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人BLCAP基因单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性 被引量:6
1
作者 刘娟 熊金虎 伍欣星 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第6期646-650,共5页
人膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因是本研究室从细胞原癌、抑癌基因分类芯片中筛选并克隆的宫颈癌候选抑癌基因。为检测该基因调控区的单核苷酸多态性 (SNP)及其不同基因型与宫颈癌的相关性 ,采用病例 对照研究方法及动态等位基因杂交 (DASH... 人膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因是本研究室从细胞原癌、抑癌基因分类芯片中筛选并克隆的宫颈癌候选抑癌基因。为检测该基因调控区的单核苷酸多态性 (SNP)及其不同基因型与宫颈癌的相关性 ,采用病例 对照研究方法及动态等位基因杂交 (DASH)技术 ,对 30例原发性宫颈癌患者和 6 0例正常人BLCAP基因调控区的 2个SNP位点进行了检测。结果显示 :位于BLCAP基因下游调控区的SNPrs3795 14 7位点存在AA、AC和CC 3种基因型 ,且与宫颈癌发病存在显著相关性 (P <0 0 1)。SNPrs3795 14 7处在BLCAP基因下游调控区域 ,其多态类型可能在某种程度上影响BLCAP基因的表达调控 ,从而进一步支持了 :BLCAP基因与宫颈癌的发生、发展可能存在密切关系。 展开更多
关键词 blcap基因 宫颈癌 相关性 单核苷酸多态性(SNP) 单核苷酸多态性 病例-对照研究 相关蛋白 调控区 表达调控 克隆
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宫颈癌相关blcap基因的生物信息学分析 被引量:7
2
作者 刘娟 熊金虎 伍欣星 《中国病毒学》 CSCD 2004年第2期168-170,共3页
BLCAP is a potential gene for suppression of cervical carcinoma, which was found by analysing the cervical carcinoma specimen with the oncogene and anti-oncogene cDNA microarray. Basing on the bioinformatical analyses... BLCAP is a potential gene for suppression of cervical carcinoma, which was found by analysing the cervical carcinoma specimen with the oncogene and anti-oncogene cDNA microarray. Basing on the bioinformatical analyses, we try to predict the function of blcap gene. The results show that there are several genes that highly resemble with blcap. The comparability between the sequences of blcap and Homo sapiens mRNA (DKFZp564M053) or BC10 is 99% and 87%, respectively. The protein encoded by BLCAP is composed of Leu(19.5%)、pro(9.19%)、ser(8.04%)、cys(8.04%) and other amino acids. The secondary structure of the N-terminal of BLCAP encoded protein is an alpha helix. In the C-terminal, it is beta sheet and in the middle, it is coil. The of the terminals is more hydrophobile than the middle region. Between 45-55aa, there is a transmembrane region. Therefore, we forecast the BLCAP is a member of transmembrane protein I. By analyzing the signal peptide and the procedure of blcap gene with the program of SignalP (V1.1), we found a cleavage site in 59-66aa. By using the program of Netpho, we predicted there might be three phospholate sites at 68aa, 73aa and 78aa. At 78-81aa, we found a typical [ST]-X(2)-[DE] structure—the phospholate site of tyrosine protein kinase, which might be related to its function. Bioinformatic studies of blcap provided the foundation for the function researches of BLCAP in laboratory. 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 生物信息学 人乳头瘤病毒 HPV 分子标记 人膀胱癌相关蛋白
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克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒研究 被引量:1
3
作者 范德刚 范清宇 +3 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第18期55-57,60,共4页
目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒。方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒。结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP。结论克隆BL... 目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒。方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒。结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP。结论克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒,为分析蛋白特性、研究基因功能创造了条件。 展开更多
关键词 blcap基因 骨肉瘤 基因 表达
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保肢手术的前瞻性基因疗法研究:BLCAP基因在人骨肉瘤细胞发展过程中的调节作用(英文) 被引量:1
4
作者 范德刚 范清宇 +2 位作者 张惠中 张盈华 刘云燕 《中国临床康复》 CSCD 2004年第5期982-983,共2页
目的:探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础。方法:通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响... 目的:探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础。方法:通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响。结果:BLCAP基因反义寡核苷酸浓度为10μmol/L时,对此细胞的生长速度和集落形成能力有明显促进效应;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化,对细胞增殖活性有增强作用。结论:首次发现BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607有明显的影响,提示BLCAP基因可能作为一种抑癌基因在人骨肉瘤发展过程中起作用。 展开更多
关键词 保肢手术 基因疗法 blcap基因 人骨肉瘤 肿瘤细胞 调节作用 细胞生长 细胞周期 反义寡核苷酸
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BLCAP基因克隆及其真核表达质粒的构建
5
作者 范德刚 范清宇 +3 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第8期F003-F003,共1页
关键词 blcap基因 骨肉瘤 转移 基因重组
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BLCAP基因干扰表达载体的构建及对膀胱癌细胞系T24增殖的影响
6
作者 李显文 钟朝晖 +4 位作者 付春花 陆新升 张斌 罗锦斌 曾灿 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2016年第4期233-234,共2页
有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。... 有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。报告如下。 展开更多
关键词 膀胱癌细胞系 blcap基因 T24 基因干扰 非浸润性膀胱癌 表达载体 基因干预 基因表达 空白对照组 重组载体
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宫颈癌相关BLCAP基因的原核表达及条件优化 被引量:1
7
作者 解庭波 俞娟 +2 位作者 左泽华 赵旻 伍欣星 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期15-19,共5页
目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后... 目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建了pET-32(a)-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 原核表达 条件优化
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BLCAP基因RNA过编辑对肝癌细胞增殖的影响 被引量:1
8
作者 刘琢冰 吴伟刚 +4 位作者 刘妙娜 刘威龙 杨桂林 陈心春 周伯平 《中国热带医学》 CAS 2016年第1期1-5,共5页
目的研究BLCAP基因RNA过编辑对肝癌SMMC7721、Focus细胞的生长增殖能力的影响,并探讨其在肝癌发生发展的作用。方法采用半定量PCR的方法分析BLCAP基因在11株肝癌细胞以及2株正常肝脏细胞中的表达情况,选出2株BLCAP基因相对低表达的肝癌... 目的研究BLCAP基因RNA过编辑对肝癌SMMC7721、Focus细胞的生长增殖能力的影响,并探讨其在肝癌发生发展的作用。方法采用半定量PCR的方法分析BLCAP基因在11株肝癌细胞以及2株正常肝脏细胞中的表达情况,选出2株BLCAP基因相对低表达的肝癌细胞株。以基因转染技术,将空质粒(pc DNA3.1,对照组)、BLCAP_WT(野生型)和BLCAP_RDD(过编辑型)质粒(实验组)分别转染肝癌细胞株,通过Western blot法检验转染效率。利用CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验检测肝癌细胞株的增殖能力。结果半定量PCR结果显示BLCAP基因在肝癌SMMC7721、Focus细胞中的表达量相对较低。Western blot的结果显示,实验组细胞BLCAP基因的蛋白表达水平较对照组细胞明显增高(P<0.05),表明转染较成功。CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验的结果显示,肝癌SMMC7721和Focus细胞在转染BLCAP_RDD质粒后,其增殖能力较空质粒对照组及BLCAP_WT组细胞明显增强(P<0.05)。结论 BLCAP基因过编辑可促进肝癌SMMC7721和Focus细胞的增殖,提示其在肝癌细胞中的过编辑与肝癌的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 blcap基因 过编辑 肝癌细胞 增殖
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BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系 被引量:6
9
作者 苏海川 赵玉红 +4 位作者 范德刚 范清宇 张鹏 文艳华 刘云燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期465-466,共2页
目的 :了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法 :采用SABC法 ,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测 ,观察BLCAP蛋白表达情况 ,结合临床随访结果 ,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果 :BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织... 目的 :了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法 :采用SABC法 ,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测 ,观察BLCAP蛋白表达情况 ,结合临床随访结果 ,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果 :BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织中表达阳性率约为 6 5 .6 % ,而在复发性骨肉瘤组织中表达阳性率只有 2 5 .0 %。结论 :BLCAP蛋白表达水平与骨肉瘤恶性程度之间有一定的相关性 。 展开更多
关键词 blcap基因 骨肉瘤 复发 恶性程度 蛋白表达
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联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选骨肉瘤转移相关基因 被引量:6
10
作者 范德刚 范清宇 +4 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 文艳华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期64-68,共5页
目的 探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法 分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行... 目的 探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法 分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行体外实验 ,观测其对细胞生长特性的影响。结果 基因芯片筛选出 11个差异表达基因 ,多与肿瘤发生发展有关。BRCA1和BLCAP基因反义寡核苷酸均可引起骨肉瘤细胞生长速度变快、克隆形成率增高、增殖活性增强。结论 联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术可以有效地筛选转移相关基因 ,为进一步研究提供有益的参考。 展开更多
关键词 骨肉瘤 转移 基因芯片 反义寡核苷酸 BRcAl基因 blcap基因
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宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定 被引量:1
11
作者 解庭波 左泽华 +3 位作者 彭敏 许蓓妮 赵旻 伍欣星 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第3期275-278,314,i0002,共6页
目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(... 目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 筛选 克隆
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siRNA对HeLa细胞膀胱癌相关蛋白基因表达的抑制作用 被引量:2
12
作者 左泽华 张力 +1 位作者 伍欣星 赵旻 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第6期709-712,732,共5页
目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建BLCAP基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对BLCAP基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重... 目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建BLCAP基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对BLCAP基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重组体经脂质体转染细胞,通过荧光显微镜观察细胞内质粒表达情况,并采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后BLCAP基因mRNA及蛋白的表达,验证RNAi作用的特异性及时效性。结果:同对照组相比,各BLCAP siRNA均可引起靶基因表达水平的显著性下降(P<0.05),尤以pRNA-U6.1-B2-siRNA的作用效果最强(P<0.01);而空脂质体组及阴性对照siRNA组的靶基因表达水平则无明显变化。将pRNA-U6.1-B2-siRNA转染细胞后12,24,48h均可观察到靶基因表达的显著性降低(P<0.05),其中在24h后达到最强抑制效果。结论:不同序列的siRNA,对靶基因的干扰效率不同;BLCAP基因siR-NA能够特异、高效性的抑制靶基因的表达;抑制作用在24h达到高峰,并可维持到转染后48h。试验结果为进一步研究采用RNA干扰技术进行宫颈癌的生物治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 SIRNA blcap基因
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