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Cyclin D1在黄芪甲苷诱导BMSCs向神经元样细胞分化中的表达
1
作者 王晓寅 王会芳 +2 位作者 罗强 张辉 张晓丽 《神经药理学报》 2024年第1期11-17,共7页
目的:研究黄芪甲苷诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化的特点和诱导过程中Cyclin D1的表达特点。方法:采用100 mg·L^(-1)黄芪甲苷诱导BMSCs分化,在1、12、24 h倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫... 目的:研究黄芪甲苷诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化的特点和诱导过程中Cyclin D1的表达特点。方法:采用100 mg·L^(-1)黄芪甲苷诱导BMSCs分化,在1、12、24 h倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法观察巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、Cyclin D1的表达,RT-PCR检测Cyclin D1 mRNA的表达。结果:收集获得的骨髓细胞采用原代和传代培养,至第3代BMSCs细胞基本纯化。经100 mg·L^(-1)黄芪甲苷作用后,部分细胞自胞体长出突起,形态似神经元样细胞且表达Nestin和NSE抗体,Nestin的表达时相早于NSE且表达强度高于NSE(P<0.05)。在药物作用1 h后,BMSCs细胞Cyclin D1不论在基因转录水平还是在蛋白表达水平均出现大幅度下调,此时BMSCs开始有Nestin的表达;药物作用12、24 h,BMSCs细胞Cyclin D1表达与药物作用前表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:黄芪甲苷可能首先通过调整细胞周期,延长了G1期向S期转变的时间,从而启动了BMSCs的分化程序,诱导BMSCs向神经干细胞分化。在黄芪甲苷的营养作用下,细胞的突起进一步生长并向神经元分化。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 bmscs 分化 神经元样细胞 Cyclin D1
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基于BMSCs淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质提取工艺研究 被引量：1
2
作者 冯晓辰 黄迪 訾慧 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2024年第10期61-64,共4页
目的筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺。方法采用正交设计,选取提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素,以BMSCs细胞增殖率结合淫羊藿苷、总黄酮含量为考察指标,筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物... 目的筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺。方法采用正交设计,选取提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素,以BMSCs细胞增殖率结合淫羊藿苷、总黄酮含量为考察指标,筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺,并对最佳提取条件进行验证。结果兼顾生产效率和节约能源,优选出淫羊藿-仙茅-巴戟天角药药效物质的最佳提取条件为提取时间1.5 h,乙醇浓度55%,溶剂用量10倍。验证实验结果BMSCs细胞增殖率、淫羊藿苷及总黄酮含量与工艺考察结果非常接近。结论该方法在保证淫羊藿-仙茅-巴戟天角药治疗骨质疏松的药效基础上,结合淫羊藿苷及总黄酮含量进行综合评价,优化提取工艺,使得实验结果更科学合理。 展开更多
关键词 淫羊藿-仙茅-巴戟天 角药 bmscs 骨质疏松症 正交设计 提取工艺
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抑制PPARγ表达对BMSCs成骨分化的影响
3
作者 蒲龙 周旋然 +2 位作者 江陈榕 李云轩 袁勇 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第9期17-23,共7页
目的探究抑制过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达对BMSCs成骨分化的影响,为原发性骨质疏松症(primary psteoporosis,POP)的治疗提供理论基础。方法将骨密度正常患者提取的BMSCs分为... 目的探究抑制过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达对BMSCs成骨分化的影响,为原发性骨质疏松症(primary psteoporosis,POP)的治疗提供理论基础。方法将骨密度正常患者提取的BMSCs分为正常对照组(CON组),POP患者提取的BMSCs分为原发性骨质疏松组(POP组),取POP组细胞加入PPARγ抑制剂,分为抑制剂组(INR组),经成骨诱导分化后,检测各组细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Osterix、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达情况;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色观察各组BMSCs成骨分化情况。结果POP组ALP阳性细胞数低于CON组和INR组(P<0.05);与CON组相比,POP组中OCN、OPN、Osterix、Runx2表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与POP组相比,INR组中OCN、OPN、Osterix、Runx2表达量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论抑制PPARγ表达后,BMSCs成骨分化特异性基因(ALP、OCN、OPN、Osterix、Runx2)表达增加。 展开更多
关键词 原发性骨质疏松症 PPARΓ bmscs 成骨分化
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仿生聚乳酸纤维膜对大鼠BMSCs成骨分化的影响
4
作者 陈林 王明俊 +3 位作者 孙锦波 谭国兵 谭通夏 陈春 《医学理论与实践》 2024年第20期3421-3426,3450,共7页
目的:探讨微观形貌仿生的聚乳酸纤维膜对大鼠BMSCs生长、铺展、黏附、增殖和成骨分化的影响。方法:取第3代rBMSCs,按1×105个/mL密度接种于覆盖不同直径聚乳酸纤维膜的细胞培养板上,分别为仿生组(A组)直径(357±32)nm、有形貌... 目的:探讨微观形貌仿生的聚乳酸纤维膜对大鼠BMSCs生长、铺展、黏附、增殖和成骨分化的影响。方法:取第3代rBMSCs,按1×105个/mL密度接种于覆盖不同直径聚乳酸纤维膜的细胞培养板上,分别为仿生组(A组)直径(357±32)nm、有形貌对照组(B、C组)直径分别为(164±13)nm、(1311±93)nm,无形貌空白对照组(Ctrl组),在成骨分化实验时增设成骨诱导阳性对照组(Positive组)。扫描电镜观察BMSCs生长、铺展;CCK-8试剂盒检测BMSCs增殖、黏附;实时荧光定量PCR检测Runx2、COLI、ALP、OSX的mRNA表达;Western Blot检测骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OC)的表达。结果:扫描电镜示:A、B二组上细胞具有明显聚集区域,相互联系紧密;单个细胞形态观察,A组较B、C及Ctrl组,细胞铺展面积更大、伪足更多。黏附实验示:在8h、16h,A、B组均高于C组(P<0.05)。增殖实验示:第3、5、7、9天,Ctrl组、A组、B组增殖情况均优于C组(P<0.05),三组间对比,Ctrl组优于A、B组(P<0.05);第7、9天A组增殖情况优于B组(P<0.05)。实时荧光定量PCR显示:在第3、10天,A、Positive组ALP、COLI、Runx2、OSX的mRNA表达量均明显高于B、C及Ctrl组(P<0.05);A组低于Positive组(P<0.05)。蛋白质印迹示:第10天,A、Positive组OPN、OC表达量均明显高于B、C、Ctrl组(P<0.05);A组OC表达量低于Positive组(P<0.05);B、C、Ctrl三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:微观形貌仿生的聚乳酸纤维膜能促进rBMSCs黏附、增殖、成骨分化。 展开更多
关键词 仿生 成骨分化 bmscs 形貌 聚乳酸
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炎性微环境下TGF-β1通过TGF-β1/Smad3通路促进BMSCs成骨分化
5
作者 刘翠翠 吴亚星 +2 位作者 张淑婷 李向鑫 张静 《医学研究杂志》 2024年第3期78-83,共6页
目的研究炎性微环境下转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及作用机制。方法应用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,T... 目的研究炎性微环境下转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及作用机制。方法应用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)体外模拟炎性微环境,检测不同浓度TGF-β1对BMSC增殖活性的影响。实验分为对照组[BMSC+成骨诱导液(osteogenic medium,OM)]、实验组(BMSC+TGF-β1+OM)和抑制组[BMSC+SB431542(TGF-β1拮抗剂)+OM]。应用ALP染色、茜素红染色、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及Western blot法对BMSCs成骨分化能力和TGF-β信号通路因子Smad2、Smad3进行检测并比较3组间的差异。结果低浓度TGF-β1作用下BMSCs增殖活性较高,高浓度(50ng/ml)抑制BMSCs增殖活性;成骨诱导7天和10天时,实验组与其他两组比较,ALP染色较深、面积最大;茜素红染色结果显示,实验组体外矿化结节形成均高于其他两组;RT-qPCR检测结果显示,实验组成骨分化基因OPN、RUNX2与ALP表达均增高,TGF-β信号通路中Smad3在实验组表达最高,抑制组表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果显示,实验组内OPN、RUNX2与ALP蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β信号通路中Smad3蛋白表达在3组中差异不明显,而p-Smad3在实验组中表达明显增高、抑制组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论炎性微环境中TGF-β1通过激活TGF-β/Smad3信号通路促进了BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 TGF-Β1 bmscs 炎症 信号通路 骨向分化
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压力作用下血小板反应蛋白-2通过调控黏着斑形成促BMSCs成软骨分化的研究
6
作者 赵萤 范刘美子 +2 位作者 王惠 张旻 胡胜 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期391-391,共1页
目的力学刺激在软骨发育和软骨组织稳态维持中有重要作用。前期研究发现,动态压力刺激促进BMSCs成软骨分化的过程中,伴随血小板反应蛋白-2(TSP-2)的表达上调,且TSP-2与BMSCs成软骨分化密切相关,但其作用机制尚未完全阐明。本研究采用外... 目的力学刺激在软骨发育和软骨组织稳态维持中有重要作用。前期研究发现,动态压力刺激促进BMSCs成软骨分化的过程中,伴随血小板反应蛋白-2(TSP-2)的表达上调,且TSP-2与BMSCs成软骨分化密切相关,但其作用机制尚未完全阐明。本研究采用外源性TSP-2多肽以及慢病毒干扰TSP-2表达后,检测动态压力下TSP-2在BMSCs成软骨分化中的作用及机制。方法体外分离培养BMSCs,分为对照组、TSP-2组、sh TSP-2组、压力组、压力+TSP-2组和压力+sh TSP-2组;免疫荧光染色法检测细胞中FAK的表达,并对黏着斑数量进行统计分析;采用超低黏附培养皿对BMSCs行3D培养,倒置光学显微镜观察细胞团块并拍照;Western blotting检测细胞团块中成软骨标志蛋白Sox9的表达;结果贴壁培养的sh TSP-2组、压力组和压力+sh TSP-2组BMSCs中,FAK的表达水平和黏着斑数量显著高于对照组(P<0.05),压力+TSP-2组与压力组相比黏着斑数量显著下调(P<0.05);sh TSP-2组和压力+sh TSP-2组中细胞团块存在大量未聚集的细胞;Western blotting结果显示TSP-2组、压力组、压力+TSP-2组细胞团块中Sox9的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论动态压力刺激下TSP-2通过抑制BMSCs黏着斑的形成,促BMSCs向成软骨方向分化。 展开更多
关键词 成软骨分化 黏着斑 血小板反应蛋白 力学刺激 压力刺激 标志蛋白 bmscs FAK
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静水压力对BMSCs凋亡的影响及凋亡外囊泡特异性microRNA的研究
7
作者 王惠 朱悦 +1 位作者 杨祎琳 张旻 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期426-426,共1页
目的明确不同静水压力作用对BMSCs细胞凋亡的影响,并筛选压力作用下BMSCs凋亡囊泡表达的差异mi RNA。方法分离培养大鼠BMSCs并鉴定;细胞分为对照组、压力作用组(-40 k Pa,0.1 Hz作用1 h)、STS作用组(0.5μM,16 h),梯度离心法提取凋亡囊... 目的明确不同静水压力作用对BMSCs细胞凋亡的影响,并筛选压力作用下BMSCs凋亡囊泡表达的差异mi RNA。方法分离培养大鼠BMSCs并鉴定;细胞分为对照组、压力作用组(-40 k Pa,0.1 Hz作用1 h)、STS作用组(0.5μM,16 h),梯度离心法提取凋亡囊泡;CCK8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blotting检测细胞凋亡标志物的表达及凋亡囊泡标志物的表达,NTA检测凋亡囊泡尺寸及浓度。采用高通量mi RNA测序技术对压力作用下BMSCs凋亡囊泡相关差异mi RNA进行筛选。结果采用全骨髓贴壁的方法分离培养的大鼠BMSCs可高表达干细胞表面标志物CD90、CD29、低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45,并具有较强的克隆形成能力和多向分化的能力,为间充质干细胞。适当的静水压力处理可显著降低BMSCs细胞活性,促进其凋亡发生,并且-40 KPa压力作用下BMSCs凋亡率最高,且凋亡囊泡产生数量显著多于对照组。采用测序技术发现,-40 KPa压力作用产生的凋亡囊泡差异性表达mi R-183-5p和mi R-3473。结论适当的静水压力可以促进BMSCs的凋亡,并且-40 KPa压力作用下BMSCs凋亡囊泡差异性表达抗炎相关基因mmi R-183-5p和mi R-3473。 展开更多
关键词 梯度离心法 静水压力 CD45 CD90 间充质干细胞 细胞凋亡 细胞活性 bmscs
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基于SDF-1/CXCR4轴探讨补肾壮筋汤促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的机制研究
8
作者 黄艳峰 马德尊 +3 位作者 付长龙 叶锦霞 黄云梅 李西海 《康复学报》 CSCD 2024年第1期44-54,共11页
目的探讨补肾壮筋汤调控SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的作用机制,为膝骨关节炎(KOA)的康复治疗提供实验依据。方法①动物实验中,选用8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤... 目的探讨补肾壮筋汤调控SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的作用机制,为膝骨关节炎(KOA)的康复治疗提供实验依据。方法①动物实验中,选用8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤组,每组10只,干预12周。采用micro-CT、HE染色观察各组软骨形态变化;激光共聚焦显微镜观察骨组织SDF-1荧光强度;qPCR、Western blot检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量。②细胞实验中,选用4周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,采用全骨髓贴壁法提取原代BMSCs,流式细胞术对所提取的细胞进行鉴定后,筛选最佳慢病毒MOI值;随机将细胞分为空白组、空载组、补肾壮筋汤组、sh-SDF-1组、sh-SDF-1+补肾壮筋汤组5组,采用划痕实验观察各组BMSCs迁移情况;阿利新蓝、CollagenⅡ免疫细胞学染色观察各组细胞成软骨分化能力;激光共聚焦显微镜观察各组SDF-1、CXCR4的荧光强度;qPCR检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平。结果①动物实验中,关节组织形态学结果(micro-CT、HE染色)显示:与假手术组比较,模型组股骨髁间可见一圆形缺损,骨皮质失连,软骨细胞缺失;与模型组比较,补肾壮筋汤组股骨髁间环形缺损好转,软骨细胞排列稍紊乱。关节组织免疫荧光显示:与假手术组比较,模型组SDF-1蛋白相对表达量升高;与模型组比较,补肾壮筋汤组SDF-1的蛋白相对表达量升高(P<0.05)。qPCR与Western blot结果显示:与假手术组比较,模型组归巢关键调控因子(SDF-1、CXCR4、MIP-1α、MCP-1、MIP-1β、RANTES、VEGF、G-CSF、NCAM-1、MMP-2)的mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,补肾壮筋汤组归巢关键调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。②细胞实验中,BMSCs经细胞流式术鉴定:CD44、CD105呈阳性表达,CD34呈阴性表达。当病毒MOI值为100时,SDF-1基因感染率最高。BMSCs迁移和成软骨分化能力检测结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞向划痕区域迁移的细胞数量、酸性黏多糖及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组迁移的细胞数量、阿利新蓝染色及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。细胞免疫荧光显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著减少;补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。qPCR结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组归巢关键调控因子的mRNA转录水平降低(P<0.05),补肾壮筋汤组归巢关键调控因子的mRNA转录水平升高(P<0.05)。结论补肾壮筋汤可通过上调SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢保护关节软骨。 展开更多
关键词 软骨损伤 补肾壮筋汤 bmscs SDF-1/CXCR4 归巢
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BMSCs对骨质疏松性骨折模型大鼠的影响及作用机制
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作者 李杨 陈勇 +7 位作者 白亮 李伟 孟勇 曾庆亮 赵耀伟 张雷 王叶密 庄全魁 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第15期3819-3822,共4页
目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对骨质疏松性骨折模型大鼠的影响及作用机制。方法将48只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、骨质疏松性骨折组、BMSCs处理的骨质疏松性骨折组,比较骨生物力学变化情况及骨密度和骨超声振幅衰减程度;同时... 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对骨质疏松性骨折模型大鼠的影响及作用机制。方法将48只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、骨质疏松性骨折组、BMSCs处理的骨质疏松性骨折组,比较骨生物力学变化情况及骨密度和骨超声振幅衰减程度;同时测量椎体骨组织形态学指标:骨小梁体积百分比、骨小梁表面百分比、骨小梁平均宽度、矿化沉积率;酶联免疫吸附试验测定血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C-末端肽水平。结果骨质疏松性骨折组右侧股骨和L5椎体的弹性模量、最大载荷明显低于假手术组,BMSCs处理的骨质疏松性骨折组上述指标荷明显高于骨质疏松组(P<0.05)。骨质疏松性骨折组骨密度、超声衰减程度明显低于假手术组,BMSCs处理的骨质疏松性骨折组上述指标明显高于骨质疏松性骨折组(P<0.05)。骨质疏松性骨折组骨小梁体积百分比、骨小梁平均宽度明显低于假手术组,骨小梁表面百分比、矿化沉积率明显高于假手术组(P<0.05);BMSCs处理的骨质疏松性骨折组骨小梁体积百分比、骨小梁平均宽度明显高于骨质疏松性骨折组,骨小梁表面百分比、矿化沉积率明显低于假手术组(P<0.05)。骨质疏松性骨折组血清骨碱性磷酸酶明显低于假手术组,Ⅰ型胶原交联C-末端肽水平明显高于假手术组(P<0.01);BMSCs处理的骨质疏松性骨折组血清骨碱性磷酸酶明显高于假手术组,Ⅰ型胶原交联C-末端肽水平明显低于假手术组(P<0.01)。结论BMSCs能够明显改善骨质疏松性骨折模型大鼠的骨生物力学和骨组织形态学指标,提升骨密度,可能与上调骨碱性磷酸酶表达、下调Ⅰ型胶原交联C-末端肽表达有关。 展开更多
关键词 骨质疏松性骨折 骨髓间充质干细胞(bmscs) 骨碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原交联C-末端肽
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中医药调控BMSCs成骨分化防治骨质疏松症的研究进展 被引量：6
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作者 曹天媛 倪志明 +4 位作者 刘新宇 武豪 盛淳汇 胡卓仪 张亚峰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1669-1674,共6页
骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化与成脂分化不平衡是导致骨质疏松症(OP)的主要原因之一,故在治疗OP方面,调控BMSCs的增殖、分化已成为重要手段。大量研究显示中药及其复方可以通过调节相关基因及通路的表达诱导BMSCs增殖、迁移及成... 骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化与成脂分化不平衡是导致骨质疏松症(OP)的主要原因之一,故在治疗OP方面,调控BMSCs的增殖、分化已成为重要手段。大量研究显示中药及其复方可以通过调节相关基因及通路的表达诱导BMSCs增殖、迁移及成骨分化,从而达到防治骨质疏松症的目的。近年来,中医药在防治OP方面的优势不断扩大。故本文结合中药及其复方调控BMSCs成骨分化防治OP的医学研究,为中医药防治OP提供相关依据。 展开更多
关键词 bmscs 中医药 骨质疏松 成骨分化
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GH/IGF-1系统在BMSCs成脂分化过程中作用机制的实验研究
11
作者 付夜平 孙鑫 +3 位作者 杨芳 李俊儒 王致远 刘彤 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期324-329,共6页
目的研究温肾健脾、活血化瘀含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化作用过程中生长激素(GH)/胰岛素样生长因子1(IGF-1)系统的调节机制。方法将40只SPF级雄性SD大鼠用随机数字表法分成4组,依次为正常组、成脂诱导组、温肾健脾组、... 目的研究温肾健脾、活血化瘀含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化作用过程中生长激素(GH)/胰岛素样生长因子1(IGF-1)系统的调节机制。方法将40只SPF级雄性SD大鼠用随机数字表法分成4组,依次为正常组、成脂诱导组、温肾健脾组、活血化瘀组。对大鼠进行7 d灌胃,制备含药血清,按一定比例将含药血清与完全培养基进行配比用以BMSCs成脂分化的培养。油红O染色观察BMSCs成脂分化情况后,用ELISA法测定脂肪细胞中GH、IGF-1的蛋白水平。结果GH蛋白表达水平结果:与正常组比较,成脂诱导组低于正常组,差异不具有统计学意义(P>0.05)。与成脂诱导组相比,温肾健脾组、活血化瘀组结果均优于成脂诱导组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。温肾健脾组与活血化瘀组相比,活血化瘀组结果优于温肾健脾组。②IGF-1蛋白表达水平结果:与正常组相比,成脂诱导组结果高于正常组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。与成脂诱导组相比,温肾健脾组、活血化瘀组结果均低于成脂诱导组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。温肾健脾组、活血化瘀组相比,活血化瘀组结果高于温肾健脾组。结论温肾健脾、活血化瘀中药可能通过GH/IGF-1系统发挥抑制BMSCs的成脂分化作用。 展开更多
关键词 温肾健脾 活血化瘀 骨髓间充质干细胞(bmscs) 成脂分化 生长激素(GH) 胰岛素样生长因子1(IGF-1)
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LncRNA与miRNA的相互作用调控BMSCs谱系分化的研究进展
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作者 倪志明 曹天媛 +3 位作者 黄松 张宗瑞 张强 尹恒 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期611-615,共5页
骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨与成脂分化失衡是导致骨质疏松症(OP)的主要原因之一,在治疗骨质疏松症方面,调控BMSCs的谱系分化已成为当前主要手段。随着生物学研究的不断深入,长链非编码蛋白RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA)均广泛参与调控B... 骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨与成脂分化失衡是导致骨质疏松症(OP)的主要原因之一,在治疗骨质疏松症方面,调控BMSCs的谱系分化已成为当前主要手段。随着生物学研究的不断深入,长链非编码蛋白RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA)均广泛参与调控BMSCs谱系分化的过程。大多数miRNA可作为内源性竞争性RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控lncRNA的表达进程,许多lncRNA还充当miRNA的ceRNA以调节影响不同途径的miRNA靶向基因的表达。二者之间的相互作用对于调控BMSCs谱系分化有着更为明显的优势,故本文围绕其进行综述,为临床治疗骨质疏松症寻找新的理论和实验依据。 展开更多
关键词 LncRNA MIRNA bmscs 骨质疏松 谱系分化
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BMSCs介导STAT3对脑出血大鼠海马组织eIF2α、Glu表达水平的影响
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作者 林兆信 陈海云 +5 位作者 陈海恋 黄优 高唯一 张洪源 张羽康 王景 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第3期170-174,共5页
目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠海马组织真核细胞翻译起始因子2α亚基(eIF2α)、谷氨酸(Glu)表达水平的影响及其机制。方法100只SD大鼠,随机选取10只分离BMSCs,剩余90只采用Ⅳ型胶原酶构建ICH模型。90只大鼠随... 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠海马组织真核细胞翻译起始因子2α亚基(eIF2α)、谷氨酸(Glu)表达水平的影响及其机制。方法100只SD大鼠,随机选取10只分离BMSCs,剩余90只采用Ⅳ型胶原酶构建ICH模型。90只大鼠随机分为假手术组、ICH组和BMSCs移植组,每组30只。造模成功后24h,BMSCs移植组大鼠经尾静脉注入BMSCs,其余2组注入等体积0.9%氯化钠溶液。观察大鼠一般情况,评估神经功能,测定脑组织含水量。蛋白印迹测定海马组织内质网应激相关因子、eIF2α及JAK/STAT3通路蛋白水平,高效液相色谱法测定Glu浓度,TUNEL法分析细胞凋亡情况。结果ICH组大鼠神经功能缺损评分(NSS)和脑组织含水量显著大于假手术组,海马组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白相对表达量显著低于假手术组,CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12蛋白相对表达量显著高于假手术组,海马组织eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著高于假手术组,海马神经细胞凋亡率显著高于假手术组,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);与ICH组比较,BMSCs移植组大鼠NSS评分和脑组织含水量显著降低,海马组织GRP78蛋白相对表达量显著增加,CHOP和Caspase-12蛋白相对表达量显著降低,eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著降低,海马神经细胞凋亡率显著降低,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。结论BMSCs移植可通过JAK/STAT3通路降低ICH大鼠海马组织eIF2α和Glu表达,抑制神经细胞凋亡,减轻内质网应激,从而达到减轻脑损伤,改善神经功能作用。 展开更多
关键词 脑出血 bmscs移植 真核细胞翻译起始因子2α亚基 谷氨酸 JAK/STAT3通路 内质网应激
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BMSCs外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤修复的影响
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作者 贾祎佳 陆廷盛 +4 位作者 姚书眈 杨建文 姬林松 杨再松 罗春山 《河北医药》 CAS 2023年第7期976-980,共5页
目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤(SCI)修复的影响。方法原代分离和培养BMSCs,测定BMSCs细胞表面标记物(CD90,CD45)表达;提取BMSCs外泌体,观察外泌体形态及外泌体标记分子(Alix、CD63)表达;建立SCI大... 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤(SCI)修复的影响。方法原代分离和培养BMSCs,测定BMSCs细胞表面标记物(CD90,CD45)表达;提取BMSCs外泌体,观察外泌体形态及外泌体标记分子(Alix、CD63)表达;建立SCI大鼠模型,随机将大鼠分为假手术组、SCI组、外泌体组、外泌体-抑制剂对照(NC)组、外泌体-miR-133a抑制剂组,28 d后,对各组大鼠进行BBB评分评估脊髓损伤程度;分离大鼠骨髓组织,检测该组织病理学变化、细胞凋亡状况;同时检测相关蛋白[胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)、炎性小体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1]及miR-133a表达水平。双荧光素酶实验验证miR-133a、NLRP3靶向关系。结果BMSCs细胞中CD90、CD45表达率分别为98.07%、0.09%。外泌体呈球形,Alix、CD63呈阳性表达。与假手术组比较,SCI组BBB评分、NeuN、miR-133a表达显著降低,细胞凋亡率、GFAP、NLRP3、caspase-1表达显著增加(P<0.05);与SCI组比较,外泌体组BBB评分、NeuN、miR-133a表达显著增加,细胞凋亡率、GFAP、NLRP3、caspase-1表达显著降低(P<0.05);抑制miR-133a表达逆转了外泌体对SCI大鼠的修复作用(P<0.05)。结论BMSCs外泌体来源miR-133a,可对SCI大鼠起到修复作用。 展开更多
关键词 bmscs 外泌体 miR-133a 大鼠脊髓损伤 修复
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TGF-β_1和IGF-1共同转染大鼠BMSCs向软骨细胞分化的实验研究 被引量：12
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作者 付勤 于冬冬 +2 位作者 王勇 付永慧 宫树一 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-162,共6页
目的探讨应用TGF-β1和IGF-1基因转染大鼠BMSCs后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路。方法6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150g。扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1... 目的探讨应用TGF-β1和IGF-1基因转染大鼠BMSCs后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路。方法6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150g。扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1,酶切、电泳鉴定并测序。采用密度梯度离心法和贴壁分离法,分离、纯化Wistar大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代BMSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志。将TGF-β1和IGF-1基因单独或共转染第3代BMSCs,按转染情况分为5组:未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染TGF-β1组(C组)、转染IGF-1组(D组)、TGF-β1与IGF-1共转染组(E组)。对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Western blot法检测筛选后细胞的表达。结果电泳显示IGF-1和TGF-β1两目的基因条带,基因测序与Gene-Bank cDNA序列相符。大鼠BMSCs原代细胞接种24h后可见少量贴壁突起细胞,4、5d开始形成典型的BMSCs簇状增生,9、10d细胞生长即可达80%～90%融合;传代后细胞形态较均一。免疫荧光法检测BMSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD45呈阴性反应。转染24h后有少量细胞死亡,筛选3周后细胞克隆形成,至第4周细胞可传代,多数细胞变成多边形,部分细胞边界不清,呈圆形,核偏位,核周颗粒明显。MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490nm波长处的吸光度(A)值,分别为0.432±0.038、0.428±0.041、0.664±0.086、0.655±0.045和0.833±0.103。A、B组与C、D、E组间差异均有统计学意义(P<0.01),但A、B组以及C、D、E组间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和Western blot检测目的基因和蛋白的表达量,TGF-β1表达以C组最多,分别为0.9250±0.0220、124.3417±2.9820,E组次之,分别为0.7717±0.0120、101.7667±1.2410(P<0.01);IGF-1表达以E组最多,分别为1.0200±0.0260、128.1717±9.1520,D组次之,分别为0.4650±0.0420、111.0450±6.2480(P<0.01);II型胶原表达以E组最多,分别为0.9800±0.0340、120.3550±12.5500,C组次之,分别为0.7200±0.0260、72.2467±7.3640(P<0.01)。结论通过TGF-β1和IGF-1基因共同转染BMSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义。 展开更多
关键词 软骨组织工程 bmscs 基因转染TGF-β1 IGF-1 大鼠
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辛伐他汀联合BMSCs治疗激素性股骨头坏死的实验研究 被引量：13
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作者 杨建平 王黎明 +2 位作者 徐燕 王劲松 王雁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期290-294,共5页
目的单纯BMSCs治疗激素性股骨头坏死的效果尚不理想,探讨辛伐他汀联合BMSCs治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法取24只新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,取第2代细胞制备为1×107/mL细胞悬液,与明胶海绵复合。取70只新西兰大白兔经耳... 目的单纯BMSCs治疗激素性股骨头坏死的效果尚不理想,探讨辛伐他汀联合BMSCs治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法取24只新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,取第2代细胞制备为1×107/mL细胞悬液,与明胶海绵复合。取70只新西兰大白兔经耳缘静脉注射10μg/kg脂多糖,24h后臀肌注射20mg/kg甲基强的松龙琥珀酸钠,共3次,每次间隔24h,制备股骨头坏死模型。选取制备成功的48只,随机分为4组,每组12只。A组:不作任何处理;B组:单纯减压,并于减压通道植入明胶海绵;C组:减压同时植入复合BMSCs的明胶海绵;D组:减压同时植入复合BMSCs的明胶海绵,每日灌服辛伐他汀(10mg/kg)至处死。观察动物一般情况,于术后4、8周各组取6只行MRI扫描后,处死取股骨头行组织学及免疫组织化学染色,扫描电镜观察。结果术后8周C、D组动物走路姿势逐步好转。术后4周各组MRI未见明显坏死区信号改变,8周时A组可见坏死低信号区明显扩大,B组无变化,C组范围缩小,D组明显缩小。组织病理学观察,术后4周A组见空骨陷窝,无新生毛细血管;B组空骨陷窝较多,有少量新生毛细血管;C、D组空骨陷窝减少,坏死区有大量增生活跃的成骨细胞及新生毛细血管。D组空骨陷窝阳性数及微血管密度分别为19.30±1.52和7.08±1.09,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后8周,A组可见部分骨小梁断裂;B组减压孔道有纤维性骨痂形成;C组空骨陷窝少见,髓腔形态不规则;D组大量新生骨形成,髓腔较规则,髓内脂肪细胞大小及分布均匀。D组空骨陷窝阳性数及微血管密度分别为11.31±1.28和12.37±1.32,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05),与术后4周比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜观察:术后8周,A组骨小梁见多处断裂塌陷,骨小梁表面未见骨细胞,髓腔内有大量脂肪细胞堆积;B组部分骨小梁可见裂痕;C组骨小梁不致密;D组骨小梁结构规整致密,成骨细胞多,骨细胞及基质胶原纤维正常,髓腔规则。结论辛伐他汀能促进BMSCs成骨及成血管化,辛伐他汀联合BMSCs治疗激素性股骨头坏死具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 辛伐他汀 bmscs 激素性股骨头坏死 兔
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BMSCs成骨分化的干预效应血小板裂解液对大鼠 被引量：10
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作者 宋会平 王志强 +3 位作者 赵亚平 陈学英 张育敏 李宝兴 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期737-741,共5页
目的观察血小板裂解液(platelet lysate,PL)对大鼠BMSCs成骨诱导分化的干预效应。方法成年健康清洁级Wistar大鼠24只,体重250～300 g,雌雄不限。取16只大鼠心内采血,采用3次离心结合反复冻融法制备PL,ELISA法测定PL中PDGF、TGF-β1、IG... 目的观察血小板裂解液(platelet lysate,PL)对大鼠BMSCs成骨诱导分化的干预效应。方法成年健康清洁级Wistar大鼠24只,体重250～300 g,雌雄不限。取16只大鼠心内采血,采用3次离心结合反复冻融法制备PL,ELISA法测定PL中PDGF、TGF-β1、IGF-1和VEGF含量。另取8只大鼠,采用全骨髓分离培养法扩增传代BM SCs,取第4代细胞按1×104/cm2接种行成骨诱导培养。按诱导培养液的不同,实验分为3组,A、B组基础诱导培养基中分别含终浓度为5%和1%的PL,C组仅含基础诱导培养基。倒置相差显微镜动态观察各组细胞形态变化及生长状况;诱导培养7 d,各组行ALP染色;诱导培养2、8、10 d,ALP/总蛋白含量确定ALP活性;诱导培养20 d,茜素红染色观察矿化结节形成并定量分析。结果PL中PDGF、TGF-β1、IGF-1和VEGF含量分别为(300±30)、(140±25)、(80±35)和(70±20)pg/mL。倒置相差显微镜观察,各组BMSCs形态逐渐发生改变,出现类成骨细胞样形态特征;A组细胞形态变化不及B、C组明显,但细胞增殖较快;20 d A组细胞仍密集生长,ECM中形成的矿物沉积显著少于B、C组。诱导培养7 d,A组细胞胞浆中有少量颗粒,ALP染色呈弱阳性;B、C组细胞胞浆中有大量棕褐色颗粒,ALP染色呈强阳性。诱导培养2、8、10 d,ALP活性定量分析示A组显著低于B组和C组(P<0.05)。诱导培养20 d,茜素红染色显示A、B、C组钙结节数量分别为(7.67±1.10)、(12.87±0.81)和(15.59±1.25)个;矿化结节面积分别为(161 778.70±44 550.80)、(337 349.70±56 083.24)和(415 921.70±71 725.39)像素;A组均明显低于B组和C组(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PL是多种生长因子的承载体系,以剂量依赖方式抑制BMSCs成骨诱导中ALP活性和矿化结节形成。 展开更多
关键词 血小板裂解液 生长因子 bmscs 细胞分化 大鼠
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HA复合rhBMP-2转染的BMSCs对羊胫骨延长骨愈合的影响 被引量：8
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作者 林在俊 朱振安 +3 位作者 汤亭亭 戴尅戎 楼觉人 孟凡琳 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期134-138,共5页
目的评价HA复合rhBMP-2的腺病毒(adenovirus mediated rhBMP-2,Adv-rhBMP-2)转染的羊BMSCs对骨痂延长骨愈合的影响。方法成年山羊19只,雌雄不限,体重15～20kg。于每只羊髂嵴上穿刺抽取骨髓10mL,常规传代培养BMSCs。取第3代BMSCs,以感染... 目的评价HA复合rhBMP-2的腺病毒(adenovirus mediated rhBMP-2,Adv-rhBMP-2)转染的羊BMSCs对骨痂延长骨愈合的影响。方法成年山羊19只,雌雄不限,体重15～20kg。于每只羊髂嵴上穿刺抽取骨髓10mL,常规传代培养BMSCs。取第3代BMSCs,以感染复数200转染腺病毒。取0.25%胰蛋白酶消化转染后3d的细胞1×108个,与HA充分混匀制备Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA。建立山羊右侧胫骨延长模型,术后立即于截骨部位注射自体细胞复合物。按术后注入物质不同随机分成4组:A组为Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA组(n=6),B组为Adv-rhBMP-2/BMSCs组(n=5),C组为Adv-β-gal/BMSCs/HA组(n=4),D组为空白组(n=4)。术后第7天开始行胫骨延长,速度1mm/d,共延长4周。术后5、8、12周摄X线片观察骨痂生长情况,12周处死动物,取标本分别行骨密度检测、生物力学测定、组织学观察和骨形态计量学分析。结果X线片检查示,术后5、8周A、B组骨痂生成量明显多于C、D组,X线片定量评分A、B组明显高于C、D组,差异均有统计学意义(P<0.05);12周各组均在骨延长部位形成连续骨痂。骨密度测定:术后12周A、B、C、D组延长部位骨矿物质含量分别为(4.175±1.921)、(2.600±0.638)、(2.425±0.826)和(1.175±0.574)?g,骨矿物质密度分别为(0.612±0.196)、(0.630±0.159)、(0.450±0.166)和(0.266±0.113)g/cm2,A、B组显著高于C、D组(P<0.05)。生物力学测定:A、B、C、D组最大载荷分别为(490.20±155.08)、(350.59±80.48)、(221.95±68.79)和(150.65±92.29)N,弹性模量为(178.24±105.80)、(105.88±27.09)、(81.18±48.67)和(50.35±47.64)MPa,各指标A组显著高于C、D组(P<0.05)。组织学观察见A组骨延长处大量新生骨组织,骨小梁多为纵行网状排列。骨形态计量分析示A、B、C、D组新骨体积分别为72.35%±5.68%、67.58%±7.42%、49.63%±4.87%和38.87%±2.35%,A组新生骨生成量明显比D组多(P<0.05)。结论HA复合rhBMP-2修饰的BMSCs制备的组织工程骨可促进羊胫骨延长骨愈合。 展开更多
关键词 组织工程骨 HA RHBMP-2 bmscs 牵引成骨
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杜仲叶通过Shp2激活Erk1/2促进BMSCs增殖的研究 被引量：8
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作者 邓鸣涛 张立超 +5 位作者 方宁 陈林攀 戴鹏 戴江华 罗军 刘荣华 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1286-1288,共3页
目的研究杜仲叶提取物对大鼠BMSCs的增殖作用及其分子机制。方法使用密度梯度离心和贴壁培养法从SD大鼠股骨骨髓中获取BMSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原;分别用0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物和20mg/ml杜仲叶提取物+10μmol/L ... 目的研究杜仲叶提取物对大鼠BMSCs的增殖作用及其分子机制。方法使用密度梯度离心和贴壁培养法从SD大鼠股骨骨髓中获取BMSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原;分别用0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物和20mg/ml杜仲叶提取物+10μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理BMSCs,2 d后BrdU检测细胞增殖情况;用无血清无酚红培养基饥饿大鼠BMSCs 6 h后,一组分别加入0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物处理15 min,另一组用10μmol/LShp2抑制剂处理预处理2 h后加入20 mg/ml杜仲叶提取物处理15 min,Western blot检测p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平的变化。结果流式细胞仪细胞表面抗原检测显示CD29、CD90呈阳性,CD34、CD45呈阴性;BrdU结果显示杜仲叶提取物促进BMSCs增殖,并具有浓度依赖性,NSC87887可以抑制其促进作用;杜仲叶提取物可以诱导BMSCs的p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平升高,而对诱导Erk1/2磷酸化的促进作用是通过激活Shp2来完成的。结论杜仲叶提取物通过Shp2/Erk途径促进大鼠BMSCs增殖。 展开更多
关键词 杜仲叶 bmscs Shp2 ERK1 2 增殖
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间歇性负压培养对人BMSCs骨保护素和骨保护素配体mRNA表达水平的影响 被引量：8
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作者 杨治 张银刚 +2 位作者 刘淼 郭雄 许鹏 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1354-1357,共4页
目的探讨间歇性负压对体外培养的人BMSCs骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)mRNA表达水平的影响。方法2008年1月由2例髋关节骨性关节炎行人工关节置换患者自愿捐赠骨髓,分离并体外培养人BMS... 目的探讨间歇性负压对体外培养的人BMSCs骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)mRNA表达水平的影响。方法2008年1月由2例髋关节骨性关节炎行人工关节置换患者自愿捐赠骨髓,分离并体外培养人BMSCs,取第3代细胞。实验组进行负压诱导,设置压力为50kPa,30min/次,2次/d,间歇性负压干预2周;对照组于普通CO2培养箱中常规培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态,并通过实时定量PCR检测OPG mRNA和OPGL mRNA表达水平。结果实验组细胞增殖速度略低于对照组,细胞逐渐由梭形向多角形转变,有数个突起,数目和形态不定,10～14d细胞融合成单层,2周后逐渐形成多个散在致密岛状结构;对照组细胞大部分为梭形。间歇性负压培养2周后,与对照组比较,实验组细胞OPG mRNA表达水平显著提高,OPGL mRNA表达水平显著降低,OPGL mRNA与OPG mRNA比率显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论间歇性负压促进人BMSCs OPG表达,同时抑制其OPGL表达。 展开更多
关键词 间歇性负压 bmscs 骨保护素 骨保护素配体
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