%(Ⅱ组)和0.20%(Ⅲ组)罗伊氏乳杆菌肽聚糖。预试期3 d,正试期21 d。结果表明:1)乳酸菌肽聚糖种类、添加量及二者的交互作用均能够显著影响AFB_(1)的体外吸附率(P<0.05),其中10.0 mg/mL罗伊氏乳杆菌肽聚糖对AFB_(1)的体外吸附率最高,达75.29%。2)与对照组相比,AFB_(1)组的平均日增重、平均日采食量显著降低(P<0.05),料重比显著升高(P<0.05);血浆谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)活性及丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊指数显著升高(P<0.05),血浆免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)显著降低(P<0.05)。3)与AFB_(1)组相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的平均日增重显著升高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的血浆IgG、IFN-γ、IL-2、IL-4含量和SOD、GSH-Px活性显著升高(P<0.05),血浆AST、AKP、ALT活性及MDA含量显著降低(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组的胸腺和法氏囊指数显著降低(P<0.05)。由此可见,不同乳酸菌肽聚糖对AFB_(1)体外吸附效果不同,饲粮中添加罗伊氏乳杆菌肽聚糖能够部分消除AFB_(1)对雏鸭造成的生长性能下降,改善AFB_(1)所导致的免疫功能降低以及肝脏毒性。 展开更多
关键词 肽聚糖 乳酸菌 黄曲霉毒素b 1 生长性能 脱毒效果
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黄曲霉毒素B1对仔猪体内流感病毒复制、器官损伤和肠道菌群的影响
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作者 赵文硕 张金龙 +5 位作者 姚兆然 宋宇琪 吕顺 刘迎雪 袁聪聪 孙雨航 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第20期4145-4160,共16页
【背景】黄曲霉毒素B1(AFB1)是由寄生曲霉菌产生的次级代谢产物,广泛存在于世界各地受污染的食品和饲料中,被认为是影响人类和动物健康的主要风险因素之一。猪流感病毒(SIV)是目前世界上传播最为广泛的病毒之一,其复制易受环境和营养等... 【背景】黄曲霉毒素B1(AFB1)是由寄生曲霉菌产生的次级代谢产物,广泛存在于世界各地受污染的食品和饲料中,被认为是影响人类和动物健康的主要风险因素之一。猪流感病毒(SIV)是目前世界上传播最为广泛的病毒之一,其复制易受环境和营养等多种因素影响。然而,饲料中AFB1污染与SIV感染的关系尚不明确。【目的】探究AFB1暴露对SIV感染的仔猪体内SIV复制、器官损伤和肠道菌群的影响,为研究霉菌毒素中毒机制奠定基础,也为探讨其他感染性疾病易感性增加原因提供参考。【方法】选取保育期雄性仔猪32头,随机分为4组(每组8头),在试验开始第1和第4天分别滴鼻接种低致病性SIV病毒稀释液,建立SIV感染仔猪(本体动物)模型。每天新鲜稀释AFB1,按照0、10、20和40μg·kg^(-1)(饲料)浓度灌服给仔猪,持续21 d。分别在第7、14和21天饲喂前对仔猪进行称重,然后应用多种技术手段检测各组仔猪器官脏器指数、剖检变化和病理特征,并在此基础上,进一步使用免疫印迹分析肺部SIV的核衣壳蛋白(NP)的表达情况以及16S rRNA检测肠道菌群变化,阐明AFB1暴露对SIV感染、脏器损伤和肠道菌群的影响。【结果】暴露于40μg·kg^(-1)AFB1的仔猪较对照组仔猪(无AFB1)体增重显著降低(P<0.01),NP蛋白表达以及肺脏指数显著升高(P<0.01),而脾脏指数显著降低(P<0.01)。剖检结果显示,暴露于40μg·kg^(-1)AFB1仔猪的脾脏、肝脏和肺脏损伤严重。H.E染色也表现出相似的结果,与SIV对照组相比,40μg·kg^(-1)AFB1处理组仔猪脾脏出现淤血,红白髓界限不清;肝组织出血、炎症细胞浸润;肺脏小肺泡融合成形态不规则的大肺泡,肺泡间质增厚,炎性细胞浸润增多;此外,肠绒毛形状不规则,结缔组织松散,有淋巴细胞浸润。16S rRNA测序结果显示,暴露于40μg·kg^(-1)AFB1显著提高了仔猪肠道放线菌门和梭状芽孢杆菌的相对丰度,降低了乳酸菌属和拟杆菌属的丰度。【结论】AFB1暴露降低了SIV感染仔猪的体增重,促进SIV复制,加剧了肺组织等器官损伤,并引起肠道菌群紊乱,该发现为研究AFB1的毒性作用机制提供理论参考依据。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 猪流感病毒 病毒复制 脏器损伤 16S rRNA 肠道菌群
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复合离子液体修饰硅胶嵌套海绵材料固相萃取-超高效液相色谱法测定环境水中黄曲霉毒素B1的含量
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作者 李丹娜 王建山 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期758-763,共6页
将功能化离子液体制备的复合离子液体用于修饰硅胶嵌套海绵材料,采用场发射扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱仪对该复合材料的性能进行表征。将复合材料装填于一次性使用无菌注射器制备固相萃取柱,并考察了其吸附容量。水样经除杂、... 将功能化离子液体制备的复合离子液体用于修饰硅胶嵌套海绵材料,采用场发射扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱仪对该复合材料的性能进行表征。将复合材料装填于一次性使用无菌注射器制备固相萃取柱,并考察了其吸附容量。水样经除杂、过滤后,取续滤液1.5 L,以3 mL·min^(-1)流量过上述制备好的固相萃取柱,用5 mL水淋洗,3 mL体积比1∶5的丙酮-2 mol·L^(-1)盐酸溶液的混合液洗脱,收集洗脱液,过0.45μm有机系滤膜,滤液按照色谱条件测定。以Eclipse Plus C18色谱柱作固定相,体积比68∶32的水和体积比1∶1的乙腈-甲醇溶液的混合溶液作流动相进行等度洗脱,荧光检测器测定黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量。结果显示:合成的复合材料中具有六圆环网状结构的海绵骨架和离子液体修饰的硅胶大颗粒物质相互嵌套,形成了类似于钢筋混凝土的结构,兼具离子液体的良好选择性和海绵的机械柔性;制备的固相萃取柱对AFB1的吸附容量为26.48 mg·g^(-1),显著高于文献报道的用于吸附黄曲霉毒素吸附材料的(0.460~4.289 mg·g^(-1));AFB1的质量浓度在0.1~40μg·L^(-1)内和峰面积呈线性关系,测定下限为0.2 ng·L^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为75.2%~95.3%,测定值的相对标准偏差(n=6)为6.9%~8.4%。 展开更多
关键词 离子液体 三聚氰胺海绵 固相萃取 黄曲霉毒素b1 超高效液相色谱法 环境水
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基于全合成纳米抗体库的黄曲霉毒素B1抗体制备
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作者 王云芹 余海洋 +3 位作者 岑金凤 裴志鹏 徐庆强 毛冠超 《联勤军事医学》 CAS 2024年第6期451-456,共6页
目的利用全合成纳米抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)的纳米抗体。方法制备AFB1完全抗原并依托全合成纳米抗体库进行4轮筛选,将捕获的高亲和力抗体基因转化至原核表达系统表达,分析纯化后的抗体特异性及亲和力,并构建抗体G... 目的利用全合成纳米抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)的纳米抗体。方法制备AFB1完全抗原并依托全合成纳米抗体库进行4轮筛选,将捕获的高亲和力抗体基因转化至原核表达系统表达,分析纯化后的抗体特异性及亲和力,并构建抗体G5-AFB1复合三维结构,分析二者的结合特点。结果在AFB1完全抗原制备基础上筛选,随着轮数的增加,特异性噬菌体明显富集,最终获得一株阳性单克隆G5,经鉴定,其半数效应浓度(effec-tive concentration 50%,EC50)为0.953μmol/L,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为43μmol/L。另外,G5-AFB1复合物不仅形成了稳定的氢键,也具备较好的疏水和静电作用。结论通过全合成纳米抗体库可以筛选出良好的AFB1抗体,为AFB1检测与治疗提供了良好基础,也证实了噬菌体展示技术以及全合成纳米抗体库在小分子生物毒素抗体制备中具有较大的发展潜力。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 噬菌体展示技术 全合成纳米抗体库 分子对接
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