16SrRNA基因聚合酶链反应快速检测烧伤脓毒症细菌病原体的研究 被引量：2

1

作者 闵定宏 余绍青 +1 位作者 王小平 易冬英 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期2598-2603,共6页

目的为早期诊断烧伤脓毒症,探索一种能迅速检测细菌感染的方法。方法按标准收集可疑脓毒症患者39人外周静脉血标本共41份。将每份标本一分为二分别行血培养和用细菌通用引物行16SrRNA基因聚合酶链反应检测,用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物... 目的为早期诊断烧伤脓毒症,探索一种能迅速检测细菌感染的方法。方法按标准收集可疑脓毒症患者39人外周静脉血标本共41份。将每份标本一分为二分别行血培养和用细菌通用引物行16SrRNA基因聚合酶链反应检测,用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物,比较两种方法在检测细菌病原体时的快速性和敏感性,分析血培养及药敏结果。结果16SrRNA基因PCR方法的阳性率(41.16%)是血培养阳性率(21.95%)的近两倍,P<0.05。16SrRNA基因PCR方法出结果需4、5h,血培养需12～24h(多数需2、3d)。9例血培养阳性患者中,8例为单一铜绿假单孢菌感染,1例为单一溶血链球菌感染。结论16SrRNA基因PCR检测细菌感染的方法具有特异性、快速性、敏感性的优点。在该中心,使用抗生素治疗后,引起脓毒症的细菌主要为铜绿假单孢菌,该菌对目前常用广谱抗生素耐药。 展开更多

关键词 烧伤 脓毒症 血培养 细菌 通用引物 16srrna基因 聚合酶链反应

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黄姑鱼创伤弧菌的分离和鉴定 被引量：22

2

作者 马爱敏 闫茂仓 +3 位作者 常维山 陈少波 单乐州 谢起浪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期960-964,共5页

目的从患病黄姑鱼体内分离出致病力较强的菌株L1,人工感染实验证实该菌株为黄姑鱼的病原菌。对该细菌进行了形态、生理生化特性测定和16SrRNA分子鉴定,测定16SrRNA基因序列,分析相关细菌相应序列的同源性,构建了系统进化树。结果表明菌... 目的从患病黄姑鱼体内分离出致病力较强的菌株L1,人工感染实验证实该菌株为黄姑鱼的病原菌。对该细菌进行了形态、生理生化特性测定和16SrRNA分子鉴定,测定16SrRNA基因序列,分析相关细菌相应序列的同源性,构建了系统进化树。结果表明菌株L1与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的亲缘关系最近,具有98.7%的同源性。结合该菌株的生理生化特性,可鉴定菌株L1为创伤弧菌。 展开更多

关键词 黄姑鱼 病原菌 16srrna基因 创伤弧菌

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香蕉枯萎病菌4号小种拮抗细菌的筛选与鉴定 被引量：5

3

作者 周俊辉 游春平 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期278-283,共6页

为了筛选出对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生物防治细菌菌株,从香蕉根际土中分离得到87株细菌菌株,采用平板对峙法,筛选出7株对香蕉枯萎病菌4号生理小种具有拮抗作用的菌株,并进行了抑制枯萎病菌4号小种菌丝生长和孢子萌发的试验。结果显... 为了筛选出对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生物防治细菌菌株,从香蕉根际土中分离得到87株细菌菌株,采用平板对峙法,筛选出7株对香蕉枯萎病菌4号生理小种具有拮抗作用的菌株,并进行了抑制枯萎病菌4号小种菌丝生长和孢子萌发的试验。结果显示,拮抗菌株255、D5、F2、ZK11、214、215、252的发酵液对菌丝具有显著抑制效果,抑菌圈直径17.90～22.88 mm,并能使病菌菌丝产生畸形或泡囊状;对孢子萌发的抑制率64.40%～80.50%。通过对3株抑菌作用不同的拮抗菌株的16S rDNA鉴定和生理生化特性鉴定,结果显示,拮抗菌株255、D5和F2分别被初步鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheni-formis)。 展开更多

关键词 香蕉枯萎病菌4号小种 拮抗细菌 16srrna基因 鉴定

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内蒙古腌制沙葱中乳酸菌分离鉴定 被引量：1

4

作者 曹佳璐 张和平 《食品与发酵科技》 CAS 2015年第4期78-83,共6页

以采集自内蒙古腌制沙葱为研究对象,通过微生物纯培养方法分离培养其中乳酸菌。应用16S r RNA基因序列分析和系统发育关系研究手段,对分离菌株进行鉴定,并与其他地区不同种类发酵蔬菜中分离得到的乳酸菌进行比较。结果表明:共分离得到6... 以采集自内蒙古腌制沙葱为研究对象,通过微生物纯培养方法分离培养其中乳酸菌。应用16S r RNA基因序列分析和系统发育关系研究手段,对分离菌株进行鉴定,并与其他地区不同种类发酵蔬菜中分离得到的乳酸菌进行比较。结果表明:共分离得到6株乳酸菌,包括2株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),2株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp lactis)、1株肠膜明串珠肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides)和1株Lactobacillus diolivorans。相比于其他地区发酵蔬菜中分离所得的乳酸菌,内蒙古腌制沙葱样品分离得到的乳酸菌数量虽少,但也具有特有菌种。 展开更多

关键词 内蒙古腌制沙葱 乳酸菌 分离鉴定 16S r RNA基因序列

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香猪肺源性枯草芽孢杆菌的分离鉴定及体外抑菌作用 被引量：4

5

作者 陈江 冉雪琴 王嘉福 《贵州农业科学》 CAS 2015年第6期108-112,共5页

为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1... 为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。 展开更多

关键词 香猪 肺 枯草芽孢杆菌 致病菌 16srrna基因 体外抑菌

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2株耐铝细菌的脱氮性能研究

6

作者 秦慧 季斌 +2 位作者 王家乐 舒垚荣 杨雨婷 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期214-220,共7页

从湖北省武汉市黄家湖底泥中分离出2株能耐受20mmol/L Al 3+的细菌菌株Q1和Q3,研究其在不同Al 3+浓度下对氨氮和硝氮的去除性能.通过生理生化鉴定、扫描电镜(SEM)形态观察和16SrRNA基因序列分析,确定Q1为鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium sp... 从湖北省武汉市黄家湖底泥中分离出2株能耐受20mmol/L Al 3+的细菌菌株Q1和Q3,研究其在不同Al 3+浓度下对氨氮和硝氮的去除性能.通过生理生化鉴定、扫描电镜(SEM)形态观察和16SrRNA基因序列分析,确定Q1为鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium sp.),Q3为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus).在Al 3+浓度为15mmol/L时,Q1可以去除83.54%的氨氮,Q3可以去除93.03%的硝氮.当Al 3+浓度从0升高到15mmol/L时,Q1对硝氮的去除率下降91.10个百分点,对氨氮的去除率上升30.26个百分点;而Q3对硝氮的去除率不受影响,对氨氮的去除率下降18.25个百分点;2株菌株对总氮的去除率均下降.X射线衍射(XRD)分析结果表明Q1中Al元素存在的主要形态为CaAl2Si2O8·4H2O和(Mg,Fe,Al)3-x(AlSiO5)(OH)4-2x,Q3中Al元素存在的主要形态为Al4(SO4)(OH)10·36H2O和Al0.47Si0.15P0.38O2,说明Al元素可以取代细菌所需的微量元素从而降低酶活性.研究结果可以为细菌耐铝机制的研究和铝盐应用于化学协同脱氮除磷提供理论依据. 展开更多

关键词 耐铝菌株 生物脱氮 鞘氨醇杆菌 蜡状芽孢杆菌 16srrna基因

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煤气化废水驯化后硝化菌群的脱氨性能及群落分析

7

作者 方玉美 程顺利 +3 位作者 黄玉喜 彭子涵 赫玲玲 肖进彬 《环境科技》 2022年第5期20-25,共6页

试验以工业污水处理厂活性污泥为接种物,在培养装置中连续加入质量分数为10%~15%的煤气化废水曝气驯化培养,考察驯化后硝化菌液的脱氨性能,旨在获得耐受高浓度氨氮、耐酚氰的硝化菌群,同时采用16SrRNA基因文库高通量测序对其微生物群落... 试验以工业污水处理厂活性污泥为接种物,在培养装置中连续加入质量分数为10%~15%的煤气化废水曝气驯化培养,考察驯化后硝化菌液的脱氨性能,旨在获得耐受高浓度氨氮、耐酚氰的硝化菌群,同时采用16SrRNA基因文库高通量测序对其微生物群落分析。结果表明,在ρ(NH4+-N)为450 mg/L环境下,该硝化菌液较市售的2种硝化菌剂具有显著优势;经过煤气化废水驯化后的硝化菌液在pH值为8.0,温度为30℃环境条件下,NH4+-N脱除率达97%以上;经测序分析得出,驯化后样品的优势菌群主要有亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、硝基黄杆菌(Diaphorobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)。驯化后硝化菌液中有利于NH4+-N转化,促进酚、烃降解的菌群被富集,可为煤气化废水的工业化处理提供硝化菌剂。 展开更多

关键词 煤气化废水 硝化菌液 脱氨性能 16srrna基因文库高通量测序

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16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌中流行情况调查 被引量：2

8

作者 周勇 张春玲 +2 位作者 陈文举 王燕 张黎明 《中国预防医学杂志》 CAS 2013年第12期933-935,共3页

目的了解台州地区肺炎克雷伯菌临床分离株中16SrRNA甲基化酶流行情况,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法收集台州地区2010年1月~2012年12月住院患者标本中分离的肺炎克雷伯菌共计859株,所有菌株均为非重复株。采用PCR及测序方... 目的了解台州地区肺炎克雷伯菌临床分离株中16SrRNA甲基化酶流行情况,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法收集台州地区2010年1月~2012年12月住院患者标本中分离的肺炎克雷伯菌共计859株,所有菌株均为非重复株。采用PCR及测序方法检测16SrRNA甲基化酶基因。结果 2010-2012年肺炎克雷伯菌对耐氨基糖苷类药物的耐药率逐年升高,经PCR扩增和DNA测序检出16SrRNA甲基化酶基因阳性株分别为2010年（14株,阳性率5.51%）、2011年（18株,阳性率6.22%）、2012年（21株,阳性率6.65%）,检测出的基因型为armA、rmtB两种类型且以rmtB为主,rmtA、rmtC、rmtD、npmA型均阴性。所有16SrRNA甲基化酶基因阳性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物高度耐药（MIC≥256mg/L）。结论肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类耐药率不断增加,16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌中所占比重呈逐年升高的趋势,且16SrRNA甲基化酶基因阳性菌株对氨基糖苷类抗生素高度耐药。检测到16SrRNA甲基化酶基因型rmtB和armA,以rmtB为主。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 16srrna甲基化酶 氨基糖苷类 耐药 基因

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采用PCR与RFLP方法快速诊断细菌感染 被引量：5

9

作者 王蓉美 蔡庆 +4 位作者 高和 隋东江 张虎 马文杰 张波 《中华实用诊断与治疗杂志》 2009年第12期1167-1169,共3页

目的:探讨PCR与RFLP方法快速诊断细菌感染的临床应用价值。方法:选取14种下呼吸道常见病原菌制成DNA模板,用16SrRNA基因保守区建立一对通用引物对其进行PCR扩增,再分别用限制性内切酶HaeⅢ,MnlⅠ,AluⅠ,DdeⅠ和BstBⅠ酶切,根据RFLP分析... 目的:探讨PCR与RFLP方法快速诊断细菌感染的临床应用价值。方法:选取14种下呼吸道常见病原菌制成DNA模板,用16SrRNA基因保守区建立一对通用引物对其进行PCR扩增,再分别用限制性内切酶HaeⅢ,MnlⅠ,AluⅠ,DdeⅠ和BstBⅠ酶切,根据RFLP分析鉴定细菌。结果:所有待测细菌经通用引物PCR扩增和HaeⅢ酶切后的电泳图谱呈现多态性,但有部分细菌图谱相同或相似,再分别用MnlⅠ、AluⅠ、DdeⅠ和BstBⅠ酶切,其产生的酶切图谱各异,可以相互区分,从而鉴定出病原菌。结论:PCR与RFLP分析方法检测病原菌快速简便,是一种具有临床应用价值的快速诊断方法。 展开更多

关键词 细菌 PCR RFLP 16S RRNA基因

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LAMP法用于检测饮用水中细菌污染的研究 被引量：1

10

作者 李兰芳 潘翊 凌东辉 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第3期644-646,共3页

目的:建立一种快速明确饮用水中是否存在细菌污染的核酸检测方法。方法:根据细菌16SrRNA中高度保守的序列设计4条LAMP引物,交由商业公司合成;利用合成好的引物和标准菌株,通过LAMP方法验证引物扩增的效率和特异性,电泳观察扩增结果,并... 目的:建立一种快速明确饮用水中是否存在细菌污染的核酸检测方法。方法:根据细菌16SrRNA中高度保守的序列设计4条LAMP引物,交由商业公司合成;利用合成好的引物和标准菌株,通过LAMP方法验证引物扩增的效率和特异性,电泳观察扩增结果,并比较两种不同细菌基因组DNA提取方法及优化LAMP反应条件。结果:使用设计的引物可以很好的检测出各种标准菌株,而且检测灵敏度达到要求。使用碱裂解的方法可以非常方便的提取出细菌基因组DNA。结论:成功建立了LAMP法检测饮用水中细菌的方法,为饮用水是否存在细菌污染快速检测提供了一种可用的方法。 展开更多

关键词 细菌16srrna 环介导等温扩增 饮用水

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α变形菌纲磁螺菌属TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：1

11

作者 周旋 张宝 +3 位作者 张文炳 王裴 曹虹 赵卫 《热带医学杂志》 CAS 2014年第1期32-36,共5页

目的建立一种快速有效检测环境中q变形菌纲磁螺菌属细菌的方法。方法本研究以α变形菌纲磁螺菌属保守且特异的16SrRNA片段为靶序列，化学合成基因序列，制备重组质粒作为磁螺菌属检测的标准品；用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）... 目的建立一种快速有效检测环境中q变形菌纲磁螺菌属细菌的方法。方法本研究以α变形菌纲磁螺菌属保守且特异的16SrRNA片段为靶序列，化学合成基因序列，制备重组质粒作为磁螺菌属检测的标准品；用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术，针对目的片段基因设计特异性引物和TaqMan荧光探针，进行实时荧光定量PCR检测，运用统计学方法评价该方法的特异性、敏感性及重复性。结果本实验成功构建了质粒PUC19-QC，引物、探针特异性良好，标准曲线在5．10×10^1～5．10×10^7拷贝数之间具有较好的线性关系，相关系数R2=0．999。该法最低可检测到5．10x10个DNA拷贝数，灵敏度明显高于普通PCR；重复性试验表明．荧光定量PCR检测结果Ct值波动范围较小，α值的标准差均小于0．23，表明该法重复性好，可靠性高。析因方差分析表明不同稀释度之间的ct值差异有统计学意义（F=3125．305，P〈0．001），三个批次的再现性良好，差异无统计学意义（F=0．057,P=0．945），而浓度分组与时间之间也无交叉效应（F=0．533，P=0．873）。结论本实验所建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术，能够快速有效地检测仅变形菌纲磁螺菌属细菌，且检测结果稳定，受外界条件如时间、气温等影响小。 展开更多

关键词 趋磁细菌 α变形菌纲磁螺菌属 TAQMAN探针 16srrna基因

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传统乳扇中乳酸菌的多样性研究 被引量：10

12

作者 王昱敬 李伟叶 +2 位作者 张潇俊 郭洁 黄艾祥 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第1期12-18,共7页

采用传统培养方法和16SrRNA基因序列分析法对云南洱源地区传统乳扇中的乳酸菌进行多样性分析。结果表明,从9份传统乳扇样品中分离到32株乳酸菌,通过16S r RNA基因序列分析和系统进化关系将32株乳酸菌鉴定为13株Lactobacllus fermentum... 采用传统培养方法和16SrRNA基因序列分析法对云南洱源地区传统乳扇中的乳酸菌进行多样性分析。结果表明,从9份传统乳扇样品中分离到32株乳酸菌,通过16S r RNA基因序列分析和系统进化关系将32株乳酸菌鉴定为13株Lactobacllus fermentum、10株Lactobacillus reuteri、4株Enterococcus faecium、3株Lactobacillus pontis、1株Enterococcus durans和1株Enterococcus mundtii。Lactobacllus fermentum和Lactobacillus reuteri为传统乳扇中的优势菌种,分别占总分离株的40.63%和31.25%。 展开更多

关键词 乳扇 乳酸菌 多样性分析 16srrna基因

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