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甜蛋白Brazzein基因在番茄果实中的特异表达 被引量:4
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作者 尹涛 卢虹玉 +2 位作者 张上隆 刘敬梅 陈大明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期663-667,共5页
西瓜(Citrullus vulgaris S.)来源的AGPL1启动子在番茄(Lycopersicon esculentum L.)果实中具有较强的特异性驱动功能。将该启动子与甜味蛋白基因Brazzein融合构建植物表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法成功地... 西瓜(Citrullus vulgaris S.)来源的AGPL1启动子在番茄(Lycopersicon esculentum L.)果实中具有较强的特异性驱动功能。将该启动子与甜味蛋白基因Brazzein融合构建植物表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法成功地进行了对番茄的遗传转化,获得转化植株。组织化学法、PCR特异扩增、Southern杂交分析及RT-PCR检测,表明Brazzein基因已整合到转基因番茄植株基因组中并且稳定表达。通过AGPL1果实特异启动子的调控,在不改变果实其他性状的前提下提高了番茄果实甜味品质,并为甜蛋白的生产提供经验。 展开更多
关键词 番茄 甜蛋白基因brazzein 遗传转化 果实特异 AGPL1启动子
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甜味蛋白(brazzein)基因的人工合成及其在大肠杆菌中的重组表达 被引量:3
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作者 刘松财 张永亮 +3 位作者 任晓慧 张明军 柳巨雄 冯立文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期538-540,共3页
根据从西非植物Pentadiplandra brazzeanaBaillion果实中分离的甜味蛋白brazzein的成熟区氨基酸序列,采用大肠杆菌(Escherichia coli)偏爱的密码子,人工合成了5对寡聚核苷酸序列,经体外连接和PCR扩增后得到了187 bp的brazzein的编码序列... 根据从西非植物Pentadiplandra brazzeanaBaillion果实中分离的甜味蛋白brazzein的成熟区氨基酸序列,采用大肠杆菌(Escherichia coli)偏爱的密码子,人工合成了5对寡聚核苷酸序列,经体外连接和PCR扩增后得到了187 bp的brazzein的编码序列,将该序列插入pET-28a载体构建成重组表达载体pET-Br。将pET-Br转化至大肠杆菌BL-21细胞,诱导表达后得到了与预计相对分子质量相同的蛋白。该蛋白约占细菌可溶性蛋白的18.9%,分离纯化后通过蛋白复性,得到有微甜味的产物。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein 重组表达
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乳酸乳球菌表面表达Brazzein甜味蛋白系统的建立 被引量:2
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作者 王长远 许凤 +2 位作者 沈冰蕾 于长青 姚笛 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1170-1173,共4页
参照甜味蛋白Brazzein基因序列,结合乳酸乳球菌的密码子偏嗜性的相关分析,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,将第29位天冬氨酸、31位的组氨酸和第41位的谷氨酸分别突变为赖氨酸、丙氨酸和赖氨酸,以期提高目的蛋白的甜度。采用重叠PCR的... 参照甜味蛋白Brazzein基因序列,结合乳酸乳球菌的密码子偏嗜性的相关分析,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,将第29位天冬氨酸、31位的组氨酸和第41位的谷氨酸分别突变为赖氨酸、丙氨酸和赖氨酸,以期提高目的蛋白的甜度。采用重叠PCR的方法合成目的基因,目的片段亚克隆到pMD18-T载体上。经序列测定分析后,目的片段克隆入分泌表达载体pNZ8112,电转化乳酸乳球菌中,构建成表面展示表达甜味蛋白Brazzein的乳酸乳球菌表达系统。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein 乳酸乳球菌 表面展示
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甜味蛋白Brazzein基因的合成及在毕赤酵母中的表达 被引量:4
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作者 马永平 钟贞 +1 位作者 宋方洲 易发平 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第1期71-74,共4页
用连接PCR合成出甜味蛋白Brazzein的基因,克隆到PUC57质粒中测序后,用EcoRI和NotI双酶切,连接到pPIC9k,电转化毕赤酵母GS115,经MD和MM平板筛选,获得His+Muts重组子。0.5%甲醇诱导表达96h后,对发酵液和细胞进行SDS-PAGE分析,在发酵液中... 用连接PCR合成出甜味蛋白Brazzein的基因,克隆到PUC57质粒中测序后,用EcoRI和NotI双酶切,连接到pPIC9k,电转化毕赤酵母GS115,经MD和MM平板筛选,获得His+Muts重组子。0.5%甲醇诱导表达96h后,对发酵液和细胞进行SDS-PAGE分析,在发酵液中没有蛋白带出现,在细胞裂解液中出现相对分子质量约6.0kd的特异性甜味蛋白条带,与预期的相对分子质量大小相符。用BCA蛋白定量试剂盒测定,Brazzein在毕赤酵母中的表达量可达329mg/L。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein 毕赤酵母
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耐热甜味蛋白Brazzein的特性和化学修饰 被引量:10
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作者 丁鸣 胡忠 《云南植物研究》 CSCD 1996年第2期123-133,共11页
MingandHellekant(1994)从西非洲热带野生植物PentadiplandrabrazzeanaBaill.的果实中,分离出一种甜味蛋白质,命名为brazzein,它是由54个氨基酸残基组成的单链多肽;... MingandHellekant(1994)从西非洲热带野生植物PentadiplandrabrazzeanaBaill.的果实中,分离出一种甜味蛋白质,命名为brazzein,它是由54个氨基酸残基组成的单链多肽;甜度是蔗糖的2000倍。本实验测得Brazzein分子量为6.5kD,等电点为5。Brazzein含有8个半胱氨酸,构成分子内的双硫键;其水溶液经80℃,4h处理,甜味和电泳行为不变。虽然Brazzein的氨基酸序列与芥菜蛋白酶抑制剂MTI-2有高的同源性,但未测出有蛋白酶抑制剂活性。根据氨基酸序列的计算机分析表明:Brazzein是亲水性多肽;二级结构主要是月一折迭和产一转角。蛋白质印迹分析显示,Brazzein抗血清与甜味蛋白curculin,mabinlin和miraculin有强的交叉反应。Brazzein的S-烷基化修饰引起甜味的丧失,同时也丧失与抗血清的免疫反应。Brazzein中赖氨酸ε-氨基的酰化,酪氨酸酚羟基的碘化,组氨酸咪唑基和精氨酸肌基的修饰均导致甜味的丧失或降低;但赖氨酸ε-氨基的甲基化只改变其电泳行为,却不降低甜味。这表明Brazzein分子的表面电荷对于其甜味性质是重? 展开更多
关键词 甜味蛋白质 化学修饰 brazzein 植物蛋白
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Brazzein:一种耐热的甜味蛋白 被引量:5
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作者 任晓慧 张秀文 《生物技术通讯》 CAS 2005年第4期470-471,共2页
Brazzein是从非洲西部野生植物PentadiplandrabrazzeanaBaillon的果实中提取的一种甜味蛋白。Brazzein由54个氨基酸残基组成,Mr为6500,等电点为5,并且具有很好的热稳定性。本文着重概述Brazzein的结构与功能的关系,及其在基因工程中的... Brazzein是从非洲西部野生植物PentadiplandrabrazzeanaBaillon的果实中提取的一种甜味蛋白。Brazzein由54个氨基酸残基组成,Mr为6500,等电点为5,并且具有很好的热稳定性。本文着重概述Brazzein的结构与功能的关系,及其在基因工程中的研究前景。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein
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用重叠PCR合成植物甜蛋白brazzein基因 被引量:3
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作者 陈波 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第4期43-45,共3页
目的:为在泡盛曲霉(Aspergillus awamori)中进行表达,采用重叠PCR合成了植物甜蛋白brazzein基因。方法:根据非洲热带植物Pentadiplandra brazzeana产生的天然甜蛋白brazzein的氨基酸序列及泡盛曲霉糖化酶基因glaA的密码子偏爱性,设计并... 目的:为在泡盛曲霉(Aspergillus awamori)中进行表达,采用重叠PCR合成了植物甜蛋白brazzein基因。方法:根据非洲热带植物Pentadiplandra brazzeana产生的天然甜蛋白brazzein的氨基酸序列及泡盛曲霉糖化酶基因glaA的密码子偏爱性,设计并化学合成了2对3’-端互补的寡聚核苷酸,通过PCR延伸获得2条末端有部分重叠的双链核苷酸片段,再通过重叠PCR扩增,合成了用于泡盛曲霉表达的植物甜蛋白brazzein基因。结果:将brazzein基因克隆到pMD18-T载体,随机挑取6个重组质粒测序,结果1个重组质粒有连续4个碱基缺失,3个重组质粒各有1个碱基缺失,2个重组质粒携带的brazzein基因核苷酸序列完全正确。结论:合成的brazzein基因大小162 bp,编码54个氨基酸,推断的氨基酸序列与Pentadiplandra brazzeana产生的天然brazzein完全一致,表明植物甜蛋白brazzein基因成功合成。 展开更多
关键词 植物甜蛋白 brazzein基因 合成 重叠PCR 泡盛曲霉
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甜味蛋白Brazzein的研究进展 被引量:2
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作者 张连忠 孙涛 高帅 《唐山师范学院学报》 2007年第5期29-32,共4页
Brazzein是从非洲西部野生植物Pentadiplandra brazzeana Baillon的果实中提取的一种甜味蛋白。在所有已知的甜味蛋白质中,Brazzein的分子量最小,水溶性最好,并且具有很好的热稳定性。着重概述了Brazzein的结构及其与功能的关系,并对它... Brazzein是从非洲西部野生植物Pentadiplandra brazzeana Baillon的果实中提取的一种甜味蛋白。在所有已知的甜味蛋白质中,Brazzein的分子量最小,水溶性最好,并且具有很好的热稳定性。着重概述了Brazzein的结构及其与功能的关系,并对它在基因工程方面的研究进展进行了详细的叙述。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein
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甜味蛋白Brazzein的特性及其应用 被引量:1
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作者 王长远 朴范泽 +1 位作者 张丽萍 刘松财 《农产品加工(下)》 2007年第11期18-21,30,共5页
甜味蛋白是一类高甜度低热量的天然甜味剂。介绍甜味蛋白Brazzein的基本性质、结构与功能的关系,并着重概述了基因工程技术开发研究甜蛋白的进展及其应用前景。
关键词 甜味蛋白 brazzein 应用
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Brazzein基因的合成及pGAPZαA-Bra表达载体的构建
10
作者 王长远 张丽萍 +1 位作者 刘松财 汤丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第15期6230-6232,共3页
[目的]为Brazzein基因在酵母SMD1168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成Brazzein基因,将其连接到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-Bra。分别用XhoI和XbaI限制内切酶对克隆质粒pMD18-T-Bra和酵母表达载体pGAPZ... [目的]为Brazzein基因在酵母SMD1168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成Brazzein基因,将其连接到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-Bra。分别用XhoI和XbaI限制内切酶对克隆质粒pMD18-T-Bra和酵母表达载体pGAPZαA进行酶切,并在T4DNA连接酶作用下,将回收的目的基因连接到pGAPZαA载体上,构建重组质粒pGAPZαA-Bra。[结果]通过PCR扩增获得了约188 bp的Brazzein类似物的编码序列,将其克隆到pMD18-T质粒,用XhoI和XbaI双酶切后,连接到pGAPZαA载体,成功构建了重组表达载体pGAPZαA-Bra。Brazzein基因其中各碱基未发生突变,整个表达载体阅读框正确无误。[结论]利用基因工程的方法生产Brazzein是可行的。 展开更多
关键词 brazzein 克隆 pGAPZαA-Bra表达载体
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转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
11
作者 王春生 李咏乐 +2 位作者 仇雨歌 朴善花 安铁洙 《安徽农业科学》 CAS 2014年第24期8099-8101,8166,共4页
[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞... [目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。 展开更多
关键词 山羊 乳腺特异表达载体 brazzein基因 转基因细胞
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甜味蛋白Brazzein基因合成及其在酵母中表达的初步研究
12
作者 张丽萍 王长远 刘松财 《农产品加工(下)》 2008年第10期4-7,共4页
采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra... 采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入Pichia.pastoris SMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12g/L。 展开更多
关键词 brazzein基因 pGAP ZαA表达载体 毕赤酵母
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甜味蛋白Brazzein基因酵母表达系统的建立 被引量:5
13
作者 史勇 张明军 +3 位作者 张英 李莉 汤丹 刘松财 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期43-46,共4页
根据甜味蛋白Brazzein基因成熟区的氨基酸序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性以及Brazzein蛋白质结构的相关研究,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,使表达的目的蛋白中包含3个突变氨基酸(29Asp→Lys,31His→Ala,41Glu→Lys)。采用重叠PCR(S... 根据甜味蛋白Brazzein基因成熟区的氨基酸序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性以及Brazzein蛋白质结构的相关研究,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,使表达的目的蛋白中包含3个突变氨基酸(29Asp→Lys,31His→Ala,41Glu→Lys)。采用重叠PCR(SOE-PCR)合成目的基因并克隆到pMD18-T载体,经测序鉴定,序列正确的质粒用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切。将回收得到的目的基因连接到经同样双酶切处理的pGAPZαA载体上,经PCR、酶切和测序鉴定,证明已成功构建pGAPZαA-Bra真核表达载体。将构建好的重组载体pGAPZαA-Bra用AvrⅡ线性化,电转进入巴斯德毕赤酵母中。筛选ZeocinTM阳性克隆菌,进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明蛋白表达成功。 展开更多
关键词 甜味蛋白 brazzein基因 pGAPZαA-Bra 巴斯德毕赤酵母
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植物甜蛋白brazzein基因的克隆与表达 被引量:6
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作者 李广林 郭蔼光 范三红 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第7期1271-1274,共4页
根据大肠杆菌偏爱的密码子,利用PCR技术体外人工合成brazzeincDNA序列,并将其克隆至原核高效表达载体pET30a(+)中。重组载体pET30a(+)-brazzein转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果证明pET30a(+)-brazzein在大肠杆菌... 根据大肠杆菌偏爱的密码子,利用PCR技术体外人工合成brazzeincDNA序列,并将其克隆至原核高效表达载体pET30a(+)中。重组载体pET30a(+)-brazzein转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果证明pET30a(+)-brazzein在大肠杆菌中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白25%左右。 展开更多
关键词 甜蛋白 brazzein 基因克隆 基因表达
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乳腺特异的甜味蛋白Brazzein基因真核表达载体的构建 被引量:2
15
作者 安辰瑞 李咏乐 +3 位作者 詹俐楠 王春生 朴善花 安铁洙 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期29-32,共4页
为了建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法,研究在人工合成甜味蛋白Brazzein基因的基础上,利用乳腺特异表达的pBC-1载体,构建Brazzein基因的真核表达载体。结果表明:所合成的Brazzein基因与GenBank中Brazzein序列的同源性为100%... 为了建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法,研究在人工合成甜味蛋白Brazzein基因的基础上,利用乳腺特异表达的pBC-1载体,构建Brazzein基因的真核表达载体。结果表明:所合成的Brazzein基因与GenBank中Brazzein序列的同源性为100%,构建的克隆载体STP-pMD18-Simple正确;将甜味蛋白Brazzein基因与pBC-1载体连接后,成功构建甜味蛋白Brazzein基因的乳腺特异性表达载体STP-pBC-1。 展开更多
关键词 乳腺 甜味蛋白 brazzein基因 真核表达载体
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人β防御素3和植物des-pGLu1-brazzein融合蛋白表达菌的诱导条件优化及其活性分析 被引量:5
16
作者 李春丽 徐雪丽 +1 位作者 郑振宇 赵卫东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期485-490,共6页
对人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein嵌合基因的工程菌株BL-pET-hBD3-Bra的IPTG诱导表达条件进行了研究,同时对所表达的目的蛋白进行了纯化和活性分析。IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示:... 对人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein嵌合基因的工程菌株BL-pET-hBD3-Bra的IPTG诱导表达条件进行了研究,同时对所表达的目的蛋白进行了纯化和活性分析。IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示:所取的IPTG浓度(0.2~1.0mmol/L)对菌株生长和目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05);菌株的生物量随着诱导时间的延长而增加,6h优于4h(P<0.01),但是蛋白的表达量无明显增加(P>0.05);其中温度是重要的影响因素,在30℃诱导时,目的蛋白的表达量占总蛋白的35%左右。进一步的研究表明,菌株在30℃~32℃生长,在30℃诱导最优。对目的蛋白的活性分析表明,所得到的hBD3-Bra融合蛋白有甜味,其甜度大约是蔗糖的200倍,但是其杀菌活性很弱,经凝血酶切割后,des-pGlu1-Brazzein的甜度大大提高,大约为蔗糖甜度的600倍,重组hBD3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性。 展开更多
关键词 人Β防御素3 植物甜蛋白 大肠杆菌 高效表达 优化
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乳糖诱导植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein在大肠杆菌中的表达 被引量:5
17
作者 李春丽 陈其新 何国庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1021-1025,共5页
构建了植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein高效表达的工程菌株,对其乳糖诱导条件进行了优化。乳糖浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示,高浓度乳糖对菌株生长有抑制作用(P<0.01),对目的蛋白的表达无显著影响(... 构建了植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein高效表达的工程菌株,对其乳糖诱导条件进行了优化。乳糖浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示,高浓度乳糖对菌株生长有抑制作用(P<0.01),对目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05),时间延长对于菌株生长有利(P<0.01),对目的蛋白的表达因温度不同而不同。进一步的研究表明,以0.5%乳糖在28℃~30℃诱导4h对菌株生长和目的蛋白的表达有利,目的蛋白的表达量可达20%左右。 展开更多
关键词 植物甜蛋白 大肠杆菌 乳糖 优化
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利用毕赤酵母表达植物甜蛋白(brazzein)的初步研究 被引量:12
18
作者 赵红玲 陈劲春 《北京化工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期14-16,20,共4页
实验将含有Brazzein基因的pPIC9K穿梭质粒通过电导入巴斯德比赤酵母(Pichiapastori)GS115中,并从22个阳性克隆中筛选出His+Muts高拷贝转化子2个,经诱导表达,产物进行Tricine SDS PAGE电泳鉴定,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,又经小... 实验将含有Brazzein基因的pPIC9K穿梭质粒通过电导入巴斯德比赤酵母(Pichiapastori)GS115中,并从22个阳性克隆中筛选出His+Muts高拷贝转化子2个,经诱导表达,产物进行Tricine SDS PAGE电泳鉴定,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,又经小试(5~10L罐)蛋白产量可达385mg/L。利用大孔树脂D152初步分离,得到有微甜味的产物。进一步纯化后获得了1D NMR图谱。 展开更多
关键词 甜蛋白 大孔吸附树脂 毕赤酵母
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甜味蛋白Brazzein及其基因工程 被引量:2
19
作者 郑伟伟 赵萌 刘波 《中国调味品》 CAS 北大核心 2018年第3期181-184,共4页
Brazzein是一种天然植物甜味蛋白,具有甜度高、能量低、稳定性好等优点。文章综述了其来源、生化特性和其甜味决定因素,并对它在基因工程方面的研究进展进行了综述。
关键词 brazzein 甜味蛋白 生化特性 基因工程
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植物Brazzein基因的合成及其克隆 被引量:1
20
作者 李春丽 何国庆 《河南大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第4期56-59,共4页
根据从西非植物PentadiplandrabrazzeanaBaillion果实中分离的甜蛋白Brazzein(Bra)的成熟区氨基酸序列,按照酵母密码子偏好人工合成了4对末端具粘合位点的寡聚核苷酸序列,经连接、PCR扩增后得到了179bp的Brazzein类似物的编码序列,插入... 根据从西非植物PentadiplandrabrazzeanaBaillion果实中分离的甜蛋白Brazzein(Bra)的成熟区氨基酸序列,按照酵母密码子偏好人工合成了4对末端具粘合位点的寡聚核苷酸序列,经连接、PCR扩增后得到了179bp的Brazzein类似物的编码序列,插入到pPIC9K载体构建成重组表达载体pPIC9K Bra. 展开更多
关键词 甜蛋白 基因合成 克隆
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