人补体C1INH基因的原核表达及其抗血清的制备

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作者 许燕 王洪梅 +6 位作者 朱其军 武建明 宋玲玲 杨宏军 刘晓 何洪彬 王立群 《家畜生态学报》 北大核心 2012年第2期8-12,30,共6页

采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌;IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-P... 采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌;IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析表明,pET32a-C1融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6 400;Western-blot检测显示,抗血清可与原核表达的C1INH蛋白进行特异性结合,为进一步检测真核表达蛋白及研究rhC1INH的功能活性,并为C1INH的临床检测奠定基础。 展开更多

关键词 人补体c1inh 原核表达 抗血清

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重组人C1酯酶抑制剂中rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH含量检测

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作者 秦玺 姚文荣 +5 位作者 丁有学 史新昌 韩春梅 陶磊 李永红 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1911-1916,共6页

目的:分析重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中相关蛋白rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量。方法:采用反相高效液相色谱法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对4批样品中的相关蛋白进行检测。结果:低浓度下,rhC1INH对... 目的:分析重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中相关蛋白rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量。方法:采用反相高效液相色谱法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对4批样品中的相关蛋白进行检测。结果:低浓度下,rhC1INH对照品、rcc-rhC1INH对照品和ox-rhC1INH对照品能够较好分离。rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH 2种对照品质量浓度为0.2、1和1.4 mg·mL^(-1)时的回收率均在85%～115%的范围内。对同1批3个待测样品进行测定,rcc-rhC1INH含量为(0.082±0.008)%,RSD为9.8%;ox-rhC1INH含量为(0.35±0.05)%,RSD为14.3%,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度。4批测试样品中,rcc-rhC1INH的含量分别为0.083%、0.021%、0.033%、0.042%,ox-rhC1INH的含量分别为0.34%、0、0、0。结论:经方法学验证,RP-HPLC方法可用于rhC1INH中rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量检测。 展开更多

关键词 重组人C1酯酶抑制剂(rhc1inh) 反相高效液相色谱 rcc-rhc1inh ox-rhc1inh 含量检测

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遗传性血管性水肿患者C1 INH和C4测定结果 被引量：2

3

作者 任华丽 张宏誉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期216-217,共2页

目的评估速率散射比浊法测定C1INH和C4的临床应用价值。方法应用速率散射比浊法测定60份(HAE23例,正常人37例)血清样本,并与免疫单扩散法比较。结果HAE患者的C1INH和C4水平与正常对照组比较有统计学显著性差异(P<0.01),两种方法测定... 目的评估速率散射比浊法测定C1INH和C4的临床应用价值。方法应用速率散射比浊法测定60份(HAE23例,正常人37例)血清样本,并与免疫单扩散法比较。结果HAE患者的C1INH和C4水平与正常对照组比较有统计学显著性差异(P<0.01),两种方法测定结果的相关性良好(P<0.01)。速率散射比浊法批内变异系数小于4.6%,批间变异系数小于4.9%。结论速率散射比浊法测定血清C1INH和C4含量结果可靠,操作简便,适合于临床应用。 展开更多

关键词 速率散射比浊 c1inh C4 遗传因素 血管性水肿 含量测定

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IFNγ对U937细胞C1抑制物合成调控作用的研究 被引量：1

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作者 陈晓韧 谢佩蓉 郑萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期250-252,共3页

为研究ＩＦＮγ对Ｃ１抑制物（Ｃ１ＩＮＨ）合成的调控作用，采用ＥＬＩＳＡ双夹心法检测了经不同剂量ＩＦＮγ刺激后Ｕ９３７细胞培养上清中Ｃ１ＩＮＨ的含量。结果表明：经ＰＭＡ预先作用７２ｈ后的Ｕ９３７细胞本身能合成微量Ｃ１Ｉ... 为研究ＩＦＮγ对Ｃ１抑制物（Ｃ１ＩＮＨ）合成的调控作用，采用ＥＬＩＳＡ双夹心法检测了经不同剂量ＩＦＮγ刺激后Ｕ９３７细胞培养上清中Ｃ１ＩＮＨ的含量。结果表明：经ＰＭＡ预先作用７２ｈ后的Ｕ９３７细胞本身能合成微量Ｃ１ＩＮＨ，但在培养第２天后才能检测到。加入ＩＦＮγ作用后，细胞Ｃ１ＩＮＨ合成增加，培养第１天即可测得。说明ＩＦＮγ对Ｕ９３７细胞Ｃ１ＩＮＨ的合成有上调作用并呈时间和剂量依赖性，当其剂量达到１０００～１００００ｕ／ｍｌ时，与对照相比Ｃ１ＩＮＨ合成量有极显著性增加（Ｐ＜０．００１）。 展开更多

关键词 c1inh 补体调节蛋白 干扰素

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肝炎肝硬化患者血清sIL-6R和sgp130变化的研究 被引量：4

5

作者 赵亚平 王美左 +1 位作者 王加林 侯健 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期253-254,共2页

为了探讨肝炎肝硬化（ＨＣ）患者血清可溶性白介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）和可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）含量的变化及其临床意义，运用酶联免疫吸附法检测了３４例ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐｌ３０含量。结果表明：①活动... 为了探讨肝炎肝硬化（ＨＣ）患者血清可溶性白介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）和可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）含量的变化及其临床意义，运用酶联免疫吸附法检测了３４例ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐｌ３０含量。结果表明：①活动性和静止性ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平均高于正常对照（Ｐ＜０．０１），ｓＩＬ－６Ｒ／ｓｇｐ１３０比值ＨＣ患者低于正常人，活动性ＨＣ患者低于静止性ＨＣ患者（Ｐ＜０．０１）；②血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平之间呈正相关（ｒ＝０．４１７，Ｐ＜０．０５），ｓＩＬ－６Ｒ、ｓｇｐｌ３０水平与血清Ｂｉｌ－Ｔ水平间亦呈正相关（分别为ｒ＝０．４７４，ｒ＝０．４８２，Ｐ＜０．０１），而与血清ＡＬＴ水平无明显相关性（分别为ｒ＝０．１９３，ｒ＝０．１５２，Ｐ＞０．０５）。提示：血清ｓＩＬ－６Ｒ。 展开更多

关键词 肝炎 肝硬化 白细胞介素6 受体 GP130

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IFNγ和 IL- 6对人肝癌细胞系C1抑制物合成的调控(英文)

6

作者 陈晓韧 谢佩蓉 郑萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期84-86,91,共4页

目的为研究 IFNγ或 IL - 6对肝癌细胞系 C1抑制物 (C1INH)合成的调控作用。方法用 EL ISA双夹心法检测了经其刺激后 Hep G2和 SMMC7712细胞培养上清中 C1INH的含量。结果两细胞系自身能合成少量 C1INH。 IFNγ和 IL - 6可通过不同的途... 目的为研究 IFNγ或 IL - 6对肝癌细胞系 C1抑制物 (C1INH)合成的调控作用。方法用 EL ISA双夹心法检测了经其刺激后 Hep G2和 SMMC7712细胞培养上清中 C1INH的含量。结果两细胞系自身能合成少量 C1INH。 IFNγ和 IL - 6可通过不同的途径上调两种细胞 C1INH的合成 ,且 IFNγ的作用强于 IL- 6。结论此结果提示有可能用 IFNγ和 IL- 6治疗 C1INH缺乏病。 展开更多

关键词 IFNΓ IL-6 肝肿瘤 C1抑制物

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罕见病新药:ecallantide

7

作者 Creaty 《中国处方药》 2010年第3期57-57,共1页

遗传性血管性水肿（HAE）是一种罕见的遗传性疾病,致病原因是编码C1酯酶抑制剂（C1INH）的基因突变。C1INH调节几种生物途径，其中包括血管舒缓素一激肽级联反应。HAE的特征是身体多个部位出现间歇性水肿，包括喉部、皮肤、胃肠道粘膜... 遗传性血管性水肿（HAE）是一种罕见的遗传性疾病,致病原因是编码C1酯酶抑制剂（C1INH）的基因突变。C1INH调节几种生物途径，其中包括血管舒缓素一激肽级联反应。HAE的特征是身体多个部位出现间歇性水肿，包括喉部、皮肤、胃肠道粘膜和生殖泌尿系统。HAE发作时患者非常痛苦，常持续1～5天，喉部血管水肿甚至可以致命。 展开更多

关键词 遗传性血管性水肿 罕见病 新药 生殖泌尿系统 遗传性疾病 c1inh 血管舒缓素 胃肠道粘膜

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免疫学检验与临床

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《中国医学文摘（检验与临床）》 2005年第6期337-344,共8页

遗传性血管性水肿患者C1INH和C4测定结果，透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价，血清超敏C反应蛋白和低密度脂蛋白测定对糖尿病并发动脉粥样硬化的价值，E-选择素基因多态性与脑梗死的相关性研究，噪声作业工人血浆热应激蛋白70... 遗传性血管性水肿患者C1INH和C4测定结果，透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价，血清超敏C反应蛋白和低密度脂蛋白测定对糖尿病并发动脉粥样硬化的价值，E-选择素基因多态性与脑梗死的相关性研究，噪声作业工人血浆热应激蛋白70抗体与高血压关系的研究，肾小管损害各种早期诊断指标的评价…… 展开更多

关键词 免疫学检验 血清超敏C反应蛋白 热应激蛋白70抗体 血清免疫球蛋白 临床 动脉粥样硬化 早期诊断指标 测定结果 c1inh

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新鲜冰冻血浆治疗遗传性血管性水肿一例 被引量：3

9

作者 汤蕊 张宏誉 甘佳 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期98-98,共1页

遗传性血管性水肿（HAE）是常染色体显性遗传病，表现为皮肤黏膜发作性、局限性水肿，部分患者可死于喉水肿。其病因与补体第一成分抑制因子（C1INH）含量减低或功能缺陷有关，但我国尚无C1INH制剂。目前新鲜冰冻血浆（FFP）对HAE急性... 遗传性血管性水肿（HAE）是常染色体显性遗传病，表现为皮肤黏膜发作性、局限性水肿，部分患者可死于喉水肿。其病因与补体第一成分抑制因子（C1INH）含量减低或功能缺陷有关，但我国尚无C1INH制剂。目前新鲜冰冻血浆（FFP）对HAE急性期治疗有效。 展开更多

关键词 遗传性血管性水肿 新鲜冰冻血浆 血浆治疗 常染色体显性遗传病 局限性水肿 c1inh 急性期治疗 皮肤黏膜

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重组人C1酯酶抑制剂中异天门冬氨酸含量检测 被引量：2

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作者 秦玺 姚文荣 +5 位作者 丁有学 史新昌 毕华 陶磊 李永红 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1905-1910,共6页

目的:检测重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中异天门冬氨酸(Iso Asp)的含量。方法:采用异天冬氨酸甲基转移酶催化结合反相高效液相色谱的方法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对3批样品的Iso Asp含量进行检测... 目的:检测重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中异天门冬氨酸(Iso Asp)的含量。方法:采用异天冬氨酸甲基转移酶催化结合反相高效液相色谱的方法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对3批样品的Iso Asp含量进行检测。结果:浓度分别为10、30、60 pmol/60μL的SAH标准品的检测结果均在90%～110%范围内。对同一批3个待测样品进行测定,IsoAsp含量为(0.413±0.020)μmol IsoAsp/g rhC1INH,RSD为4.8%,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度。3批测试样品中,IsoAsp含量分别为0.633、0.827、0.487μmol IsoAsp/g rhC1INH。结论:经方法学验证,异天门冬氨酸检测试剂盒结合RP-HPLC方法适用于rhC1INH中IsoAspr的含量检测,可为类似蛋白制品中该项目的检测提供借鉴。 展开更多

关键词 重组人C1酯酶抑制剂(rhc1inh) 反相高效液相色谱 异天门冬氨酸(IsoAsp) 含量检测

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重组人C1酯酶抑制剂中聚合物含量的测定

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作者 韩春梅 姚文荣 +4 位作者 丁有学 于雷 陶磊 秦玺 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1917-1921,共5页

目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相... 目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相,流速0.5 mL·min^(-1)进行洗脱。结果:在25.0～85.0μg·m L^(-1)浓度范围内,rh C1INH标准品的峰面积与浓度的线性关系良好(R^2平均值为0.997)。rh C1INH样品中分离到3个聚合物峰,采用面积归一法计算6次进样的聚合物的平均含量分别为0.11%、0.15%和0.60%,RSD分别为10.7%、9.0%和3.9%。4批次rh C1INH样品中总聚合物的含量分别为0.82%、1.01%、0.97%和0.92%。结论:SEC-HPLC方法适用于rh C1INH中聚合物的检测,为其聚合物质量标准的建立和产品评价奠定了基础。 展开更多

关键词 重组人C1酯酶抑制剂(rhc1inh) 分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC) 聚合物含量 质量控制 生物技术药物

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