位点特异性PCR鉴别水牛角及其伪品

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作者 张竞研 谭冰艳 +5 位作者 康安 王协和 李松 陈盛君 刘睿 段金廒 《中国现代中药》 CAS 2024年第9期1462-1469,共8页

目的:开发一种针对水牛角的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别水牛角与其他混伪品。方法:通过比对水牛、黄牛、牦牛、山羊等动物的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列差异,筛选水牛的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点... 目的:开发一种针对水牛角的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别水牛角与其他混伪品。方法:通过比对水牛、黄牛、牦牛、山羊等动物的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列差异,筛选水牛的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计出相应的鉴别引物,并对影响PCR体系的相关条件进行优化,考察验证方法的耐受性和适用性。结果:PCR条件为扩增体系20μL、退火温度60℃、循环次数32次、DNA模板量为100 ng、10μmol·L^(-1)正反引物对各0.8μL时,使用设计的鉴别引物SN1对水牛角进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后出现约358 bp的特异性条带,其他物种的样品均无条带出现。结论:该PCR鉴别方法特异性好,能迅速、准确地鉴别水牛角和其他常见动物角类样品,为水牛角的真伪鉴别提供参考。 展开更多

关键词 水牛角 聚合酶链式反应 鉴别

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水牛角含巯基类成分解热效应评价研究

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作者 黄思莹 冯旗园 +5 位作者 包旺林 黄潇正 武文星 赵明 段金廒 刘睿 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期268-277,共10页

目的制备水牛角含巯基类成分(-SH active fractions,SHF),评价其解热效应。方法通过十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇(SDS-DTT)联合提取法制备水牛角SHF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)浓度;基于nano LC-MS/MS分析表征水牛角SHF物质组成。... 目的制备水牛角含巯基类成分(-SH active fractions,SHF),评价其解热效应。方法通过十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇(SDS-DTT)联合提取法制备水牛角SHF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)浓度;基于nano LC-MS/MS分析表征水牛角SHF物质组成。采用脂多糖(LPS)建立大鼠发热模型评价水牛角SHF解热活性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒测定血浆中前列腺素E 2(PGE 2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、PGE 2、TNF-α的水平;采用非靶向代谢组学的方法,探究水牛角SHF对发热大鼠血浆代谢物干预情况。结果SDS-DTT联合提取法可有效制备水牛角SHF,其中主要成分为含丰富半胱氨酸残基(Cysteine,Cys)的Ⅰ型、Ⅱ型角蛋白、角蛋白相关蛋白等,SHF的-SH占蛋白质比例较水牛角水提液提高了约20倍。发热大鼠给予水牛角SHF 0.5 h后大鼠体温显著下降(P<0.01),且解热效应持续4.5 h;同时显著降低血浆及下丘脑PGE 2、IL-1β、TNF-α、cAMP等水平。从空白组与模型组血浆样本中共鉴定出137个潜在差异代谢物,水牛角SHF可回调其中31个代谢物,包括溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、甘油三酯、磷脂酰胆碱等,主要涉及甘油磷脂代谢通路。结论水牛角SHF解热效应确切,给药剂量为水提液的1/10即可显示与其相当的解热效应,为水牛角清热功效物质基础研究提供了方向和依据。 展开更多

关键词 水牛角 含巯基类 解热 抗炎 非靶向代谢组

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水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制 被引量：3

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作者 李海霞 周民 +2 位作者 周有君 常依 王雅露 《中医药导报》 2023年第11期30-34,共5页

目的:探讨水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、出血模型组、云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组、水牛角低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用干姜水煎液结合5... 目的:探讨水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、出血模型组、云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组、水牛角低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用干姜水煎液结合5%乙醇给药复制血热出血模型。造模6 h后,云南白药组大鼠予云南白药溶液(0.5 g/kg)灌胃,水牛角高、中、低剂量组大鼠分别灌胃高(36 g/kg)、中(18 g/kg)、低(9 g/kg)剂量水牛角水煎液,正常对照组、出血模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。1次/d,连续14 d。末次给药1 h后检测各组大鼠体质量、饮水量、摄食量、尿量、粪便含水量、体质量增长率、肛温;腹主动脉取血检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白降解产物(FDP)、抗凝血酶(AT);HE染色观察肺、胃组织病理学变化。结果:出血模型组大鼠肛温高于正常对照组(P<0.01),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均低于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.05),体质量增长率高于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.01或P<0.05),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均高于出血模型组(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠PT、APTT均低于正常对照组,FIB、TT均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);云南白药组大鼠TT、FIB均低于出血模型组(P<0.05);水牛角高、中剂量组大鼠PT、APTT均高于出血模型组,FIB、TT均低于出血模型组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠AT、FDP高于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠FDP低于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠AT、FDP均低于出血模型组(P<0.01)。正常对照组大鼠肺、胃组织基本正常;出血模型组大鼠肺、胃组织均出现炎症细胞浸润和出血变化;与出血模型组比较,云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组肺、胃组织的病理变化均有不同程度减轻;水牛角低剂量组大鼠以上各项指标和组织病理改变不明显。结论:水牛角可能通过调节凝血系统、纤溶系统,改善肺、胃组织病理变化而发挥止血作用。 展开更多

关键词 血热出血 水牛角 凝血功能 大鼠

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OPA-FMOC联用柱前衍生HPLC法测定水牛角药材中氨基酸含量 被引量：5

4

作者 裴玉 应旭辉 +3 位作者 谢媛媛 罗国安 张金莲 王义明 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期58-63,80,共7页

通过建立HPLC分析方法,测定水牛角药材中氨基酸,为水牛角药材质量标准的制订提供科学依据.通过OPA-FMOC柱前衍生化法,建立了同时测定水牛角药材中18种常见氨基酸的液相方法.色谱柱为Prevail-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相A为0.... 通过建立HPLC分析方法,测定水牛角药材中氨基酸,为水牛角药材质量标准的制订提供科学依据.通过OPA-FMOC柱前衍生化法,建立了同时测定水牛角药材中18种常见氨基酸的液相方法.色谱柱为Prevail-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相A为0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（5mL/L四氢呋喃,40%氢氧化钠溶液调pH7.2）,流动相B为0.025mol/L磷酸二氢钠溶液∶甲醇∶乙腈（体积比为500∶350∶150,pH 7.2）,梯度洗脱;流速0.8mL/min;柱温25℃;检测波长：0~51min为338nm,51min以后为262nm.所测18种氨基酸在各自的高、低浓度范围内线性关系良好;10个批次水牛角药材中,氨基酸平均含量为60%.所建立的氨基酸定量方法结果准确可靠,重现性好,为控制水牛角药材的质量控制,制订水牛角药材质量标准具有参考意义. 展开更多

关键词 高效液相色谱 水牛角药材 柱前衍生化法 氨基酸

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牦牛角等6种角类药超细粉对发热家兔的影响 被引量：13

5

作者 胡春萍 蒋加进 +2 位作者 石磊 黄厚才 王志刚 《医学动物防制》 2006年第4期235-238,共4页

目的:家兔经耳缘静脉注射(iv)过期三联疫苗-NS.稀释液,造成发热模型。造模后1h,灌胃给予6种角类动物药(牦牛角、水牛角、藏羚羊角、羚羊角、广角、犀角)超细粉后,测定给药后不同时间点的直肠温度,结果表明,牦牛角、水牛角、藏羚羊角、... 目的:家兔经耳缘静脉注射(iv)过期三联疫苗-NS.稀释液,造成发热模型。造模后1h,灌胃给予6种角类动物药(牦牛角、水牛角、藏羚羊角、羚羊角、广角、犀角)超细粉后,测定给药后不同时间点的直肠温度,结果表明,牦牛角、水牛角、藏羚羊角、羚羊角、广角、犀角具有一定的解热退热作用。 展开更多

关键词 牦牛角 水牛角 藏羚羊角 羚羊角 广角 犀角 退热作用

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水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用研究 被引量：10

6

作者 李宝国 黄丽华 +2 位作者 杜雪 曲东平 张孝卫 《中国当代医药》 2009年第13期16-17,共2页

目的:研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。方法:通过观察小鼠对戊巴比妥钠催眠作用的反应、对脂多糖引起死亡的抵抗及用药后小鼠凝血时间、自发活动和对抗感染的影响和作用,研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。结果... 目的:研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。方法:通过观察小鼠对戊巴比妥钠催眠作用的反应、对脂多糖引起死亡的抵抗及用药后小鼠凝血时间、自发活动和对抗感染的影响和作用,研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。结果:与生理盐水(NS)对照组比较,相对分子质量<3kD和10～30kD的酶解液有明显的镇静作用(P<0.01);相对分子质量<3kD酶解液有显著的抵抗脂多糖引起的死亡作用(P<0.05);相对分子质量>30kD酶解液有明显的止血作用(P<0.01);相对分子质量>5但<10kD酶解液有明显的抑制自发活动作用(P<0.01);相对分子质量>5但<10kD组和10～30kD组有明显的提高抗细菌感染作用(P<0.01)。结论:水牛角不同相对分子质量酶解液,药理作用不同。 展开更多

关键词 水牛角 相对分子质量 酶解液 药理作用

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凉血散血方对免疫性血小板减少症模型大鼠CD40L表达的影响 被引量：5

7

作者 张旻昱 彭素娟 +5 位作者 杨琳 聂甜 李仕能 胡妮 谭晶 蒋文明 《湖南中医药大学学报》 CAS 2013年第11期32-35,共4页

目的探讨凉血散血方对免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)模型大鼠白细胞抗原分化群40分子配体(cluster of differentiation 40 ligand,CD40L)表达变化与作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组、凉血散... 目的探讨凉血散血方对免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)模型大鼠白细胞抗原分化群40分子配体(cluster of differentiation 40 ligand,CD40L)表达变化与作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组、凉血散血方高、中、低剂量组,用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)法造ITP模型,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠外周血CD40L的变化,造模前后及给药后检测ITP模型大鼠血小板数值变化。结果模型组CD40L水平明显高于空白组,血小板计数明显低于空白组,两组相比较差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组CD40L水平降低(P<0.01和P<0.05),血小板数值升高(P<0.01);中药高剂量组与强的松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论凉血散血方能使ITP模型大鼠外周血小板破坏减少,其作用机制可能与下调CD40L水平有关。 展开更多

关键词 免疫性血小板减少症 凉血散血方 白细胞抗原分化群40 分子配体 大鼠 水牛角 生地黄

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水牛角治头痛作用初探 被引量：7

8

作者 蔡之幸 王重卿 《上海中医药杂志》 2016年第9期69-71,共3页

总结水牛角治疗头痛的作用机制与临床配伍运用。从中医辨证论治及现代医学药理两方面,对水牛角治疗头痛的疗效进行初步探讨。水牛角治疗头痛的机制为抗炎镇痛镇静、抑制过度免疫、维持脑血循环通畅、保护脑组织等。

关键词 水牛角 头痛 中医

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正交实验优选水牛角酶解的提取工艺研究 被引量：3

9

作者 李宝国 杜雪 张孝卫 《中国当代医药》 2009年第14期24-25,共2页

目的:研究水牛角酶解的最佳提取工艺。方法:以蛋白质含量为指标,通过正交实验筛选水牛角的最佳酶解提取条件。结果:水牛角最佳酶解工艺为:胃蛋白酶,pH=2,加酶量700U/g,温度39℃,时间4h。结论:正交实验确定的条件可较好地应用于水牛角的... 目的:研究水牛角酶解的最佳提取工艺。方法:以蛋白质含量为指标,通过正交实验筛选水牛角的最佳酶解提取条件。结果:水牛角最佳酶解工艺为:胃蛋白酶,pH=2,加酶量700U/g,温度39℃,时间4h。结论:正交实验确定的条件可较好地应用于水牛角的酶解提取。 展开更多

关键词 正交实验 水牛角 酶解 提取工艺

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基于网络药理学的“水牛角-珍珠母”药对作用机制研究 被引量：13

10

作者 吴嘉瑞 蔺梦娟 刘鑫馗 《中国医院用药评价与分析》 2018年第1期18-22,29,共6页

目的:基于网络药理学,探讨"水牛角-珍珠母"药对的功效物质基础和配伍机制。方法:依托中药系统药理学分析平台检索水牛角和珍珠母的化学成分、作用靶点及相关疾病等信息,构建"药物-成分-靶标-疾病"网络,进行基因本体... 目的:基于网络药理学,探讨"水牛角-珍珠母"药对的功效物质基础和配伍机制。方法:依托中药系统药理学分析平台检索水牛角和珍珠母的化学成分、作用靶点及相关疾病等信息,构建"药物-成分-靶标-疾病"网络,进行基因本体(gene ontology,GO)分类富集分析、基于京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)的通路富集分析,研究"水牛角-珍珠母"药对的作用机制。结果:"药物-成分-靶标-疾病"网络包含2个药物,6种活性成分,相应靶标765个,相关疾病595种。关键靶点涉及前列腺素内过氧化物合酶2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ等,关键疾病涉及精神分裂症、阿尔茨海默病和炎症等。GO富集分析包含GO条目1 285个,其中生物过程相关条目973个,主要涉及小分子代谢、细胞代谢等方面;分子功能相关条目196个;细胞组成相关条目116个。KEGG通路富集分析包含KEGG通路16条,主要涉及神经活性受体-配体相互作用、PPAR信号通路和谷氨酸能突触等。结论:本研究结果初步验证了"水牛角-珍珠母"药对的基本药理作用及其机制,并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础。 展开更多

关键词 水牛角 珍珠母 网络药理学 靶点 基因本体 信号通路

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复方水牛角提取物镇痛、抗炎作用的实验研究 被引量：8

11

作者 曹雯 许道龙 +2 位作者 吴万哈 徐婷 李铁军 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2011年第2期103-106,共4页

目的:研究复方水牛角水提取物和醇提取物对尿酸钠所致大鼠急性痛风性关节炎(AGA)、冰醋酸致小鼠疼痛及二甲苯致小鼠耳壳炎症的作用。方法:采用2.5%尿酸钠溶液造成大鼠AGA模型,以0.6%冰醋酸溶液致小鼠疼痛扭体模型,以二甲苯造成小鼠耳壳... 目的:研究复方水牛角水提取物和醇提取物对尿酸钠所致大鼠急性痛风性关节炎(AGA)、冰醋酸致小鼠疼痛及二甲苯致小鼠耳壳炎症的作用。方法:采用2.5%尿酸钠溶液造成大鼠AGA模型,以0.6%冰醋酸溶液致小鼠疼痛扭体模型,以二甲苯造成小鼠耳壳急性炎症模型。分别以大鼠的踝关节肿胀度、血清尿酸含量,小鼠的扭体次数和耳廓肿胀度为指标,测定复方水牛角水提取物和醇提取物的镇痛、抗炎活性。结果:复方水牛角水提取物和醇提取物对尿酸钠所致AGA大鼠踝关节肿胀有明显抑制作用,在造模24 h时模型对照组关节肿胀率为(64.49±9.48)%,复方水牛角水提取物和醇提取物高剂量组关节肿胀率分别为(41.95±11.18)%和(42.32±6.85)%(P<0.01),并能明显降低血尿酸水平。复方水牛角水提取物和醇提取物可减少冰醋酸所致小鼠扭体次数,减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度。结论:复方水牛角提取物具有镇痛、抗炎作用,其机制可能与降低血清中尿酸水平有关。 展开更多

关键词 水牛角 抗炎作用 镇痛作用 痛风性关节炎 尿酸钠

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羚羊感冒胶囊中掺杂水牛角粉的鉴别 被引量：4

12

作者 金卓 丁晴 《安徽医药》 CAS 2007年第6期521-522,共2页

目的建立羚羊感冒胶囊中掺杂水牛角粉的检测方法。方法采用显微鉴别法鉴定其显微特征。结果羚羊角粉与水牛角粉显微特征差异显著,可用于羚羊感冒胶囊真伪鉴别。结论该方法简单、易行。

关键词 羚羊感冒胶囊 羚羊角 水牛角 显微鉴别

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针药结合对脑梗死大鼠氧化应激、炎症反应及血管生成的影响 被引量：5

13

作者 赵辉 杨晓静 +4 位作者 程芳 沈菲 张静 高宏波 袁玉欣 《广州中医药大学学报》 CAS 2022年第5期1116-1122,共7页

【目的】观察电针联合大黄、水牛角煎液对脑梗死大鼠的治疗机制。【方法】将40只大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、电针组、中药组、针药组,每组8只。除假手术组,其他各组大鼠采用线栓法建立脑梗死模型,而假手术组分离动脉后不结扎... 【目的】观察电针联合大黄、水牛角煎液对脑梗死大鼠的治疗机制。【方法】将40只大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、电针组、中药组、针药组,每组8只。除假手术组,其他各组大鼠采用线栓法建立脑梗死模型,而假手术组分离动脉后不结扎。建模成功后,电针组针刺百会、足三里、水沟穴,中药组灌胃5 g/kg大黄、水牛角煎剂,针药组联合给予电针组与中药组的干预方法,模型组与假手术组灌胃等体积的生理盐水,治疗14 d。干预第1、7、14天评估大鼠神经功能。末次治疗后,采用硫代巴比妥酸(TBA)方法、黄嘌呤氧化酶法、比色法分别对应检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等氧化应激指标水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β等炎症指标水平,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法检测脑组织神经细胞凋亡水平,采用蛋白免疫印迹法检测脑组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达水平,采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测脑组织VEGF、b FGF mRAN表达水平。【结果】干预第1、7、14天:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分升高(P<0.05);与模型组比较,电针组、中药组、针药组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。末次治疗后:与假手术组比较,模型组大鼠血清MDA、TNF-α及IL-1β水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,神经细胞凋亡率升高,VEGF、bFGF的蛋白、m RNA表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,电针组、中药组、针药组大鼠血清MDA、TNF-α及IL-lβ水平降低,SOD、GSH-Px水平降低,神经细胞凋亡率降低,VEGF、bFGF的蛋白、mRNA表达水平升高(均P<0.05)。针药组的作用效果均优于电针组、中药组(P<0.05)。【结论】电针联合大黄、水牛角煎液可通过降低氧化应激与炎症反应,进而调节血管生成,从而发挥保护脑梗死大鼠神经功能的作用。 展开更多

关键词 电针 大黄 水牛角 脑梗死 氧化应激 炎症反应 血管生成 大鼠

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清开灵注射液药用水牛角中总氮含量的测定及其HPLC指纹图谱的建立 被引量：4

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作者 姜国志 赵伯友 孙胜斌 《河北化工》 2011年第4期25-28,共4页

建立了水牛角的质量控制方法,提高了清开灵注射液药用水牛角的内控标准。将水牛角用Ba(OH)2溶液水解后,采用氮测定法和HPLC法对10批水牛角水解液进行总氮和指纹图谱测定。结果表明,总氮测定中,精密度试验RSD为1.30%,重现性试验RSD为1.2... 建立了水牛角的质量控制方法,提高了清开灵注射液药用水牛角的内控标准。将水牛角用Ba(OH)2溶液水解后,采用氮测定法和HPLC法对10批水牛角水解液进行总氮和指纹图谱测定。结果表明,总氮测定中,精密度试验RSD为1.30%,重现性试验RSD为1.25%,方法稳定性RSD为1.08%,水牛角水解液中总氮含量均值为76.92 mg/mL,RSD为5.43%,各批间总氮含量有一定差异。HPLC指纹图谱测定通过了方法学考察,建立了标准指纹图谱。10批样品相似度较好。通过建立总氮和指纹图谱的检测方法,提高了水牛角的内控质量标准,为减少清开灵注射液的批件差异打下了基础,同时为其它中药材的质量控制提供了思路。 展开更多

关键词 清开灵注射液 水牛角 总氮 指纹图谱

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水牛角蜂房汤治疗寻常型银屑病血热证验案 被引量：2

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作者 郭兰天 于军 《亚太传统医药》 2021年第4期94-96,共3页

总结皮肤性病科专家于军教授治疗寻常型银屑病血热证的经验,阐述于军教授对寻常型银屑病的证候、病因、病机等的独到见解,以及于军教授治疗寻常型银屑病血热证的自拟方即"水牛角蜂房汤",并附应用水牛角蜂房汤治疗寻常型银屑... 总结皮肤性病科专家于军教授治疗寻常型银屑病血热证的经验,阐述于军教授对寻常型银屑病的证候、病因、病机等的独到见解,以及于军教授治疗寻常型银屑病血热证的自拟方即"水牛角蜂房汤",并附应用水牛角蜂房汤治疗寻常型银屑病血热证验案一则,以期为同道提供参考与借鉴。 展开更多

关键词 名医经验 寻常型银屑病 血热证 白疕 水牛角蜂房汤

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基于DNA指纹图谱的水牛角真伪及掺杂鉴别方法研究

16

作者 熊辕 陈天韵 +2 位作者 张恬 田娜 蒋超 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1826-1833,共8页

是否存在掺杂是中药鉴定的难点问题。水牛角主要以水牛角丝或水牛角粉2种形态流通于药材市场,缺乏明显的鉴定特征,存在掺杂风险。然而目前水牛角的掺杂鉴定方法缺失。为解决中药水牛角的真伪及掺杂问题,控制药材水牛角的质量,保证临床... 是否存在掺杂是中药鉴定的难点问题。水牛角主要以水牛角丝或水牛角粉2种形态流通于药材市场,缺乏明显的鉴定特征,存在掺杂风险。然而目前水牛角的掺杂鉴定方法缺失。为解决中药水牛角的真伪及掺杂问题,控制药材水牛角的质量,保证临床用药的真实性。使用DNA指纹图谱对来自药材企业和药材市场的43批样品进行鉴定,筛选出可鉴定水牛角和牦牛角的荧光DNA指纹图谱扩增引物,利用荧光毛细管分型技术获得水牛角的DNA指纹图谱。并检测了荧光毛细管分型技术对不同掺杂比例的鉴别效果。筛选出了2对可区分水牛角和牦牛角的荧光STR分型引物16Sa和CRc,建立DNA指纹图谱鉴别方法,牦牛角16Sa迁移峰为223.4~223.9 bp、水牛角为225.5~226.1 bp,牦牛角CRc迁移峰为518.8~524.8 bp、水牛角为535.9~542.5 bp。通过迁移峰的峰高可对掺伪比例在50%以下的掺杂品进行初步定量,定量结果与掺入比例相似。该研究建立了一种简单快捷,可用于中药水牛角及其掺杂品的通用DNA指纹图谱鉴别方法,能够实现对药材水牛角鉴定的同时对掺杂品进行半定量。 展开更多

关键词 水牛角 掺杂 DNA指纹图谱 STR分型 分子鉴别 动物药

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水牛角中含巯基肽类成分的富集及抗氧化、抗炎活性研究 被引量：3

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作者 汤佳瑶 黄思莹 +5 位作者 武文星 朱悦 郭盛 赵明 段金廒 刘睿 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2741-2749,共9页

目的富集水牛角Bubali Cornu中含巯基肽类成分(thiols-rich peptide fractions,SHPF)并探讨其抗氧化、抗炎活性。方法通过巯基亲和树脂Thiopropyl Sepharose 6B从水牛角提取液中富集得到SHPF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)含量;应用... 目的富集水牛角Bubali Cornu中含巯基肽类成分(thiols-rich peptide fractions,SHPF)并探讨其抗氧化、抗炎活性。方法通过巯基亲和树脂Thiopropyl Sepharose 6B从水牛角提取液中富集得到SHPF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)含量;应用单因素实验法优选富集工艺;基于Nano LC-MS/MS技术鉴定SHPF。体外通过H_(2)O_(2)诱导小鼠脑微血管内皮细胞bEnd3氧化损伤,采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测SHPF抗氧化活性;通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症损伤,采用实时荧光定量PCR法测定炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌。结果优化SHPF富集工艺为上样量10μmol游离-SH、吸附时间1 h、洗脱剂为含β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-Me)洗脱剂。从水牛角富集液中共鉴定到704条肽段,其中154条含半胱氨酸(cysteine,Cys)肽段,占总肽段的21.9%,主要来源于角蛋白和角蛋白相关蛋白。体外细胞实验结果表明,SHPF能够提高氧化损伤bEnd3细胞的存活率,同时降低其LDH的泄露,并减少炎症损伤RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌。结论采用优选富集工艺能明显提高SHPF的富集效率,SHPF具有良好抗氧化和抗炎活性,为水牛角“清热解毒”功效物质基础的研究提供了研究思路和方向。 展开更多

关键词 水牛角 含巯基肽类 富集 抗氧化 抗炎 Nano LC-MS/MS技术 乳酸脱氢酶 实时荧光定量PCR法 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 角蛋白 清热解毒

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超高效液相色谱-串联质谱法检测水牛角特征肽 被引量：12

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作者 刘睿 赵明 +3 位作者 刘晓 杨超 陈盛君 段金廒 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1279-1285,共7页

该文应用超高效液相色谱-串联质谱分析及数学集合理论寻找水牛角特征肽。首先,nano LC-LTQ-Obitrap-MS应用于水牛角、牦牛角、山羊角及猪蹄甲经胰蛋白酶酶切后的多肽组轮廓分析,其次,采用数学集合方法分析不同样品肽类组成的关系,当肽... 该文应用超高效液相色谱-串联质谱分析及数学集合理论寻找水牛角特征肽。首先,nano LC-LTQ-Obitrap-MS应用于水牛角、牦牛角、山羊角及猪蹄甲经胰蛋白酶酶切后的多肽组轮廓分析,其次,采用数学集合方法分析不同样品肽类组成的关系,当肽段仅存在于水牛角集合且不在其他集合中时,被认为是潜在的水牛角特征肽。进一步通过生物信息学比较确定了4个水牛角特征肽,以UPLC-QQQ-MS验证其专属性。结果表明4个特征肽可用于区分水牛角与山羊角、水牛角与猪蹄甲。该研究提供了一种寻找动物药特征肽的快速、简单的方法,可应用于动物药的质量评价,以保证质量可控及可追溯性。 展开更多

关键词 水牛角 蛋白质组 多肽组 特征肽 专属性

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山羊角替代羚羊角后同仁牛黄清心丸的毒理学研究 被引量：10

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作者 陈会丛 杨海润 +1 位作者 钟雨秋 闫晓东 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期668-673,共6页

目的:考察同仁牛黄清心丸(山羊角替代羚羊角)的毒性,为该药的临床安全应用提供实验参考。方法:选用SPF级ICR小鼠进行急性毒性实验,测定最大给药量。将SPF级大鼠随机分为对照组、替代前同仁牛黄清心丸组(3.060g生药·kg-1·d-1)... 目的:考察同仁牛黄清心丸(山羊角替代羚羊角)的毒性,为该药的临床安全应用提供实验参考。方法:选用SPF级ICR小鼠进行急性毒性实验,测定最大给药量。将SPF级大鼠随机分为对照组、替代前同仁牛黄清心丸组(3.060g生药·kg-1·d-1)和替代后同仁牛黄清心丸高、中、低剂量(3.570、1.785、0.893g生药·kg-1·d-1)组,每日按1.0m L/100g灌胃给药1次,每周给药6d,连续灌胃给药26周,停药恢复4周。给药期间及恢复期间,观察大鼠的一般状况,并记录每周的进食量和体质量变化。给药期和恢复期结束后分别检测大鼠血液学指标和血清生化指标,取主要脏器并计算脏器指数,同时进行系统观察和组织病理学检查。结果:替代后同仁牛黄清心丸最大给药量为30.000g生药/kg,给药过程中未见动物死亡,小鼠体质量增长、摄食量及大体解剖与空白对照组相比较均无明显差异。长期毒性实验中,与同期对照组比较,各给药组动物一般状况、行为活动、体质量等检查均未见异常;大鼠摄食量在给药期间时有低于对照组,但替代后与替代前组比较无明显差异,给药组个别血液学指标和血液生化指标虽与对照组比较或高或低,但均在本实验室正常参考值范围内;病理学检查对照组及给药组均有少数动物个别组织出现异常,但与对照组相比,各给药组均未出现与药物相关的毒性病理病变。结论:一日累计给药量30.000g生药/kg剂量,相当于人日用剂量的420倍,小鼠无明显不良反应。长期毒性实验提示山羊角替代羚羊角后同仁牛黄清心丸对大鼠给药量3.570 g生药·kg-1·d-1以下对大鼠用药安全。 展开更多

关键词 同仁牛黄清心丸 山羊角 替代 羚羊角 急性毒性 长期毒性

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水牛角水解提取物的除钡方法探析 被引量：1

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作者 尚强 刘岩 +2 位作者 林夏 王振中 徐连明 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2011年第5期16-18,共3页

目的:探索水牛角硫酸水解提取物钡残留消除方法。方法:以pH为指标调控氢氧化钡用量,中和水牛角硫酸水解液,浓缩,干燥,制成水牛角提取物,以原子吸收光谱法测定其提取物含量。结果:pH与提取物钡残留随氢氧化钡溶液用量增加相应升高,当pH&l... 目的:探索水牛角硫酸水解提取物钡残留消除方法。方法:以pH为指标调控氢氧化钡用量,中和水牛角硫酸水解液,浓缩,干燥,制成水牛角提取物,以原子吸收光谱法测定其提取物含量。结果:pH与提取物钡残留随氢氧化钡溶液用量增加相应升高,当pH<3.20时,未检测到钡残留。结论:控制氢氧化钡用量,使中和液pH保持在3.20以下,可以有效除去提取物中钡残留。 展开更多

关键词 水牛角 钡残留 原子吸收光谱法 PH

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