目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构...目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 m IL- 1 8和 B7.1的双基因表达质粒 p IRES- IL1 8- B7.1。结果 :经测序证实获得的 m IL- 1 8序列与文献报道完全一致 ,并成功构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 m IL- 1 8的 c DNA,并构建了双基因表达载体 p IRES- IL1 8- B7.展开更多
目的 克隆人 B7.1全长 c DNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。 方法 应用逆转录多聚酶链反应从人 B淋巴瘤细胞系 Raji中克隆 B7.1全长 c DNA ,再将 c DNA插入到质粒 p Bluescript中 ,经自动荧光测序证实无误后 ,再通过定向克隆构建...目的 克隆人 B7.1全长 c DNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。 方法 应用逆转录多聚酶链反应从人 B淋巴瘤细胞系 Raji中克隆 B7.1全长 c DNA ,再将 c DNA插入到质粒 p Bluescript中 ,经自动荧光测序证实无误后 ,再通过定向克隆构建相应的逆转录病毒表达载体 PL XSNh B7。 结果 逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的 889bp一致 ;用 M13正、反向引物进行荧光测序证实 ,克隆出的序列与 Gen Bank的 B7.1c DNA序列完全一致 ;人 B7.1全长 c DNA被成功地插入到质粒 PL XSN中。 结论 人 B7.1全长 c DNA的克隆及相应逆转录病毒表达载体的构建为今后应用 B7.1进行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。展开更多
文摘目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 m IL- 1 8和 B7.1的双基因表达质粒 p IRES- IL1 8- B7.1。结果 :经测序证实获得的 m IL- 1 8序列与文献报道完全一致 ,并成功构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 m IL- 1 8的 c DNA,并构建了双基因表达载体 p IRES- IL1 8- B7.
