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RNA干涉抑制宫颈癌CaSki细胞株HPV16 E6基因的研究 被引量：27
1
作者 牛晓宇 彭芝兰 王和 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1257-1262,共6页
背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工... 背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工作量大、耗费多等问题。本研究采用最新的RNA干扰技术干扰宫颈癌CaSki细胞中HPV16E6转录,以了解其能否特异性抑制HPV16E6基因及其时效性如何。方法:设计合成针对HPV16E6的荧光标记siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过荧光照片计数荧光细胞占所有细胞的比例计算转染效率;测定转染后不同时间点的细胞凋亡率;RT-PCR测定HPV16E6mRNA变化,Westernblot和流式细胞仪检测转染前后蛋白表达情况。结果:相差显微镜荧光照片显示细胞转染的效率为81%。HPV16E6siRNA转染细胞后24h、48h、5天凋亡率分别为7.7%、11.8%和37.4%,转染9天时凋亡率下降至12.6%。RT-PCR扩增结果显示,细胞转染前HPV16E6mRNA的量与siRNA阴性对照比较没有显著性差异,但转染后24h、48h、5天和9天分别减少了77%、83%、59%和41%;而作为内对照的β-actinmRNA在转染前后无变化。流式细胞仪定量测定HPV16E6蛋白,结果显示转染后24h、48h和5天,蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%和71.3%;9天时抑制率有下降,但仍可达57. 展开更多
关键词 RNA干扰 HPV16 E6 宫颈肿瘤 caski细胞
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莪术醇对人宫颈癌CASKI细胞增殖抑制及促凋亡作用的研究 被引量：23
2
作者 高艳娥 郭金珠 +2 位作者 惠慧 王咏雪 王桂贤 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第10期1836-1839,共4页
目的:探讨莪术醇对人宫颈癌CASKI细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml不同浓度莪术醇作用于人宫颈癌CASKI细胞后,MTT法检测CASKI细胞的增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡率变化;... 目的:探讨莪术醇对人宫颈癌CASKI细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml不同浓度莪术醇作用于人宫颈癌CASKI细胞后,MTT法检测CASKI细胞的增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡率变化;电镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学特征。结果:12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml的莪术醇对宫颈癌CASKI细胞均有不同程度的增殖抑制作用,在一定范围内,具有浓度-时间依赖性。流式细胞仪分析结果显示:50μg/ml、100μg/ml莪术醇作用于宫颈癌CASKI细胞24h,可阻滞细胞周期于G2/M期,并诱导部分细胞凋亡。电镜下可见凋亡细胞及凋亡小体,且100μg/ml组细胞凋亡改变较50μg/ml组更明显。结论:莪术醇能明显抑制CASKI细胞的体外增殖,且可阻滞CASKI细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 莪术醇 宫颈癌 caski细胞 细胞周期 凋亡
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南赤瓟醇提物通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡 被引量：7
3
作者 周琴 杨小姣 +5 位作者 石孟琼 刘英 覃慧林 冯天艳 张永峰 尉小琴 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第1期42-49,共8页
目的:研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/m TOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法:用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25... 目的:研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/m TOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法:用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,流式细胞术测定细胞周期DNA含量及亚G_1凋亡峰,ELISA试剂盒检测Caski细胞中Caspase-9和Caspase-3活性及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)含量,Real-time PCR测定P53、Bcl-2和Bax m RNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值,Western blot测定PI3K、Akt、m TOR磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt、p-m TOR),并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR比值。结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/m L)能显著抑制Caski细胞增殖,并将其阻滞于G_2/M期;可抑制pPI3K、p-Akt和p-m TOR蛋白表达水平,降低pPI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR比值;上调P53和Bax m RNA表达,下调Bcl-2 m RNA及Bcl-2与Bax比值;降低线粒体中Cyt C含量,升高胞浆中Cyt C含量;增强Caspase-9和Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)。结论:南赤瓟醇提物诱导Caski细胞凋亡的作用机制与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路磷酸化有关。 展开更多
关键词 南赤瓟 宫颈癌 caski细胞 PI3K/Akt/mTOR信号通路
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抗HPV16核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响 被引量：4
4
作者 饶智国 张积仁 +2 位作者 郑燕芳 周惠 屈良鹄 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期149-152,共4页
背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一;高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件。而放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法。本研... 背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一;高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件。而放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法。本研究旨在探讨抗HPV16E6核酶(ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法:以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果:点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi-P、CaSKi中明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi-P、CaSKi明显增加,克隆形成率明显下降(P<0.05),CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较X射线照射后CaSKi-P、CaSKi明显增加(P<0.01);CaSKi-R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi-P、CaSKi明显升高,bcl-2明显减少(P<0.01)。结论:转染抗HPV16E6-ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对放射治疗的敏感性增加? 展开更多
关键词 核酶 乳头瘤病毒 子宫颈肿瘤 放射治疗 放射增敏 放射敏感性 HPV16核酶 caski细胞 影响
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阿司匹林诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡及其分子机制 被引量：5
5
作者 杨建林 韩钰 +1 位作者 周永芹 张伟 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第15期7-9,共3页
目的探讨阿司匹林对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及机制,为其用于宫颈癌的临床治疗提供依据。方法体外培养Caski细胞,分别以1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mmol/L阿司匹林干预。采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪测定... 目的探讨阿司匹林对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及机制,为其用于宫颈癌的临床治疗提供依据。方法体外培养Caski细胞,分别以1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mmol/L阿司匹林干预。采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3等凋亡相关基因表达。结果阿司匹林干预后Caski细胞增殖明显受抑,且呈时间和剂量依赖性;Caski细胞G0/G1期和G2/M期比例明显下降,S期比例升高;细胞凋亡率明显升高;Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase-3活化。结论阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成,改变其细胞周期时相分布,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 阿司匹林 caski细胞 细胞凋亡 分子机制
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花椒抗宫颈癌Caski细胞作用及其机制的初步研究 被引量：13
6
作者 袁太宁 肖长义 汪鋆植 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1119-1120,共2页
目的研究花椒挥发油抗宫颈癌Caski细胞作用及其可能的机制。方法花椒挥发油按不同时间（24,48,72 h）及不同浓度（0.5～8 mg/ml）分别处理Caski细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。结果4 mg/ml花椒挥发... 目的研究花椒挥发油抗宫颈癌Caski细胞作用及其可能的机制。方法花椒挥发油按不同时间（24,48,72 h）及不同浓度（0.5～8 mg/ml）分别处理Caski细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。结果4 mg/ml花椒挥发油处理Caski细胞72h可显著地抑制Caski细胞增殖,1 mg/ml花椒挥发油处理Caski细胞72 h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少。结论花椒挥发油可抑制Caski细胞增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 花椒 caski细胞 细胞凋亡
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不同温度热疗对宫颈癌Caski细胞坏死和凋亡的分析 被引量：5
7
作者 周菊梅 唐劲天 +3 位作者 廖遇平 王晓文 杜乐辉 张莹莹 《中国微创外科杂志》 CSCD 2009年第3期254-257,共4页
目的探讨不同温度热疗对宫颈癌Caski细胞坏死和凋亡的影响。方法采用水浴对宫颈癌Caski细胞行43℃,45℃,47℃实验组和37℃对照组热疗,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏... 目的探讨不同温度热疗对宫颈癌Caski细胞坏死和凋亡的影响。方法采用水浴对宫颈癌Caski细胞行43℃,45℃,47℃实验组和37℃对照组热疗,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏死率,免疫组化检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果45℃,47℃组的细胞增殖抑制率在24h、48h、72h、96h分别为76.11%±5.32%、81.08%±4.03%、74.71%±3.78%、72.16%±4.75%和88.57%±3.77%、91.33%±2.43%、91.09%±1.17%、92.05%±1.67%,明显高于43℃组的26.57%±3.46%、25.49%±2.76%、22.80%±3.16%、26.87%±4.01%(q=10.41,18.23,14.53,13.57,P<0.05;q=14.41,21.62,16.03,16.01,P<0.05)。45℃与47℃组细胞增殖抑制率在24h、72h、96h的差异无显著性(q=3.01,1.49,2.44,P>0.05)。45℃组的细胞凋亡率最高,为12.82%±1.77%,与其他各组之间的差异具有显著性(F=18.69,P<0.05)。47℃组的细胞坏死率最高,为39.15%±5.67%,各组之间的差异均有显著性(F=69.16,P<0.05)。PCNA的表达随着温度的增加而降低,45℃,47℃组的平均光密度值(average optical density,AOD)分别是0.22±0.02、0.21±0.01,与37℃对照组0.28±0.02相比差异具有显著性(q=4.75,5.76,P<0.05)。结论45℃及以上的热疗能够明显抑制Caski细胞的增殖,增加凋亡和坏死率,降低PCNA的表达。 展开更多
关键词 热疗 caski细胞 细胞凋亡 PCNA蛋白
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过表达β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)促进人宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移 被引量：4
8
作者 姜亚运 王婷 +4 位作者 王晋蜀 夏菁 苟理尧 刘梦瑶 张彦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1499-1502,共4页
目的探讨β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)的高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖和迁移的影响。方法含ICAT基因腺病毒(Ad ICAT)感染Caski细胞,采用实时定量PCR检测ICAT mRNA水平,Western blot法检测ICAT蛋白水平;MTT法检测各组细胞增殖能力... 目的探讨β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)的高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖和迁移的影响。方法含ICAT基因腺病毒(Ad ICAT)感染Caski细胞,采用实时定量PCR检测ICAT mRNA水平,Western blot法检测ICAT蛋白水平;MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM小室迁移实验检测细胞迁移能力。结果 Ad ICAT感染后,Caski细胞的ICAT mRNA和蛋白水平均显著增加;过表达ICAT后,促进Caski细胞的增殖,S期细胞比例明显增加,细胞迁移能力增强。结论 Caski细胞过表达ICAT后,促进其增殖和迁移。 展开更多
关键词 caski细胞 β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT) 增殖 迁移 细胞周期
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维生素C诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡及其分子机制的研究 被引量：4
9
作者 杨建林 韩钰 +1 位作者 周永芹 张伟 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期143-147,共5页
为了研究维生素C对人宫颈癌Caski细胞体外抑制、诱导凋亡的作用及其分子机制,使用不同剂量维生素C处理人宫颈癌Caski细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测Cas-ki细胞周期变化;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DN... 为了研究维生素C对人宫颈癌Caski细胞体外抑制、诱导凋亡的作用及其分子机制,使用不同剂量维生素C处理人宫颈癌Caski细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测Cas-ki细胞周期变化;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和E6的表达以及Caspase 3的激活;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变.分析发现,维生素C可显著抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,呈现明显的时间和剂量依赖性;将细胞阻滞于S期;诱导细胞凋亡,下调Bcl-2和E6、上调Bax蛋白表达,促进Caspase3活化,降低线粒体膜电位.表明维生素C在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,诱导细胞凋亡. 展开更多
关键词 维生素C caski细胞 凋亡机制
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雷公藤内酯醇对人宫颈癌CaSki细胞株的体外作用研究 被引量：4
10
作者 宁维翾 周英 +1 位作者 顾江红 王联欢 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期225-227,共3页
目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)TPL作用24、48、72h后对CaSki细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫化学法检测Ki... 目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)TPL作用24、48、72h后对CaSki细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫化学法检测Ki-67及p53蛋白表达的改变。结果倒置相差显微镜观察可见TPL处理后细胞皱缩变圆变粗糙,体积缩小,且不断地脱落悬浮于培养液中,数量减少,细胞间隙增大,且随药物浓度增加及作用时间延长,这种变化趋于明显。5、10、20ng/ml TPL在体外对CaSki细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。免疫细胞化学检测显示TPL作用后CaSki细胞Ki-67及p53蛋白表达下调,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。结论 TPL可抑制CaSki细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制癌细胞Ki-67及p53蛋白表达有关。 展开更多
关键词 雷公藤内酯caski细胞 细胞增殖 细胞凋亡 KI-67抗原 肿瘤抑制蛋白质P53
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吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响 被引量：4
11
作者 颜为红 邹坤 +6 位作者 贺海波 张永峰 李小妹 李小琴 杨小姣 汪鋆植 邓张双 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第3期247-254,共8页
目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测... 目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测p16、cyclin D1和CDK4m RNA表达水平;Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。结果:RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖,其作用24 h的IC50值为12.33μmol/L;升高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达,降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值,上调p16的m RNA表达,下调cyclin D1和CDK4的m RNA表达。结论:RCE-4可抑制Caski细胞的增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路激活有关。 展开更多
关键词 RCE-4 细胞周期 caski细胞 Ras/Erk信号通路 p16/cyclinD1/CDK4信号通路
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CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用 被引量：3
12
作者 康楷 胡丽娜 +1 位作者 董晓静 朱元方 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期1244-1248,共5页
对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering摘要目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧... 对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering摘要目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用。结果:成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%。结论:pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达。 展开更多
关键词 RNA干扰 CXCR4 逆转录病毒 宫颈癌 caski细胞
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shRNA介导的hWAPL表达沉默对人宫颈癌CaSki细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2
13
作者 潘巍巍 徐营 +3 位作者 曹利仙 沈忠飞 郭连军 宋方洲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1213-1218,共6页
目的:为探讨人半翼(hWAPL)蛋白在细胞增殖与凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究用RNA干扰技术抑制hWAPL基因的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞CaSki细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western bl... 目的:为探讨人半翼(hWAPL)蛋白在细胞增殖与凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究用RNA干扰技术抑制hWAPL基因的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞CaSki细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blotting检测hWAPL shRNA的干扰效率;MTT检测细胞增殖;Annexin V-PE和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;蛋白质印迹分析凋亡蛋白cleaved caspase-3和细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达。裸鼠荷瘤模型体内研究hWAPL沉默对CaSki细胞增殖的影响。结果:实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果表明,筛选到的hWAPL shRNA能有效抑制内源hWAPL的表达。MTT实验表明shRNA介导的hWAPL表达沉默显著抑制CaSki细胞的增殖。Annexin V-PE分析结果表明,hWAPL沉默增加了凋亡细胞数目。细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;蛋白质印迹结果显示cleaved caspase-3、p21和p27表达增加;裸鼠成瘤实验表明,hWAPL沉默的肿瘤体积减小,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达增加。结论:hWAPL沉默抑制CaSki细胞增殖,促进细胞凋亡,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。 展开更多
关键词 hWAPL蛋白 短发夹RNA 细胞凋亡 caski细胞
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载体介导的RNAi技术抑制宫颈癌CaSki细胞E7基因的表达 被引量：2
14
作者 王丹青 彭芝兰 +1 位作者 牛晓宇 李大可 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-8,48,共4页
目的探讨H PV 16E 7特异性小干扰RNA(s iRNA)表达载体对宫颈癌C aSk i细胞E 7基因的抑制作用。方法构建H PV 16 E 7特异性s iRNA表达载体,利用脂质体转染C aSk i细胞,以荧光定量RT-PCR及W esternb lot检测其对E 7 mRNA及蛋白表达的影响... 目的探讨H PV 16E 7特异性小干扰RNA(s iRNA)表达载体对宫颈癌C aSk i细胞E 7基因的抑制作用。方法构建H PV 16 E 7特异性s iRNA表达载体,利用脂质体转染C aSk i细胞,以荧光定量RT-PCR及W esternb lot检测其对E 7 mRNA及蛋白表达的影响。结果3种表达载体P 1、P 2、P 3均能抑制C aSk i细胞E 7基因mRNA和蛋白的表达,其中载体P 1抑制作用最强,在转染后3周,对E 7 mRNA和蛋白的抑制率分别为92.86%和81.0%。结论H PV 16E 7 s iRNA表达载体能有效地抑制宫颈癌C aSk i细胞E 7基因的表达。 展开更多
关键词 HPV16E7 小干扰RNA表达载体 宫颈癌 caski细胞 RNA干扰
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HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究 被引量：2
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作者 焦庆昉 易发平 +6 位作者 汪长东 袁成福 刘勒 兰欢 符少月 艾青 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期115-119,共5页
目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未... 目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 细胞毒性T淋巴细胞 caski细胞 树突状细胞
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带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用 被引量：2
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作者 符少月 焦庆昉 +3 位作者 黄启彬 刘潇淇 易发平 宋方洲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期512-516,共5页
目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillom... 目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)-16 E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC,Western blot检测E7蛋白的表达;构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型,应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)处理后,观察裸鼠肿瘤体积变化,肿瘤长出第28天后处死裸鼠,小心剥下肿瘤组织,石蜡包埋,HE染色观察各组肿瘤的细胞形态,免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:成功培养出DC并制备出DC疫苗;第28天各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组与pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较,pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小(P<0.05);免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最高,而CaSki组表达最低;免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最低,而CaSki组表达最高。结论:带有HPV-16 E6/E7DC疫苗能够诱导CTL抑制裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的生长。 展开更多
关键词 树突状细胞 人乳头瘤病毒16 T淋巴细胞 caski细胞
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大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响 被引量：2
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作者 严磊 李晶 +3 位作者 赵婷婷 王会娟 王蕾 赖国旗 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期153-158,共6页
目的构建大鼠CB1(r CB1)基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与p CDNA 3.1(+)质粒,构建pc DNA... 目的构建大鼠CB1(r CB1)基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与p CDNA 3.1(+)质粒,构建pc DNA3.1(+)-r CB1。脂质体法将其转染到HEK293和Ca Ski细胞,Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测r CB1的表达及定位,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot与实时荧光定量PCR检测r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段,测序结果和r CB1基因序列(NM_012784.4)一致。转染HEK293细胞后,r CB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染Ca Ski细胞后,r CB1使细胞凋亡率增加(P<0.05);r CB1基因上调Bax、Bad的表达,同时抑制Bcl-2的表达,与空白组比较,其差异具有显著性(P<0.05)。结论成功构建了pc DNA3.1(+)-r CB1真核表达载体,r CB1表达于细胞膜和细胞质,r CB1可以明显促进宫颈癌Ca Ski细胞凋亡,其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。 展开更多
关键词 CB1基因 HEK293细胞 caski细胞 细胞凋亡 rCB1
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多胺类似物双乙基去甲精胺联合阿司匹林高效杀伤宫颈癌Caski细胞的研究 被引量：2
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作者 杨建林 韩钰 +1 位作者 王艳林 张伟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第15期2443-2447,共5页
目的:研究多胺类似物双乙基去甲精胺(BENS)与阿司匹林联用对宫颈癌Caski细胞的生长影响以及可能的细胞学机制。方法:多胺类似物BENS联用阿司匹林孵育体外培养的人宫颈癌Caski细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞存活率,DNA Ladder以及流... 目的:研究多胺类似物双乙基去甲精胺(BENS)与阿司匹林联用对宫颈癌Caski细胞的生长影响以及可能的细胞学机制。方法:多胺类似物BENS联用阿司匹林孵育体外培养的人宫颈癌Caski细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞存活率,DNA Ladder以及流式细胞术观察各组细胞周期和凋亡率变化,Western blot检测Bcl-2、Bax和cyt-C凋亡相关基因的表达情况,化学发光法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果:BENS与阿司匹林联用能显著降低单用BENS的细胞存活率(P<0.05),同时低剂量阿司匹林就能显著增强BENS诱导细胞凋亡作用(P<0.01)。联合用药组与单独用药组相比较,细胞G0/G1期比例明显升高,S期和G2/M期比例下降;诱导细胞凋亡发生;胞浆中Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,cyt-C由线粒体释放。且SMO活性无明显改变。结论:联用低剂量阿司匹林能有效增强BENS诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用,但与多胺代谢过程无关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 癌多胺类似物 BENS 阿司匹林 caski细胞 细胞凋亡
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抗HPV16E6核酶增加宫颈癌CaSKi细胞对顺铂敏感性的研究 被引量：1
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作者 饶智国 张积仁 +3 位作者 郑燕芳 李鹏 周惠 屈良鹄 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期264-268,共5页
目的 :研究抗HPV16E6核酶 (Ribozyme)导入宫颈癌CaSKi细胞对顺铂 (DDP)敏感性的影响。 方法 :以脂质体法将抗HPV16E6 Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R ,CaSKi P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达 ,Northern杂... 目的 :研究抗HPV16E6核酶 (Ribozyme)导入宫颈癌CaSKi细胞对顺铂 (DDP)敏感性的影响。 方法 :以脂质体法将抗HPV16E6 Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R ,CaSKi P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达 ,Northern杂交检测 3种细胞中E6基因的表达。检测 3种细胞的细胞生长曲线和克隆形成实验 ,MTT法检测 3种细胞对DDP的敏感性 ,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率 ,流式细胞术检测Bcl 2 ,P5 3,Bax蛋白表达。结果 :点杂交证实核酶能在CaSKi R细胞中稳定表达 ,Northern杂交证实CaSKi R中表达E6较CaSKi P ,CaSKi明显降低。与CaSKi P和CaSKi细胞比较 ,CaSKi R细胞的生长速率明显减慢和克隆形成率下降 ,对DDP的敏感性明显增加 (P <0 .0 1) ,凋亡率明显增加 (P <0 .0 1) ,P5 3,Bax蛋白表达明显增加 ,Bcl 2蛋白表达明显减少 (P <0 .0 1) ,CaSKi P和CaSKi细胞比较无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :抗HPV16E6 Ribozyme抑制了CaSKi R细胞的生长和克隆形成率 ,CaSKi R细胞对顺铂的敏感性增加。 展开更多
关键词 核酶 人乳头瘤病毒 顺铂 药物敏感性 子宫颈肿瘤 VPV16E6 caski细胞
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siRNA靶向沉默hTERT基因对宫颈癌Caski细胞特性的影响 被引量：3
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作者 王彦 岳天孚 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第17期4199-4201,共3页
目的研究siRNA靶向沉默h TERT基因后对宫颈癌Caski细胞特性的影响。方法设计、合成特异性针对h TERT mRNA的siRNA,将其克隆入p Genesil-1.1质粒中,重组成h TERT mRNA-siRNA的表达载体,导致目的基因沉默,是由电转染入宫颈癌Caski细胞,从... 目的研究siRNA靶向沉默h TERT基因后对宫颈癌Caski细胞特性的影响。方法设计、合成特异性针对h TERT mRNA的siRNA,将其克隆入p Genesil-1.1质粒中,重组成h TERT mRNA-siRNA的表达载体,导致目的基因沉默,是由电转染入宫颈癌Caski细胞,从而产生RNA干扰作用。应用Western印迹法及RT-PCR法检测沉默h TERT基因后对于宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA的表达情况;检测细胞周期运用流式细胞仪;沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的增殖能力可通过CCK-8增殖实验检测。沉默h TERT基因后宫颈癌Caski细胞的侵袭能力可通过小室侵袭实验检测。结果 h TERT基因沉默48 h以后,与空白组及未转染组相比,转染组宫颈癌Caski细胞的蛋白及mRNA表达出现明显降低(P<0.05);细胞周期的检测结果显示S期的细胞数目明显减低,转染组的宫颈癌Caski细胞停留于G0/G1周期,空白组、转染组及未转染组相比差异显著(P<0.05);宫颈癌Caski细胞在转染组的增殖过程中被明显抑制(P<0.05);转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P<0.05)。结论 Si RNA靶向沉默h TERT基因电转染后,使宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移能力得到抑制,一定程度上改善了宫颈癌患者的预后。 展开更多
关键词 宫颈癌 HTERT基因 基因沉默 caski细胞特性 RNA干扰
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